摘要:血管内皮生长因子受体(VEGFR)是血管内皮生长因子的特异性受体, VEGFR-2在介导VEGF刺激内皮细胞增殖及血管通透性等生物学活性中起重要作用。为在大肠杆菌中实现可溶性的人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区的表达, 并鉴定其与配体结合的活性。采用重叠PCR的方法合成人血管内皮生长因子KDR胞外3区基因, 将该基因与高效表达载体pET-32a重组, 转化大肠杆菌Rosetta (DE3)中, 表达产物依次经过CM阳离子交换树脂和镍柱亲和层析纯化。利用ELISA法和体外抑制VEGF刺激的人脐静脉内皮细胞增殖实验检测表达产物与配体结合的活性。SDS-PAGE 显示, 目的蛋白主要以可溶性Trx-KDR3融合蛋白表达于胞质, 30oC时1 mmol/L IPTG诱导细菌5 h融合蛋白表达量约占胞质可溶性总蛋白的20%, 经CM阳离子交换树脂和镍柱亲合层析纯化得到纯度为95%的产物, Western blotting鉴定是目的蛋白。ELISA和体外HUVEC细胞增殖实验显示, 表达产物具有特异性结合hVEGF165的活性, 且该作用呈一定的浓度依赖性。具有配体特异性结合活性的可溶性人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区成功表达, 为靶向血管抗肿瘤治疗和相关抗体的研究奠定了基础。