单纯疱疹病毒2gD-Hsp70融合蛋白基因的构建及表达

摘要:

构建并原核表达Hsp70-HSV2gD融合蛋白。将Hsp70和HSV-2gD蛋白基因分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1， 构建成重组质粒pGEX-4T-Hsp70-gD, 并测序鉴定。重组质粒pGEX-4T-Hsp70-gD转化大肠杆菌DH5α后, IPTG诱导表达并进行 SDS-PAGE分析。表达产物纯化后做Western blot检测。将其肌注免疫BALB / c小鼠, 检测融合蛋白对免疫小鼠脾淋巴细胞增殖、γ-干扰素产生以及血清中gD IgG水平的影响。表达产物的SDS_PAGE分析发现，在相对分子量为118kD处有外源蛋白表达，与预期蛋白带一致。用GST柱得到了纯化的Hsp70-HSV2gD融合蛋白。Western blot证实，表达产物具有良好的活性。GST-Hsp70-gD组蛋白疫苗免疫的小鼠，其脾淋巴细胞刺激指数和脾淋巴细胞培养上清中γ-干扰素的水平高于其它组（P<0.05）。血清单纯疱疹病毒-2gD蛋白的抗体水平高于其它组（P<0.05）。

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