摘要:利用霍乱毒素B亚基基因的启动子、信号肽序列及ctx操纵子的转录终止信号构建了分泌性表达的质粒载体pMCOSS。Β－半乳糖苷酶基因克隆至霍乱毒素B亚基基因的信号肽序列下游后能得到高效分泌性表达。不同的宿主菌和培养基成分中对β-半乳糖苷酶的表达产量有较大的影响，以MM2为宿主菌、在玉米浆培养基中β－半乳糖苷酶的表达产量达4 lOOu／ml，产物的大部分分泌至细胞的周质，活力测定的结果与SDS—PAGE电泳测定结果基本一致，说明表达的β－半乳糖苷酶绝大部分都具有酶活性。构建的蛋白质分泌性表达的载体－宿主系统及合适的培养条件为易形成包含体的蛋白质的高效表达提供了一条新的途径。

摘要:青霉素G酰化酶的表达受多种因素的调控。利用crp和fnr基因缺陷型菌株研究了葡萄糖阻遏和氧调控的机制。结果表明：FNR对pac表达不起调控作用，CRP对pac基因表达有正调控作用．并且CRP的结合位点位于结构基因上游的DNA序列上。随后，测定结构基因上游调控区的DNA序列，发现可能的CRP蛋白结合位点的同源保守序列为TGTGA。

摘要:利用脯氨酸类似物羟脯氨酸(Hyp)的生长抑制作用，筛选出抗Hyp的甘蔗(Saccha-rum sinensis Roxb)细胞变异系R932。抗性系体内游离脯氨酸含量超常积累(×3．2)。而且其体内脯氨酸合成途径中的关键酶γ－谷氨酸激酶对脯氨酸的反馈抑制较不敏感。R932抗PEG和低温能力较供体加强。实验结果表明γ－谷氨酸激酶特性的变化可能导致细胞内脯氨酸的过量积累，脯氨酸的过量积累有利于植物细胞对抗恶劣环境。

摘要:利用鼠鼠杂交增2F7细胞(分泌IgG2a单抗)研究了Pluronic F-68、甲基纤维素、羧甲基纤维素及聚醚多元醇与杂交瘤细胞生物相容性及添加限制浓度；研究了添加浓度对葡萄糖的利用及氨的生成影响}在高速搅拌、高剪切力下考查添加剂的保护效果。结果表明，O·05—0·10％(w／V)Pluronic F-68、O．10—0．20％(w／V)甲基纤维素能较好地保护杂交瘤细胞；高浓度Pluronic F-68增加了葡萄糖的比消耗速率及氨的比生成速率；高浓度甲基纤维素增加了氨比生成速率；羧甲基纤维素添加浓度低于0．1％不影响细胞生长，也无保护作用，羧甲基纤维素不影响细胞对葡萄糖的比消耗速率，但增加了氨比生成速率，聚醚多元醇分解细胞。在1．5升GemlliGen生物反应器中，培养基添加0．10％Pluronic F-68、搅拌转速70r／min下细胞正常生长。

摘要:构建了家蚕核多角体病毒(Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus，BmNPV)新型载体pBm92，该载体将多角体蛋白基因的起始密码ATG改变为ATT，然后在多角体蛋白基因的+12位后连接有5个外源基因的克隆位点。将HulFN-β基因克隆在多角体蛋白基因的+12位后，构建了pBmIFN+12；同时构建了HuIFN－β克隆在－3位后的转移载体pB．mIFN－3。将两种转移载体DNA分别与BmNPV基因组DNA共转染Bm—N细胞。利用重组病毒不产生多角体蛋白的特征，筛选重组病毒。用HuIFN－β基因探针与重组病毒DNA进行杂交鉴定。重组病毒BmIFN+12感染Bm-N细胞，其上清IFN活性为2．0×10⁶Iu／ml，将BmIFN+12注射5龄家蚕虫体，表达水平为5．O×10⁷Iu／ml，是HulFN-β基因克隆在多角体蛋白基因的-3位后获得的重组病毒表达量的2—4倍。构建的新型BmNPv载体能够在家蚕高效地表达HuIFN-β。家蚕虫体生产的rHulFN-β蛋白具有天然HuIFN-β的抗原性。

摘要:以甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)内蒙分离物的总RNA为模板，通过反转录和PcR扩增获得75kDa通读蛋白基因54kDa片段的目的片段。将其克隆到pGEM－7Zf(+)上并转化DH5α得到了含有完整s4kDa片段的重组子pGBW52。采用双脱氧终止法进行序列分析。结果表明内蒙分离物的54kDa片段全长为1509nt，与法国的F13分离物相比缺失了3个核苷酸。其核苷酸序列和由此推导的氨基酸序列的同源性分别为94．97％和96．42％．

