抗HPV16 E7-ribozyme在CV-1细胞中的稳定表达

摘要:

构建了由RSV—LTR启动子带动并能在细胞内稳定复制的Ribozyme的自身修剪表达质粒pRSV—Rz523、Ribozyme反义对照质粒pRSV—AE7及人增殖细胞核抗原基因(PCNA)启动子带动的HPVl6 E7片段(+554～+686)的真核表达质粒pPCNA—E7。经G418抗性筛选获得了稳定表达Ribozyme的CV-1细胞克隆，其表达水平约为9．Opmol／lO6个细胞，其中活性Ribozyme的量大于50fmol／lO6个细胞，分离得到的Ribozyme可在体外特异切割E7靶RNA片段。通过共转染Ribozyme(或反义对照)和底物表达质粒并筛选出细胞克隆．研究了Ribozyme在细胞中对底物表达水平的影响。初步结果显示．Rihozyme的导人可使细胞内底物E7的RNA表达水平降低了90％(反义对照使E7 RNA表达降低20％)。上述结果提示：在CV-1细胞中表达的Ribozyme不仅在体外，同时在细胞内具有一定的生物学活性，有可能应用于逆转官颈癌细胞的恶性表型。

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