重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子包涵体提取、复性和纯化的研究

摘要:

由基因工程大肠杆菌表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—CSF)以包涵体的形式存在于细胞中，通过破菌、洗涤获得包涵体．再经过溶解、凝胶过滤、复性、疏水和离子交换柱层析得到了均一的产品，经高压液相和SDSPAGE电泳测定纯度均大于98％，rhGM—CSF的比活为3．2×10⁷IU／mg,纯化获得的rhGM—CSF为一酸性蛋白，等电点约为5．2，NH₂-末端前20个氪基酸序列测定结果与文献报道一致。rbGM—CSF的NH2-末端不均一．其中带Met的分子约占59．5％，第一个氨基酸为Ala的分子约占24．6％，为Pfo的分子约占14．6％。纯化过程中蛋白的纯化倍数为3．9，生物活性总得率为69．1％，工艺重复性好，易放大。

关键词:人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，包涵体，复性 纯化

Abstract:

Key words:人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子，包涵体，复性 纯化