摘要:质粒pBR322用HindⅢ—BarnH Ⅰ双酶切作为载体，从质粒pPAd上克隆含有pac操纵基因的HindⅢ一。BglⅡl．65kb的DNA片段，得到质粒pPA41。质粒pBR322和pPA41转化染色体上含有完整pac操纵子的大肠杆菌D816，进行操纵基因滴定。大肠杆菌D816、D816(pPA4l)．D816(pBR322)在22℃摇瓶发酵96h，NIPAB法测定青霉素酰化酶活性。结果发现，在不加诱导剂时，D816(pPA41)产生的青霉素酰化酶是D816细胞的2．5倍，在加诱导剂时，D816(pPA41)产生的青霉素酰化酶是D816细胞的1．3倍。对照组D816(pBR322)细胞产生的青霉素酰化酶和：D816细胞产生的几乎一致，说明质粒pPA41的竞争滴定作用确是其上克隆的操纵基因引起的。高拷贝的操纵基因(pPA41)和pac操纵子竞争结合调节蛋白，使得pac操纵子表达增加，说明调节蛋白在pac操纵子表达过程中起阻遏作用，调节蛋白为阻遏蛋白，pac操纵子为负调控模型。R．NA—DNA点杂交检测pac基因表达，发现D816(pPA41)细胞转录产生的pac—mRNA量明显高于D816细胞，mRNA量和青霉素酰化酶活性呈现一致的趋势，证实了pac操纵子的负调控发生在转录水平。
