青霉素酰化酶基因的克隆与表达Ⅱ 质粒pPAl的限制性酶切图及青霉素酰化酶基因的定位

摘要:

前文报道重组质粒pPAl中9．1kb的EcoRI片段上带青霉酰化酶基因。用16种限制性内切酶消化pPAl，其中ApaI，KpnI，SacI，SacI，SmaI及XhoI等六种内切酶在pPAl上无切口； BamHI，ClaI，Sph I，BglI为单切口；Sal为双切口，AvaI，HindI及PvuI为三切口,EcoRV为五切口。经交叉双酶解法测定各片段的大小，作出质粒pPAl的限制性酶切图。在包含青霉素酰化酶基因的9．1kbEcoRI片段上，BglI有一个切口，AvaI，HindI 及PvuI都有两个切口，而EcoRV有四个切口，SalI，BamHI，ClaIKSphI不切9．1kb的EeoR I片段。HindI切9．1kb EcoR I片段为A(3．5kb)，B(2．7kb)及C(2，9kb)等三个片段。经Hind I部分水解后连接，转化大肠杆菌HB101得到一系列带不同Hind 1片段的质粒的转化子，青霉素酰化酶活性测定证明其基因位于Hin d II—A片段上。合成青霉素酰化酶仍需苯乙酸诱导，并被葡萄糖阻遏，Hind I—B片段的存在能增加青霉素酰化酶基因的表达，而c片段无显著影响。

Abstract: