牛凝乳酶的结晶及其二硫键的化学修饰

摘要:

为了配合凝乳酶的蛋白质工程，围绕酶的纯化，结晶和二硫键的化学修饰进行了研究。实验结果表明采用FPLC Mono Q柱代替DEAE-纤维素柱层析可以提高同工酶A，B及其降解组分C的分离效果并缩短纯化时间。以10mg／ml的纯凝乳酶B为出发材料，在4℃1．4—2．0mol／L氯化钠条件下进行培养可以获得外形近似为正立方体晶体。化学修饰的结果证明，凝乳酶的三对二硫键处于酶分子不同的空间部位。0．72mmol／L DTT在Ph6．3条件下能还原处于分子表面的一对二硫键，经溴化氰降解分肽测定为Ｃys²⁵⁰-Cys²⁸³，还原后引起活力下降25％。在二硫键之间引入汞原子其活力与还原酶，羧甲基化酶的活力大体相同，说明Cys²⁵⁰-Cys²⁸³在维持凝乳酶具有活力的空间构象中起着一定的作用。

Abstract: