1991, 7(4).
摘要:利用与麦迪霉素生物合成有类似途径的放线紫红素聚酮缩台酶基因ActⅠ作为探针,将来源于麦迪霉素产生菌基因文库的与ActⅠ有同源性的阳性初级克隆pcN8812进一步缩小,亚克隆获得了2.4kb的麦迪霉素聚酮缩台酶基因,将其插入pwHM3载体中构建了重组质粒pcG2 DNA。pcG2 DNA在放线紫红素聚酮缩合酶基因缺陷型变株天蓝色链霉菌TKl7及螺旋霉素产生菌S.Ambofaciens中均获得表达。前者所得产物不同于麦迪霉素和放线紫红素,可能为新的杂合抗生素,后者能使螺旋霉素产量得到提高。另外pcG2 DNA在道诺红霉素产生菌调节变株S.peucetiusH6101中的表达产物经TLC及HPLC分析表明为紫红霉酮。pcG2 DNA在Tetracenomycin C产生菌S.Glaucescens中亦有一定的功能表达,而在红霉素产生菌红霉内酯阻断变株Saccharapolyspara erythraea WMH 15,26l中未观察到活性表达。推测pCG2 DNA具有一定调节或在某些聚酮类抗生素产生菌变株中超互补的功能。
袁汉英 闵永洁 石松 陶无凡 吴声积 李育阳 王启松 吕慧梅 张承圭 胡倩
1991, 7(4).
摘要:用固相亚磷酰胺法合成了人表皮生长因子基因,全长为173个核苷酸,它被分成8个寡核苷酸,分别在DNA合成仪上合成。经分离纯化后的寡聚核苷酸进行酶促连接,然后被克隆到噬菌体M13mpl8中,克隆经分子杂交、限制酶酶切以及DNA序列分析检测,证明合成的人表皮生长因子基因和设计的完全一致。将人表皮生长因子基因的DNA片段插入酵母分泌型表达载休YFD59 HindⅢ位点中,建成表达人表皮生长因子基因的质粒YFDl04,再将此质粒转化酿酒酵母,所得转化子经摇瓶发酵,发酵上清液用受体结合试验表明有人表皮生长因子表达。
1991, 7(4).
摘要:本实验构建了温度诱导的表达猪生长激素的表达载体,转化大肠杆菌N4830后,经温度诱导,获得了高效表达.由SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Westerm blot证实表达产物为猪生长激素,经扫描估测猪生长激素的表达量占大肠杆菌细胞全蛋白的30%左右。
1991, 7(4).
摘要:用谷氨酸棒杆菌质粒pxz10145转化钝齿棒杆菌T 6—13原生质体,得到自发缺失突变体pNAT65,该质粒为2.4kb,仍带有氯霉素抗性,经物理图谱分析表明,质粒pxz10145smaⅠ到claⅠ位点之间的片段已缺失,仍保留EcoRⅠ、XbaⅠ、BclⅠ三个酶的单切点。质粒pNAT65与pBR322用EcoRⅠ酶切连接得到重组质粒pNAR67,这一质粒在E.Coli中复制并表现Ap, Tc抗性,但氯霉素抗性能力大大降低,只能抗2μg/ml。
1991, 7(4).
摘要:用限制酶BamHⅠ切割质粒pDO432并经琼脂糖凝胶电泳分离,将所得荧光素酶编码序列作为插入片段。用HindⅢ和BamHⅠ切割pSVKl00去除galk基因及部分tsplice。序列作为载体,构建了一对其启动区和荧光素酶编码序列位向相反的质粒,pSV—Lucl9及pSV。Luc20。正位向的pSV—Luc20能在爪蟾卵母细胞中转录,翻译并产生活性酶蛋白。结果表明:荧光素酶基因和爪蟾卵母细胞可以构成一个监测启动子活性的有效系统。
1991, 7(4).
摘要:带有枯草杆菌B一1,3—1,4葡聚糖酶基因(bglS)7.1kb的EcoRⅠ片段,经亚克隆,将1.5kb的EcoRⅠ—PstⅠ酶切片段插入pucl9的po1ylinker上,转化E.Coil JM101后合成出β-l,3-l,4葡聚糖酶,它能专一性地降解大麦β-1,3—1,4葡聚糖和地衣多糖,酶的大部分(>50%)留在胞内,其中25%分泌到胞外。根据酶特性分析,大肠杆菌中合成的β一1,3—1,4葡聚糖酶完全与出发菌株枯草杆菌相同。
1991, 7(4).
