豇豆胰蛋白酶抑制剂cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达

摘要:

从即将成熟的豇豆予叶中分离出总RNA，逆转录合成cDNA第一条链。参照已知的几种Bowman—Birk型胰蛋白酶抑制剂基因序列，设计并合成了两段寡核苷酸引物，以单链cDNA为模板，进行PCR扩增，得到320bp的均一扩增产物，克隆到pBluescrip sK(+)的EcoRV位点上并转化大肠杆菌JM101。酶切图谱及DNA序列分析表明克隆到的片段含有编码完整80个aa的豇豆胰蛋白酶抑制剂结构基因和一段编码27aa的前导序列。利用限制酶NcoI对其前导序列进行缺失，只保留成熟蛋白结构基因上游第一个ATG密码子并克隆到大肠杆菌表达载体pKK233—2中进行表达研究，从转化细菌的提取物中检测到了外源CpTJ基因表达产物对胰蛋白酶的抑制活力。

关键词:中国科学院遗传研究所，北京100101

Abstract:

Key words:中国科学院遗传研究所，北京100101