重组人IL-4大肠杆菌表达与纯化

摘要:

根据大肠杆菌密码子偏爱性优化并合成人白细胞介素4基因，以pET30a(+)为载体构建了重组表达质粒pET30a(+)/rhIL-4，将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，诱导表达并超声破菌检测重组蛋白的表达形式。采用5L发酵罐培养工程菌，发酵液OD₆₀₀为0.6时诱导3.5 h收集菌体，检测目的蛋白的表达量。收集的菌体经压榨破菌获得包涵体，通过包涵体变性、层析、透析复性等方法对rhIL-4进行纯化。采用人红细胞白血病细胞（TF-1）测定纯化的rhIL-4的生物活性。测序表明目的基因已插入载体pET30a(+)中，重组蛋白以包涵体形式表达，单位体积重组蛋白的表达量达200mg/L发酵液，建立了对包涵体形式表达的rhIL-4纯化方法，最终得率为40mg/L发酵液，纯度大于98％，回收率为20％以上。免疫印迹法检测诱导表达的重组蛋白和纯化的蛋白为IL-4，N端氨基酸序列测定结果与理论相符，生物活性检测纯化的蛋白比活性达2.5×10⁶AU/mg。这为rhIL-4进一步产业化研究建立了基础。

Abstract: