枯草杆菌蛋白酶E的蛋白质工程

摘要:

用定点突变和随机突变的方法，对枯草杆菌碱性蛋白酶E基因进行改造。突变后的基因插入大肠杆菌-枯草杆菌穿梭质粒pBE-2中，在碱性和中性蛋白酶缺陷型的枯草杆菌DBl04中进行表达，得到突变种的碱性蛋白酶．它们的突变位点分别是(M222A)、(M222A、N118S)、(M222A、N118S、Q103R)、(M222A、N118S、Q103R、D60N)。各突变种酶的性质测定 结果表明．M222A突变使酶抗氧化，N118S突变使酶增加热稳定性，Q103R和D60N突变虽然能增加酶的比活，但使酶的热稳定性大大下降，尤其是D60N突变使酶变得极不稳定。野生型碱性蛋白酶与(M222A)突变种的等电点均为8．92．而M222A，N118S)。(M222A，N118S ，Ql03R)和(M222A，118S．Q103R，D60N)突变酶分别为8.88．9.10和9．17。用Nsuc-AAPF-pNA作为底物时酶反应景适pH值为7.5～9.5，而用酪蛋白底物时最适pH值为10～12。

Abstract: