摘要:

摘要:肿瘤坏死因子α(TNF)为157个氨基酸组成的细胞因子，在克隆的全良cDNA的5’端有480bp的非编码区包括76个氨基酸信号肽编码区。本文采用寡核苷酸指导下的定位基因缺失突变方法，删除了这一非编码区及信号肽序列，并在成熟TNF分子第一个氨基酸密码前插入一个翻译起始密码(ATG)，形成一个限制酶NcoI的识别位点ccATGG。然后取出含有成熟TNF全基因的Nc0I—Pst I片段，插入到原核表达载体pBv220中，获得了肿瘤坏死因子的高效表达菌株。活性检测结果表明，肿瘤坏死因子的表达量可达3．42×10。Μ／L菌液。sDs－PAGE电泳凝胶扫描结果显示，肿瘤坏死因子在大肠杆菌的表达量可占细菌可溶性总蛋白量的22．8％。抗呻瘤坏死因子单克隆抗体可以中和大肠杆菌表达的肿瘤坏死因子对L929细胞的细胞毒性。sD和ATG间插入31个核苷酸可使TNF表达量降低约10倍。

摘要:利用由pBR322衍生的链霉菌复制子探针载体pIJ2703，从吸水链霉菌应城变种菌株10－22中克隆了一段１3kb的可以自主复制的DNA，制作了携带这段DNA的杂合质粒p}Iz54的限制酶图谱。利用缺失、次级克隆等方法将基本复制区确定在2．86kb的范围内。用外切酶Ⅲ顺序缺失法不仅进一步确证了基本复制区的位置，而且将其缩小到2kb的范围内。同时，在上述试验过程中、还组建了一系列既可在大肠杆菌、又可在变铅青链霉菌中复制的双功能质粒，其中有些质粒是有用的穿梭载体。

摘要:球形芽孢杆菌BS1O(Bacillus sphaericus Strain 10，BSl0)是从我国分离得到的一株高毒力杀蚊幼虫菌株。BS1O在芽孢形成过程中产生的伴孢晶体蛋白对蚊幼虫，特别是库蚊幼虫具有强的毒杀作用。本文建构了Bs10的重组克隆，并通过合成18碱基的寡聚核苷酸序列为探针，筛选出了BSl0的重组阳性克隆〔TGl(pFL37)和TGl(pFL36)〕。重组克隆TGl(pFL37)含有编码43kd毒素蛋白的4．0kb HindⅢ的BSl0 DNA片段。Western blot分析和生物活性测定证明BS1O的43kd杀蚊毒素蛋白基因在大肠杆菌中得到表达。

摘要:HBeAg和抗－Hbe是乙型肝炎的经典标志物。HBeAg基因与HBcAg基因在DNA c区上相重叠。为要获得重组DNA衍生的HBeAg，本文从adw2亚型HBv 3．2 kb全长DNA上切取带有HBc基因的BamHI-EcoRI片段，用Bal3l和Hpa I酶处理产生一系列长度不同的片段，与载体pUR222和pUC 18构成不同的重组质粒，转化到大肠杆菌。通过平板筛选、质粒酶切图谱和抗原抗体反应等筛到高效表达HBeAg的转化株YG30l和YG302，中和试验证明了重组HBeAg的血清学特异性。用凝胶过滤、离子交换层析和亲和层析对其进行提纯并用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合western印迹法进行纯度鉴定、含量分析和分子量测定。重组HBeAg制品具有高活性、稳定和安全等特点，实验证明它可以代替血源HBeAg制成酶联药盒用于乙肝诊断检测。

摘要:编码人生长激素的结构基因(hGH)与编码小鼠金属硫蛋白的基因启动子(MT一1)融合，用显微注射法将此融台基因导入小鼠受精卵的原核中，共注射了121个受精卵、将卵移入11只假孕母鼠的输卵管中，11只母鼠中的7只生了43只小鼠。在小鼠的饮水中加入锌(zn。+)可诱导基因表达。小鼠长到30天时开始称体重、每隔10天记录体重、并与同时出生的对照小鼠体重比较。第一代雄性小鼠体重较对照组重、统计学分析有明显差异。小鼠长到三个月，切尾制备DNA，DNA斑点杂交法和Southern杂交法检测基因整合情况，43只小鼠中有18只有融合基因整合。用Northern、杂交法检测转录的人生长激素mRNA。用这三种方法同样检测了第二代和第三代小鼠，发现融合基因能代代相传，而后代小鼠的表型只在个别小鼠中保留下来。绝大多数转基因小鼠后代的体重减轻。用带人生长激素基因或不带人生长激素基因的小鼠做双亲，进行不同组合的交配，所得到的后代也不相同。

