重组人瘦素的基因构建、表达及活性鉴定

摘要:

根据NCBI中公布的人瘦素cDNA序列，设计并合成了6个89bp 左右的DNA 小片段,经重叠延伸PCR 扩增获得464bp的rhLep的完整基因片段。构建pET22b(+)/rhLep表达载体，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达。目的蛋白以包涵体的形式表达, 表达量占菌体总蛋白的50%以上。表达产物用Ni²⁺亲和层析柱纯化, SDS-PAGE结果表明,含6×His标签的目的蛋白的相对分子量约16kD。MTT比色法实验显示，当低剂量（10～30ng/mL）时，rhLep具有促进内皮细胞生长的作用；在高剂量（50～225ng/mL）时，rhLep具有杀伤人内皮细胞的活性。其最大杀伤率达到98.8%。吖啶橙荧光染色观察到高剂量rhLep对人内皮细胞有明显的凋亡作用。以上工作为进一步了解瘦素的体内体外生物活性奠定了基础。

Abstract: