麦迪霉素生物合成基因克隆研究

摘要:

利用穿梭粘粒载体pNJ1组建了麦迪霉素产生菌Streptomyces mycarolaciens 1748的基因文库，用与麦迪霉素生物台成有类似途径的放线紫红素聚酮合成酶基因Act I，Act Ⅱ为探针，从麦迪霉素产生菌的基因文库中，获得了与ActI，Act Ⅱ基因有同源性的阳性克隆，对其中PCNSBl2、6C5及11E11克隆DNA进行了酶切分析，其分子量分别为36kb，48．5kb及41．6kb。PCN6C5 DNA中包含有PCN 8B32的全部DNA片段，PCN ⅡEⅡ与PCN 8B12及PCN 6C5有6．75kb的重叠区。通过分子杂交实验，初步将麦迪霉素聚酮台成酶基因定位在PCN 8812 DNA的EcoR I—BamH I 4．02kb片段上(与Act Ⅱ基因有同源性)及PCN 8B12(6C5)，PCNIIEIIDNA BgⅡ—BgⅡ 2．42kb与PCNllE11 Bgl I—B g1 I 1Okb片段上(与Act I基因有同源性)。PCN 8B12及PCN 6C5克隆DNA在麦迪霉素聚酮合成酶基因缺陷型变株Streptomyces mycarofaciens var．68及不产抗生索的变铅青链霉菌Streptomyces lividans TK24受体菌的表达产物，经TLC及HPLC等分析表明与麦迪霉素标准品相似。

关键词:麦迪霉素，生物合成基因;聚酮合成酶基因

Abstract:

Key words:麦迪霉素，生物合成基因;聚酮合成酶基因