1992, 8(4).
摘要:本文报道在细胞生长的不同时期,加苯乙酸诱导pac基因表达,发现在细胞生长早期(0—24h),苯乙酸诱导pac基因表达的效应非常明显,诱导效率很高;随着时间的推延,苯乙酸诱导pac基因表达的作用逐渐减弱,在细胞生长中期(24~48h),诱导效率明显减弱;在细胞生长后期即静止期(48-72h),苯乙酸几乎诱导不出pac基因的表达。RNA—DNA点杂交检测各期细胞内青霉素酰化酶mRNA的量,也发现在生长早期诱导的细胞转录产生的Fac—mRNA量很高,在生长中、后期诱导的细胞转录产生的pac—mRNA量明显减少,mRNA水平和蛋白质水平变化趋势一致。上述结果表明,苯乙酸诱导青霉素酰化酶基因表达依赖于细胞生长速率,处于生长周期不同时期的细胞,诱导产生青霉索酰化酶的能力不同,细胞生长速率对Pac基因表达的影响发生在转录水平,pac基因表达与细胞生长相偶联,提示存在一个或多个与细胞生长相偶联的因子调节着pac基因的表达。
1992, 8(4).
摘要:对新型人白细胞介素-2(IL-2-ser-125)进行了精制和纯度指标的鉴定。蛋白质N端序列分析表明产品中l/3部分N端缺失Met,这种微观不均一性在等电聚焦和毛细管电泳中有所反映。此外,对新型人IL-2的含点突变残基的多肽进行氨基酸序列分析,证实确由Cys-125突变成ser。
1992, 8(4).
摘要:从猪垂体中提取出DNA,以EMBL3噬菌体作裁体,构建了染色体基因文库。用全长的猪生长激素(pGH)cDNA作探针,经原位杂交,筛选出5个阳性克隆。提取其中一个阳性克隆的DNA,通过斑点杂交,酶解和Southern印迹,表明它含有全长猪生长激素基园,将sma Ⅰ酶解后soufhem印迹为阳性的两个片段进行了亚克隆,对其中含有猪生长激素基因sma Ⅰ位点上游序列的片段进行了部分序列分析,并和已发表的相应序列进行了比较。
1992, 8(4).
摘要:文用牛α—sl酪蛋白基因cDNA为探针,筛选了以EMBL3为载体构建的牛基因组文库2×10 5pfu,得到一个阳性克隆。分别以牛α—sl酪蛋白基因cDNA全长、终止符前后序列为探针鉴定了该克隆,制作了较为详细的限制酶谱,亚克隆了相应片段,并对含有终止符和poly A加成信号的有关亚克隆进行了序列分析,结果表明:该克隆含有牛α—sl酪蛋白基因终止符下游3.5kb及上游10.2kb片段,与现有的该基因的资料相比较,限制酶谱存在部分差异,DNA序列有多处点突变,并有少量缺失。点突变在内含子和外显子均有发生,这是限制酶图谱差异的原因。
1992, 8(4).
摘要:以自构的质粒pBEl为载体,采用鸟枪法克隆枯草杆菌168突变株GRl0的α-淀粉酶基因,获得了在大肠杆菌中的表达。该基因片段位于7367bp的Bgl Ⅱ酶切片段上。利用质粒pUB110。将此片段亚克隆到枯草杆菌中,同样也获得了表达。本文还测定了该基因克隆子是否有GR10的抗葡萄糖阻遏效应。
1992, 8(4).
摘要:微弹轰击法将外源DNA导入小麦(Triticum,aestivum)未成熟胚和悬浮细胞系的完整细胞。用pCI GUS作报告基因,质粒DNA涂于钨粉微弹表层,用基因枪轰击使微弹穿透细胞壁进入小麦细胞。处理2天后,用x—glucuronide染色,对GUS基因产物的活性进行鉴定,GUS基因表达的细胞呈深蓝色的小点。小麦幼胚表面的蓝点最多可达40~50个,悬浮细胞系中GUS基因表达的细胞较少。试验表明微弹轰击法是小麦组织水平上进行外源基因导入的一个有效途径。试验对微弹轰击的有关参数及条件进行了讨论。
1992, 8(4).
摘要:用经芜菁花叶病毒(TuMV)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(Sp2/0-Agl4)融合,经3次克隆化培养和ELISA筛选,建立了5类分泌抗TuMV的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。其中4类分别对TuMV-CI株系、TuMV—C3株系、TuMV—C4株系和TuMV-c5株系具有特异性反应,第5类对TuMV 5个株系均有反应。以双抗体夹心ELISA和间接ELISA检测,上述McAb同CaMV、CMV、TMV、PVX和PVY等均不产生交叉反应,小鼠腹水McAb的滴度在1:256000--2048000之间,多为1:1024000,比常规多抗血清高400倍左右。对上述杂交瘤细胞系和McAb的生物学特性及理化性质进行了鉴定。用SDS—PAGE、Western—blotting对TuMV外壳蛋白亚基、McAb识别位点进行了分析,并就McAb区分TuMV株系进行了讨。
1992, 8(4).
摘要:本文通过在不同浓度乳酸、氨的条件下培养2F7杂交瘤细胞,考察了氨,乳酸对2F7杂交瘤细胞生长代谢过程的影响,包括对葡萄糖消耗、乳酸生成、细胞活性的影响。实验表明,当加入氨或乳酸分别达2.5mmol/L、2.5mg/ml时,对细胞产生抑制作用,5 mmol/L氨或5.0mg/m1乳酸将对细胞产生严重抑制作用。
1992, 8(4).
