1994, 10(4).
摘要:作者将霍乱弧菌O抗原及毒紊B亚单位基因片段,经DNA体外重组技术,得到了能表达双价抗原的工程菌株1046(pMG305)。经GMl一ELlsA分析表明该菌株能够表达特异的霍乱cT—B抗原,且能分泌到胞外,通过菌体凝集,全细胞O抗原酶联分析和血凝抑制试验表明在1046(pMG305)菌体表面表达了霍乱的0抗原,它的脂多糖O抗原通过sDS-PAGE电泳分析.显示它表达了霍乱LPs的特征区带。小鼠腹腔免疫后用霍乱弧菌毒株攻击表明.有良好的保护作用.因此1046(pMG30s)可望成为霍乱活疫苗的候选株。
1994, 10(4).
摘要:利用基因工程技术,将质粒pYX382用xbaI和EcoRl切下插入的TGFa—PE40融合 基因片段-连接到可表达载体pCB604的XbaⅠ/EcoR Ⅰ位点中,构建成新的重组质粒p2x—TP1。P2x—TP1转化E.coli BL2l感受志菌后,在ⅠPTG诱导下Ⅰpp启动子转录表达TGFα—PE40融合蛋白。表达产物主要以包涵体形式沉积在细胞内。融合蛋白表达量的高低与诱导时的细胞密度,诱导的温度以及培养基有关。在一定范围内与诱导剂的剂量以及诱导时间的长短无关。P2x—TPl重组质粒在工程菌中的表达TGFα-PE40融合蛋白量约为50mg/L。
1994, 10(4).
摘要:将地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因及黑曲霉糖化酶cDNA重组进大肠杆菌.酵母穿梭质粒,转化酿酒酵母,构建能分解淀粉的酵母工程菌。酶活力测定和酶学性质分析的结果显示:在酵母MF—αl因子及磷酸甘油酸激酶基因的启动子和终止信号的调控下,α-淀粉酶和糖化酶基因在酵母中获得高表达并向胞外分泌这两种酶。构建的酵母工程菌在含10%淀粉的培养基中6天内能水解97%的淀粉。重组质粒能在酵母中较稳定地存在。
1994, 10(4).
摘要:克隆了我国海南省FCCl/HN株P190抗原三肽重复区基因,定名为P190TR。该基因片段经DNA序列分析鉴定后连接到改建的pGEx一2T表达载体BamHⅠ和xbaⅠ位点中,经鉴定的重组质粒转化感受态JM109(DE3)大肠杆菌进行表达。结果显示:该基因得到高效融合表达.经一步亲和纯化后就取得高纯度的重组蛋白。用纯化的表达蛋白免疫动物亦产生P190TR特异性抗体。
1994, 10(4).
摘要:本研究采用的基因工程菌为酵母Y33::YFD71-3,其基因型为α,his,1eu,ade,suc.摇瓶培养时心钠素的表达水平为l~2rag/L。在含有葡萄糖、YNB以及不同量腺嘌呤、组氨酸和亮氨酸的YG培养基中作摇瓶培养.当细胞的生长由腺嘌呤限制时,蛋白的分泌有明显增加·在YG培养基中加入5g/L的CAA后腺嘌呤成为限制性基质,培养基中腺嘌呤、YNB和亮氪酸用量对心钠素的表达有很大影响。在5L反应器中进行补料分批培养,流加葡萄糖、YNB、cAA、腺嘌呤、组氨酸和亮氨酸,心钠素的最高浓度达到24.8mg/L。
1994, 10(4).
摘要:分析了十三碳二元酸发酵过程中产酸期的代谢特点,对产酸期四相体系发酵动力学进行了研究。提出了菌体生长、产物形成及底物消耗的动力学模型,对模型参数进行了回归估值,并对产酸期进行了拟合,结果表明,模型的计算值和实测值较为吻合,平均相对偏差为3.6%。利用所建模型对产酸期进行了多种操作条件下的模拟计算,结果表明,提高进入产酸期的菌体浓度、缩短菌体生长期时间及降低发酵液中产物浓度具有提高产物形成速率的有效途径。
1994, 10(4).
摘要:对废水淤泥的厌氧消化处理过程进行了研究.提出了一种基于神经网络的非模型控制方法。多变量控制系统的操作变量为供热量和进水量.被控变量为消化温度和消化污泥排出浓度。证明了控制算法的收敛性。讨论了控制系统的稳定性。仿真结果证实了非模型控制方法的有效性。该方法无需对象的模型.为复杂生化过程的控制提供了一种新途径。
1994, 10(4).
摘要:用微量热计测定了金黄色和白色葡萄球菌在给定条件下生长的热谱图,按限制性条件下微生物生长的模型进行了数学处理,得出了比生长速率.还测定了在不同温度和不同酸度下的热谱曲线,确定了最适生长温度和酸度。
1994, 10(4).
摘要:从杂交瘤细胞株87—2提取细胞总RNA.反转录合成cDNA链,进行PCR反应。其中扩增重链可变区一对引物分别与人免疫球蛋白重链v区基因5'端和J区基因3'端互补;扩增人λ轻链可变区引物与人免疫球蛋白λ轻链v区基因5'端和J区基因3'端互补。将重、轻链可变区基因的PCR扩增产物分别插入M13噬菌体.经转化筛选分别获得重组克隆。双脱氧法测定其序列,所得核苷酸序列经计算机分析,轻、重链可变区基因长度分别为309bp和405pb,编码103个氨基酸和135个氨基酸,有明显抗体可变区特征,具有骨架区和抗原互补区。
1994, 10(4).
