利用PCR突变方法,改造了人白细胞介素-3(hIL-3)cDNA,在成熟蛋白编码顺序5＇端前突变入了XbaⅠ酶切位点和酵母类胰蛋白酶加工位点Lys-Arg的密码子。改造后的hIL-3cDNA插入大肠杆菌-酵母穿梭质粒pVT102u/α,使其准确融合于α-交配因子前导序列之后,并置于启动子ADH1调控之下。转化入酿酒酵母宿主菌S-78筛选后,30℃培养48h,上清能明显促进hIL-3依赖细胞TF-1生长。上清中分泌表达的hIL-3经ELISA鉴定并定量,其表达量大于1.0mg/L。3H-TdR掺入法测定上清中hIL-3活性为1.8×103u/ml。
杨立宏; 韩丽英; 陈常庆; 高长寿;苏成芝. 人白细胞介素-3基因在酿酒酵母中的分泌表达[J]. 生物工程学报, 1996, 12(2):
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