摘要:培养基中分别加入浓度为10-5mol/L的铜离子,滇紫草愈伤组织中色素含量提高了5.5倍,悬浮细胞中色素含量提高8.1倍。细胞培养第21天,加入浓度为10-5mol/L的L-Phe,色素的合成量最大。浓度为10-6mol/L的抗坏血酸,能明显地促进培养细胞中色素的合成。
1992, 8(4).
摘要:以牛促滤泡激素(bFSH)为抗原,制备出对bFSH特异的单克隆抗体(McAb)并进行了抗体的纯化和特性分析。以方阵交叉匹配试验挑选出最佳抗体配对,建立了一种可测定微量促滤泡激素的双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(DAS—ELIsA).用IBM—PC微机对DAS—ELISA测出的数据进行了分析。本DAS—ELISA法已成功地应用于家畜血清促滤泡激素水平的检测。
1992, 8(4).
摘要:通过诱导Hu—TY一1(耐高温酿酒酵母)产孢及单孢分离得到的单倍体株Hu—TY—l—A(Sa-ccharamyces cerevisiae)与具有STAl、STA2、STA3(淀粉糖化酶)遗传因子的酵母(S.Dias-taticus)单倍体和纯合二倍体进行相同交配型的种间原生质体融合,融合率为3.3×1O-6-8.7×1O-6。融合子的细胞形态、大小、DNA含量、生长和发酵特性等方面均不同于亲株。融合株BA-2、BA-3、CA-18、DA-2、CCA-30、其细胞体积与DNA含量为亲株之和,30℃生长速率与生物量为亲株的2—3倍,40℃生长速率与生物量为亲株HU-TY-1-A的1.3-1.6倍,能够利用淀粉,并且在40℃高温葡萄糖发酵酒精产率比糖化酵母高,比HU-TY-1-A低,是一些有淀粉糖化酶、耐高温的酿酒酵母新菌株。
1992, 8(4).
摘要:海洋发光细菌产生的荧光素酶在PEG/盐双水相系统中的分配系数(K)的对数值与PEG分子量成线性关系。低分子量PEG亲水性较强,有利于酶分配于PEG上相中,而高分子量PEG疏水性较强,有利于酶分配在下相盐溶液中,PEG/三价盐与PEG/二价盐系统不同,前者有一折点。在使用单一分子量PEG组成的PEG/硫酸铵系统中,K值随系统中使用的硫酸铵浓度增加而增加,硫酸铵达到一定浓度后,其浓度继续增加对K值的增加影响减小;但在两种不同分子量的PEG混合物组成的PEG/硫酸铵系统中,K值随硫酸铵浓度的增加有一最小值,在此硫酸铵浓度之外,增加或减小硫酸铵浓度,K值均会增加。在PEG/硫酸铵系统中,荧光素酶的K值随系统的pH增加略有提高,但变化不大。而在PEG/磷酸盐系统中,在pH6.4时,K值最小,pH高或低于此值,K值均增加。系统的温度变化对K值影响很小。
1992, 8(4).
摘要:利用海藻酸钠固定化面包酵母细胞,在搅拌罐和填充柱反应器内连续反应由蔗糖生产转化糖,对该过程的反应动力学研究结果表明;内,外传质阻力,转化酶活力、料液流量,搅拌速率和媒体半径对转化率有影响,本文给出了它们之间相互关系的数学表达式,本文还定义了阻力因子,动力因子及返混因子,并讨论了它们对转化效率所起的作用,给出了串联反应器操作的有关计算公式,测定了有关动力学参数,给出了料液流量控制,搅拌转速控制,媒体半径选择和最大转化率操作条件的计算方法,并在搅拌罐反应器、填充柱反应器和串联搅拌罐反应器中进行了实验和计算,从实验上验证了动力学理论研究结果。
1992, 8(4).
摘要:本文考察了在2.5LcelliGen细胞培养器和国产20LcellCul-20细胞培养生物反应器中采用微载体技术培养细胞的情况。分析了用cellcul-20细胞培养生物反应器进行大规模培养时细胞的生长、代谢规律,研究了从2.5L扩大到20L规模的细胞转移条件。采用微载体球间直接转移技术。提高了接种效率,减少了接种步骤和污染机会。当国产GT一25微载体用量为5g/L,采用连续灌注工艺培养vero细胞,在国产20L cellCul—20细胞培养生物反应器中,连续培养5天,细胞数增加7倍,细胞密度超过1.0×107 cells/m】。本文开发的细胞培养工艺,对于中试及工业规模的动物细胞大量培养具有一定的指导意义。
1992, 8(4).
摘要:文研究了一种用于测定发酵液谷氨酸含量的介质电流型谷氨酸电极。这种电极是由谷氨酸氧化酶同以二茂铁为介质的化学修饰电极复合构成。研究了各种因素对此电极响应的影响和电极本身的性能与实测验证,结果表明本电极在搅拌反应室(CSR)系统中响应的最适pH为6.8,最适温度为30"C,使用寿命为6天,电极专一性较好。在流通注射分析(FIA)系统中响应的最适pH为7.0,最适温度为27℃,测量范围为0.0125-O.125mol/L(射(20μ1),精度(CV)为1.3%,响应时间为Imin,校正曲线相关系数r=0.998,使用寿命为8天,经实际测量发酵液中谷氨酸含量,与瓦氏呼吸仪对照,相对误差为±6%。
1992, 8(4).
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