摘要:利用COS7细胞暂时表达系统,研究转译起始序列对EPO-cDNA表达的影响。通过DNA重组技术,构建了原EP0-cDNA表达载体pCSV-EP0(1).其转译起始序列为5’AATTCATGG3’.同时通过定点突变技术,将起始序列改变成5’CCACCATGG3’,而构建了另一表达载体pCSv—EPO(2)。后者经序列分析证明无误后和前者均通过DEAE-dextran法转染COS7细胞,用ELlSA法定量洲量EP0表达水平.转染后48小时及72小时收集含pCSV—EP0(1)的COS7细胞上清.测定结果为1580pg/mI及954pg/mI,而含pCSV—EPO(2)的上清则为25 300pg/m1和17 450pg/ml。这表明经优化起始序列的基因表达远高于未经优化的。
1994, 10(4).
摘要:在摇瓶发酵条件研究的基础上。于16L自控发酵罐上进行了罐上发酵条件优化研究。发现以10%淀粉水解物为碳源时,淀粉水解物的最适DE值为40-50,发酵培养基中的硫酸铵最适用量不同于摇瓶发酵时的量,种龄和接种量、通气量、罐压、搅拌速度和搅拌叶轮挡数等均对多糖的产生有较大的影响。另外还进行了发酵过程的动力学的研究。
1994, 10(4).
摘要:多孔玻璃珠固定谷氪酸氧化酶与过氧化氢酶分别制成相应的固定化酶管,结合流动注射分析系统测定谷氨酸的含量。测定线性范围在0.1—2.O mmol/L.精度(c.V)O.7%.测定速率每小时80样以上.使用寿命至少4个月。在各氨酸浓度低于2.5mmol/L时.pH在6.5—8.0.温度20—35℃.磷酸盐浓度在0.05—0.25mol/L范围内对测定几乎无影响.对不同发酵时间的谷氨酸发酵液测定,测定的结果与酶试剂盒及瓦氏法比较,结果一致.说明该方法已具有实际应用价值。
1994, 10(4).
摘要:运用了一种以代谢协调和代谢调节概念为基础的生物工艺过程建模思想,以实际过程为背景建立了中国仓鼠卵巢细胞(CHO)的微载体培养生长模型,进行了仿真研究并得出了一些有意义的结论。
1994, 10(4).
摘要:应用固定化细胞技术包埋荚膜红假单胞菌(Rhodopseudomonas capsulata)菌株386.研究在光照下利用有机物产氢的特性。实验观察到,光照培养120小时,悬浮培养物的产氢量为68.2ml·比产氢速率为104.1ml H2/g(生物量)·h;用琼脂包埋后.其产氢能力得到改善,产氢量和比产氢速率分别达到128.4ml和l 9s.8mlH2/g·h。该菌株除可利用苹果酸外,还可利用葡萄糖、乳酸、丙酸等基质高效地产氢。基质浓度只有控制在适当水平时,才具有较高的基质转化产氢效率。此外.菌体生物量、菌龄、培养液pH、光照强度、光照/黑暗时间比以及温度对产氢过程均有不同程度的影响。
1994, 10(4).
摘要:红法夫酵母(Phaffia rhodozyma)可产3-羟-3’,4-二脱氢-β,φ-胡萝卜素-4-酮(HDCO).经多次诱变和HDCO生成条件研究.HDCO产率由原来的30μg,g(细胞干重)提高至510μg/g(细胞干重).HDC0占P.Rhodozyma所产总类胡萝卜素含量由8%提高到45%。还对促进和抑制HDCO生成因子及可能的机理进行初步探讨。酵母产HDCO的研究在国内外尚属首次报道。
1994, 10(4).
摘要:自牛肝中纯化了蛋白二硫键异构酶(PDI),并对重组蛋白的酶促折叠过程进行了探讨.结果表明。在等摩尔PDl的催化作用下,可使1mg/ml的IIJ-2的正确折叠率提高到58%以上,比活性由4×106u/mg增加到8.2×106u/mg,PDl还能部分纠正二硫键错配的IL-2异构体成为正确折叠的lL-2和防止IL-2通过cys的链问交联形成聚合体。GM-CSF在PDl催化下也有类似的结果。PDl作用的关键是它所催化的琉基一二硫键的交换反应。
1994, 10(4).
摘要:花药培养和小孢子培养是大量获得单倍体和纯合二倍体的主要方法之一。在芸苔属中,花药培养和小孢子培养已在白菜( B.Pekinensis)、甘蓝(B.Oleracea)、油菜(B.Napus)、芥菜(B.Juncea)和阿比西尼亚芥(B.Carinata)等蔬菜中有许多成功的报道,并在培养条件、基因型作用、培养基选择和供体植株选择等方面有较深入的研究[2,3,5,7-11],但种间杂种F1代的花药培养尚未见报道。为了探讨芸苔属种间杂种花药培养的可能性,获得有价值的异源染色体杂种,我们开展了本研究工作。
1994, 10(4).
摘要:柠檬酸是利用微生物代谢生产的一种极为重要的有机酸.广泛应用于食品、饮料、化工、冶金、印染等各个领域。在国外,近10年来,利用固定化细胞生产柠檬酸已获得较广泛的研究〔1-6〕,国内也有学者指出,柠檬酸发酵的趋向是利用固定化细胞进行连续化生产⑺。而国内这方面的研究报道很少〔8,9〕。我们利用海藻酸钙凝胶包埋固定化黑曲霉细胞生产柠檬酸.探讨了碳源种类及其浓度对固定化细胞生产柠檬酸的影响。现将结果报道如下。
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