易于基因产物加工和快速纯化的融合表达载体

摘要:

从Protein A基因酶切分离出编码完整的结合IgG的B、C区域(PABC)的相应DNA片段，克隆进噬菌体M1乳通过人工合成寡聚核苷酸引物，突变修饰B、C区域内分别含有的羟胺裂解位点，变As-Gly为Asn—A1a。利用突变修饰后的PBACm编码基因片段，构建了一组含有不同阅读框架的融合蛋白表达载体。进一步分别重组克隆了含人工合成的人胰岛索样生长因子Ⅰ(IGF—Ⅰ)、人和牛生长激素释放因子(GRF)等基因的表达质粒，在大肠杆菌中高效表达出PABC—IGF—l、PABC—hGRF、PABC-bGRF及其衍生型融合蛋白。经SDS—PAGE测定分析，每立升摇瓶的融合蛋白产量可达100mg以上。上述高效表达的PABC融合蛋白，通过固相亲和层析柱一步分离．获得SDS—PAGE鉴定为近均一分子量纯化的PABC融合表达产物。

Abstract: