人结核分枝杆菌特异性核酸探针制备及结核病PCR检测技术的初步临床应用

摘要:

采用人结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis TB)染色体DNA为模板，选择位于插入片段IS6110中884～865和568～588碱基对处的两个片段为引物，扩增出317bp的特异性片段．将其克隆进pUCl9载体。酶切图谱分析和DNA序列测定证实为目的片段。该片段经DIG标记，分别与11种分枝杆菌DNA进行Southern杂交，结果证明只与人型复合分枝杆菌发生杂交反应。利用该对引物建立的PcR检测拄术对74份结核病痰液标本进行检测，并与临床细菌快速培养结果相比较，发现48份临床阳性均为PcR阳性，在26份临床阴性标本中亦发现11份PCR检测阳性。将标本PCR产物与克隆探针进行杂交，显示两者结果完全一致。说明PCR检测体系结果可靠，其灵敏度明显高于目前临床所采用的方法，可作为一种常规技术用于结核病的临床检测。

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