摘要:对三叶草根瘤菌Rhizobium trifolii野生型菌株ANU843及其转座子Tn5诱导的突变株nod258和nod261的侵染和结瘤能力进行了比较。Ⅲ医结瘤基因nodFE的突变林(nod258)能在地三叶草(Subterranean clover)上正常侵染和结瘤，但瘤数比ANU843所诱导的略有减少。而Ⅱ区结瘤基因nodIJ的突变株(nod261)却表现侵染力减弱，诱导无效瘤和瘤数大大减少。显微镜强察和超微结构研究表明菌株ANU843在接种后24h侵染已经从植物根毛开始，48h侵染线,(infeetioa thread)发展到表皮细胞并开始分支，接种后72h侵染线进一步发展，深入皮层细胞，这时皮层细胞已经大量分裂增生，形成瘤的分生组织。成熟的瘤细胞内充满了类菌体。而nod261突变株侵染植物比ANU843推迟了24h，侵染线的发展受阻碍，接种后72h侵染线仍然停留在根毛细胞中。Nod26l突变株所诱导的瘤细胞内没有或仅有个别类菌体，是无效瘤。这表明结瘤基因nodIJ与侵染线的正常形成和发展密切相关。

摘要:本文用海藻胶包埋丹参愈伤组织细胞，在Ls+Kto．1+NAAl培养液中常温振荡培养一个月左右，培养液抽提物经TLC和HPLC检测，表明该系统可连续分泌丹参的主要成分——丹参酮I A和隐丹参酮。此外对丹参愈伤组织细胞悬浮培养、海藻胶包埋条件，周定化细胞的稳定性以及分泌产物的特征等方面进行了比较。

摘要:酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)396是利用甘蔗糖蜜生产酒精的生产菌株，假丝酵母(Candida sp·)C₆是我们从云南温泉底泥中筛选到的一株能在45℃生长良好的耐热酵母，我们应用原生质体融合技术进行了两菌株属间融合的研究。通过亚硝基胍(NTG)诱变得到的营养缺陷型菌株396(arg^－)和C6(lys^-)，其融合频率为O．91×10^-5。从检出的融合子中挑选6株进行考核、其细胞体积平均为亲株的1．3倍，DNA含量平均为亲株的1．6倍，培养特征、形态、大小和生理生化特征表现不一，特别是糖类的同化试验。除F₂、F₁₄外，其他4株可以排除异核体形成的可能性。比较了在28℃，40℃和45℃培养条件下出发亲株396、C₆、直接亲株396(arg^-)C₆(lys^-)和融合子F₁、F₇、F₁₂，F₁₃的生长曲线、基质利用率和乙醇产率等，得到一株在40℃培养条件下糖的利用率为94．3％、乙醇产量为59．7g／L的属间融合株F₁₃。

摘要:用大鼠的骨髓瘤细胞系(1R983)与经马铃薯Y病毒(PVY)免疫的大鼠(LOU／c)脾细胞融合，建立了3类分泌抗该病毒株系特异性单克降抗体(McAB)的杂交瘤细胞系。其一对 PVYn具有特异性反应，其二对PVYo。具有特异性反应;其三对PVY n和PVYn。均产生反应。经用ELIAA双抗体夹心法和ELlsA间接法检测，上述(McAb)同TMv、CMV、TEV，AMV、 TuMV、PLRV，PVX七种植物病毒均不产生交叉反应。对上述杂交瘸纲胞系和McAb的生 物学特性及理化特性进行了鉴定。

摘要:用从人黑色素瘤细胞培液中提纯的tPA为抗原，通过杂交瘤技术获得TA₁，TA₂、TA₃和TA₄ 4株阳性杂交瘤细胞。经葡萄球菌A蛋白(SPA)亲和层析纯化抗tPA单克隆抗体(tPA．McAb)。固相酶联免疫吸附测定(ELISA)诱生含McAb的小鼠腹水，其效价达I：1O⁵。这些tPA McAb均属IgG₁亚型，特异地作用于tPA(包括基因工程生产的rtPA)，与尿激酶(uK)无反应。用底物显色法测定表明所有tPA McAb均可抑制tPA的活性。

摘要:用高压匀浆机对酿酒酵母(Saccbaromyces cerevsiae)细胞进行破碎以提取可以做为酶源和拿品零加剂的胞内蛋白质。对高压匀浆破碎细胞过程中的物理和化学因素，包括匀浆次数、操作压力、细胞碎片的尺寸分布以及悬浮液性质的影响，做了系统的研究。选择了合适的压力(60MPa)和磷酸盐悬浮液在10℃下经过6次匀浆破碎，获得了胞内蛋白质释放量0．108kg／(kg鲜酵母)。本文还就破碎细胞过程对后面的细胞碎片分离过程的影响做了探索。

摘要:本文报道了用补料分批培养方法控制限制生长底物的补料速率，获得一个限制生长底物浓度由10Ks缓慢地渐降的可控培养过程，以保证获得足够数量的准确的(Si，μi)，从而得到Ks值。用该法测定了E．Coli ATCC 15224在葡萄糖限制生长培养中的Ks值及Monod方程表达式。通过该菌胞内β-半乳糖苷酶生成与细胞比生长速率相互关系的研究，导出描述该酶生成与培养液中限制生长底物浓度相互关系的曲线方程。它很好地表明了菌体生长的环境因子与胞内酶生成的相互关系及影响，并提示可获得最多胞内酶的培养途径。