t-PA cDNA的克隆及其在毕赤酵母中的表达

摘要:

应用PCR方法，在t-PA cDNA 5′端引入合适的限制酶位点和酵母分泌信号肽，与酵母表达载体pPIC9重组，构建表达质粒pSTEY，利用LiCl转化法转化酵母菌YS108，在MM和MD平板上筛选表型，PCR筛选t-PA cDNA与酵母染色体整合而形成的阳性克隆，阳性克隆经甲醇诱导表达后，用SDS-PAGE证明表达产物的分子量为6kDa左右，用酪蛋白板溶圈法测定tPA的活性。Mut-s表型菌表达产物活性最高为2 500IU/ml,Western blot证实表达产物具有天然t-PA分子的免疫原性。

关键词:t-PA，酵母表达

Abstract:

Key words:t-PA，酵母表达