蓝细菌ORF469的分子克隆和缺失突变工程株的构建

摘要:

PCR扩增了蓝细菌Synechocystis sp．PCC 6803的ORF469(编码469个氨基酸的开放阅读框),进一步以pUC118为载体将其克隆到E．Coli中，构建了pOQ2质粒。通过DNA体外重组，以红霉素抗性基因取代部分克隆化ORF469片段，又构建丁缺失ORF469片段(保留部分上游和下游序列)的pOQ22质粒。用pOQ22质粒转化Synechocystis sp．PCC 6803野生株细胞，获ORF489缺失突变工程株，它在红霉素抗性培养基上生长正常。对缺失突变工程株DNA的PCR和Southern blot分析证明，Synechocystis sp．PCC 6803的ORF469已被删除。色素测定结果揭示Synechocystis sp．PCC 6803中ORF469表达产物控制细胞内不依赖光的叶绿素生物合成。

Abstract: