摘要:分离的苏云金芽胞杆菌(Bacillus-thuringiensis)YBT-791对鳞翅目小菜蛾(Plutellaxylostella)有毒力，将其质粒DNA提纯，经HindⅢ酶切后与杀虫晶体蛋白cryⅡ基因探针杂交，显示出分子量分别为5kb和9．4kb两条DNA阳性片段。把5kb的DNA阳性片段克隆到pUCl8的HindⅢ位点上并转化大肠杆菌TGl，经酶切和杂交检测，证明斑点杂交阳性克隆子中含有5kb的cryI片段。把这个含cryⅡ基因的5kbHindⅢ片段进行亚克隆，将4kb的BamHI－Pstl酶切片段插入穿梭载体pXl61中，并用电脉冲法克隆于苏云金杆菌不产伴胞晶体的突变株中，得到产生单一cry Ⅱ基因编码的杀虫晶体蛋白的克隆菌株M一5。经电镜观察，该克隆菌株能形成出发菌YBT－791多种形态伴胞晶体中的一种方形伴胞晶体；经免疫双扩试验，它只能与Cry Ⅱ晶体蛋白抗血清形成沉淀线；经SDS—PAGE电泳，克隆菌的伴胞晶体只含有一种65kDa的晶体蛋白。生物测定结果表明它既对鳞翅目小菜蛾(Piutella xylostella)有毒性，又对双翅目致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)有毒性。