摘要:将噬菌体T7溶菌酶基因克隆到含有可诱导性启动子LacUV 5的表达载体pARl206中。在没有诱导剂存在情况下,LacUV 5启动子的转录受到抑制。当带有重组质粒的转化菌生长到适当浓度,向培养液中加入0.4mmo1/L IPTG,LacUV 5启动子受到诱导,从而使插入的基因高水平表达,并积累大量具有生物活性的溶菌酶。噬菌体T 7溶菌酶在大肠杆菌中表达的产量平均约22mg/L。
1991, 7(4).
摘要:以龟裂链霉菌(S.Rimosus,Otcr,Sm s)和灰色链霉菌(S.Griseus,Smr,Otcs)为原始出发菌株,经NTG诱变处理,获得前者(Asp-)和后者(cys-)营养缺陷型突变株,制成109个/m1等量原生质体混合液,在岛津细胞融合装置SSH—C11融合槽(电极间距为0.5mm)内,以频率lMHz、强度800V/cm的高频交流电场作电介质,电泳15s形成原生质体珠串,旋即施加电场强度6 kV/cm、短时程20μs的直流高压方形电脉冲触发原生质体融合,在R3再生培养基上选取34971个菌落,移植于双抗基本培养基,检出四个双抗原养型融合子。它们具有亲株的优良生物学特性,生长速度较快,产素能力大,抗菌活性高。生物显影结果表明,它还产生两个亲株所不具有的抗菌活性物质。
1991, 7(4).
摘要:采用酶电极流动注射分析系统(EFIA),由固定化酶膜包括蔗糖转化酶(INV),葡萄糖变旋酶(MuT)及葡萄糖氧化酶(GOD)与氧电极共同组成的复合酶电极用于蔗糖的快速测定。实验确定每张酶膜的最适酶量(Iu比)为lNV:MUT:GOD:72:48:2.4。酶经固定化后,INV与MUT的综合回收活力>42.9%。其最适pH为5.8—6.5。最适温度范围是35—45℃。动态法和稳态法测试的线性范围分别为:5×10-4—10-1和10-5—2×10-3mol/L,响应时间分别<20s和<2 min。实验的重复性良好,变异系数<1.7%。用此酶电极测定以蔗糖为碳源的发酵液中的蔗糖含量,平均回收率达到98%。发酵液中的蔗糖分解产生的葡萄糖对本电极的干扰可通过平行运行的GOD电极来校正。连续使用的寿命至少为120h。比前年报道的14th有了显著的提高。酶膜显示了较好的保存稳定性(30天,保存于4℃蒸馏水中)和一定的抗热性(50℃,30min)。
1991, 7(4).
摘要:研究了皱褶假丝酵母脂肪酶在AOT/异辛烷反胶团中催化橄榄油水解的性能。发现在25℃,pH7.G,R=[H2O]/[AOT]:lO的条件下,脂肪酶的活力最高。腊肪酶在含水量较低的反胶团中较稳定,当R=5.4,于33℃保存12 h,活力可保持89%,底物浓度高达50%(v/V)时仍无抑制;当“水池”内存在40mmol/L的Gu2+、Co2+、Mn2+等金属离子时对酶仅有少许抑制。
1991, 7(4).
摘要:本文对葡萄糖氧化酶产生菌z—I—c的分批发酵与恒化培养进行了研究。实验发现,在以葡萄糖为生长限制性基质的恒化培养中,该产生菌的维持系数为O.04 g葡萄糖/g菌体.H,生长得率系数YmaxG=O.714 g菌体/g葡萄糖,最大比生长速率μmax=O.385h-1,饱和常数Ks=4.76g/L,理论最适稀释度Dm=0.260h-1,最大酶比活(E/x)max为2.16×103μ/mg,其值较分批发酵的最大酶比活(1.5l×103μ/mg)提高43%。当向恒化培养的补料培养基中添加0.02%的α-甲基-D-葡萄糖时,由于该葡萄糖结构类似物的诱导作用,可使(E/x)max达3.11×103μ/mg,较分批发酵之值提高106%。
1991, 7(4).
摘要:本文研究了所选反应器的气含率、混合时间和容积氧传递系数等特性。实验是在外循环气升式反应器和鼓泡式反应器的空气-水系统中进行,由所得的实验数据进行回归分析得到反应器的回归方程,并且利用性能较好的外循环气升式反应器,在酒糟废液中培养BN99真菌。结果为:废液中COD值减少了60~70%,pH值从5.2上升到6.5,菌体蛋白的含量高达38.88%,固体、液体易于分离。因此,在真菌培养和酒糟废液处理方面,外循环气升式反应器是一种性能良好的反应器。
1991, 7(4).
摘要:本文报道用自行设计的实验室规模的多级厌氧消化器处理豆腐废水的实验结果。消化器总容积5L,进水COD为f4000—28000m g/L,发酵温度30℃,COD去除率可达98%左右,每去除lg c0D可产沼气o.42~0.65L,其中甲烷含量53%以上。
1991, 7(4).
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