地中海拟无枝菌酸菌U-32的3-氨基5-羟基苯甲酸合成酶基因的克隆与序列分析

摘要:

地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediterranei)U-32是一种临床上重要的抗生素——力复霉素SV的产生菌。研究表明，在地中海拟无枝菌酸菌的力复霉素生物合成过程中，3-氨基5-羟基苯甲酸合成酶(AHBAS)是合成中间体C₇N母核(又称AHBA)的关键酶。通过筛选以广宿主粘粒(Cosmid)pLAFR3为载体构建的地中海拟无枝菌酸菌U-32的基因文库，获得6个阳性克隆子。将含有AHBAS基因的约2.5kb的片段克隆到pBluescript Ⅱ SK和KS上，进行酶谱分析得到其在染色体上的初步定位。序列测定表明地中海拟无枝菌酸菌U-32中的AHBA合成酶基因，由1167bp组成，起始密码子为ATG，终止密码子为TGA，共编码388个氨基酸，所克隆到的AHBA合成酶基因在大肠杆菌的启动子控制下获得诱导表达，蛋白分子量约为43kD。

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