枯草杆菌碱性蛋白酶Ki2基因的序列测定及M222A定点突变

摘要:

含有枯草杆菌碱性蛋白酶Ｋｉ-２基因的１.９ｋｂＤＮＡ片段用限制酶切成几个小片段，将这些片段分别插入Ｍ１３ｍｐ１８或Ｍ１３ｍｐ１９中，用通用测序引物测得全序列。所得全序列与蛋白酶Ｅ相比较，在结构基因部分仅有８个碱基不同，由此而导致两个氨基酸的差异。此１.９ｋｂ的片段插入枯草杆菌大肠杆菌穿梭质粒Ｐｂｅ-２，得到的重组质粒转化蛋白酶缺陷型的枯草芽孢杆菌ＤＢ１０４，结果表明枯草杆菌碱性蛋白酶Ｋｉ-２基因在ＤＢ１０４中能利用自身的调控元件表达并分泌到胞外。将Ｋｉ-２蛋白酶的２２２位甲硫氨酸突变成丙氨酸，突变后的Ｋｉ-２蛋白酶具有抗氧化性，但比活性比野生型的约低１倍

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