人尿激酶原全长cDNA在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达

摘要:

通过磷酸钙共沉淀技术，将含有尿激酶原cDNA的表达载体(pSV₂-PrUK)与含有二氢叶酸还原酶基因的表达质粒pSV2-dhfr-或MMTV—dhfr共转染中国仓鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶基因缺陷株(CHO-dhfr^-)。利用选择培养基选择出二氧叶酸还原酶基因表达阳性(dhfr⁺)的转化细胞灶。用溶解圈法测定尿激酶型纤溶酶原激活剂(u—PA)的生物活性，其中两株显著高于其他株细胞，命名为CLF-14和CLF-8，表达水平依次为24Iu／10⁶细胞／48h，16Iu／10⁶细胞／48h。用ELLSA测定CLF一14和cLF-8细胞上清，表现为强阳性，阳性值比阴性对照值(P／N)大于10，CLF-14和CLF-8细胞表达量分别为0．14-o．22μg／10⁶细胞／48h和0．08-O．14μg／10⁶细胞／48h。分泌产物能被抗尿激酶(UK)血清抑制，而不被抗组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的抗血清和正常兔血清抑制。

Abstract: