基因工程链激酶(r—SK)纯化及其单克隆抗体制备和鉴定

摘要:

采用Rotofor等电聚焦和分子筛技术纯化大肠杆菌表达的重组链激酶(r—SK)，其纯度为97%。比活性1×10⁶IU／mg，回收率41％。分析所纯化的r—SK N端氨基酸顺序证实其1—15个氨基酸顺序与SK基因的核苷酸顺序所示3联密码子一致。以纯化r—SK为抗原，通过杂交瘤技术构建了分泌抗r—SK单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞(4D11)，该McAb属IgG1亚型．特异地作用于r-SK和C组口溶血性链球菌分泌的SK。用底物显色法测定该McAb可抑制SK对纤溶酶原的激活。Western blot法证实该McAb能识别分子量为16 250Da的r—SK的CNBr裂解片段。推测SK蛋白中第71残基至第237残基间的氨基酸顺序参与SK与纤溶酶原的结合。

Abstract: