硫霉素环化酶基因在变铅青链霉菌TK24中的表达及基因定位

摘要:

将含有硫霉素环化酶基因的重组质粒p6BCl2转化变铅青链霉菌(Streptomyceslividans)TK24，含有p6BCl2的转化子细胞抽提液分别与琉霉素生物合成阻断变株Y，发酵液以及纯化的Y。中间产物经过体外共培养可产生活性物质．化学分析表明与Y，发酵液混合后产生的是硫霉素，与纯化的Y。中间产物混合产生的是一种不稳定的活性物质。说明硫霉素环化酶基因在S.lividans TK24中得到了表达，其产物以Y。中间产物为底物并弥补了Y，中的缺陷。对p6Bcl2中4．5kb外源片段进行了限制酶酶切分析，建立了酶切图谱．利用含硫霉素环化酶基因的S．Lividans TK24转化子体外转化Y，的应用体系，将硫霉素环化酶基因定位在0．9kb Hinc I—Pst I片段上，并证明了硫霉紊环化酶的活性与IPNS同源片段无关。以上实验为进一步研究琉霉素环化酶基因的结构打下了基础。

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