摘要:利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从欧芹总RNA分离制备了苯丙氨酸脱氨酶(PAL)cDNA,重组到质粒pBluescript及pET23b中,后者转化大肠杆菌JM109DE3获得PAL的高效表达。插入片段两端共920bp的测序结果与文献符合率为9978%。工程菌细胞裂解液用SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析显示在分子量77kDa处有一条表达很强的蛋白区带,与PAL亚基分子量相符,约占菌体总蛋白的15%。用HPLC法检测到苯丙氨酸被PAL脱氨的产物肉桂酸,且该PAL酶活力特异性好,适于PKU治疗之用。