摘要:利用粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)变异株自身絮凝形成的颗粒，作为细胞固定化方法。以双酶法制备的淀粉耱化液为底物，在有效容积2．35L的小型悬浮床生物反应器中连续生产酒精。研究了微量供氧条件下该絮凝颗粒酵母均匀悬浮体系的生长动力学，获得了描述其生长规律的模型方程。

摘要:类黄酮是植物中的一种重要的次级代谢产物，它与植物的花色形成有关。查尔酮合酶(Chalcone synthase，CHS)是类黄酮合成途径中的一个关键酶，在植物体内，CHS表达量的增加或减少都可能改变花的颜色。从矮牵牛(Petunia hybrida)花瓣的cDNA中克隆到了CHS—A基因，进行了全序列分析，并与国外已报道的CHS—A序列进行了同源性比较。结果表明，克隆的CHS-A基因长为1170bp，编码一个由389个氨基酸组成的多肽，与国外已报道的CHS—A同源率高达99％。此外，还在大肠杆菌中实现了CHS—A基因的高效表达。CHS—A基因的成功克隆与表达为研究CHS—A基因对植物花色的影响打下了一个良好的基础。

摘要:用根癌农杆菌感染丹参无菌苗获得冠瘿组织，除菌后的冠瘿组织在无激素的Ms培养基上生长良好。经高压纸电泳检查，冠瘿组织中含有冠痿碱，证实根癌农杆菌的Ti质粒转化成功。冠瘿组织的生长和丹参酮的积累与基本培养基有关，B5和Ms培养基有利于生长．月增殖倍数分别达到102倍和90倍，而67-V和WP培养基则有利于丹参酮的合成，在培养过程中丹参酮能分泌到培养液中。研究表明用冠瘿组织作为培养系统，生产药用植物有效成分具有良好的开发前景。

摘要:应用摇瓶培养研究了生物学因子，即：细胞聚集体大小、继代周期和接种量，对紫苏悬浮细胞生长和次生代谢物花色素产生的影响。结果表明：与未经筛选的或细胞聚集体小于250μm的细胞团块相比，大于250μm的细胞团块作为接种细胞时，培养所得的花色素含量较低。7一10天为合适的继代周期，在长时期的继代过程中，细胞生长良好、并且色素含量也高。实验还表明，每升接种50克湿细胞最适合于细胞增殖与色素积累。

摘要:使用指示性培养基，筛选含有正常甘露醇操纵子和山梨醇操纵子的大肠杆菌菌株。从细菌染色体DNA中，通过多聚酶链式反应(PcR)扩增出1一磷酸甘露醇脱氢酶基因(mtlD)和6一磷酸山梨醇脱氢酶基因(gutD)。将它们分别克隆至载体pBluescript sK或Ks以后，完成了这两个基因DNA的全序列分析。序列测定结果表明：所克隆的mtlD基因除编码区第96位密码子由GCA变成了GCT之外，其它序列与所报道的修正序列一致；所克隆的gutD基因除3＇端非编码区缺失一个碱基C之外，基因全序列与文献报道一致。完成此两个基因的大肠杆菌高效表达载体的构建之后，表达的1－磷酸甘露醇脱氢酶和6－磷酸山梨醇脱氢酶分别占菌体可溶性蛋白的24．79%和29．38％。

摘要:以有自然标记的双核风尾菇(Pleurotus sajor-caju)和桃红平菇(P．Rhodophyllus)为出发菌株，以它们携带营养缺陷型标记的单孢菌株为直接亲本，采用BAEKON 2 000基因转移仪进行侧耳属种间原生质体电融合，成功地获得若干株融合体，其中有一株编号为F57的融台体已培育出子实体。比较了融合体F57与亲本的形态、生理、生化和遗传等性状，结果证实，融合体F57是一株新的种间杂种菌株。

摘要:分离的苏云金芽胞杆菌(Bacillus-thuringiensis)YBT-791对鳞翅目小菜蛾(Plutellaxylostella)有毒力，将其质粒DNA提纯，经HindⅢ酶切后与杀虫晶体蛋白cryⅡ基因探针杂交，显示出分子量分别为5kb和9．4kb两条DNA阳性片段。把5kb的DNA阳性片段克隆到pUCl8的HindⅢ位点上并转化大肠杆菌TGl，经酶切和杂交检测，证明斑点杂交阳性克隆子中含有5kb的cryI片段。把这个含cryⅡ基因的5kbHindⅢ片段进行亚克隆，将4kb的BamHI－Pstl酶切片段插入穿梭载体pXl61中，并用电脉冲法克隆于苏云金杆菌不产伴胞晶体的突变株中，得到产生单一cry Ⅱ基因编码的杀虫晶体蛋白的克隆菌株M一5。经电镜观察，该克隆菌株能形成出发菌YBT－791多种形态伴胞晶体中的一种方形伴胞晶体；经免疫双扩试验，它只能与Cry Ⅱ晶体蛋白抗血清形成沉淀线；经SDS—PAGE电泳，克隆菌的伴胞晶体只含有一种65kDa的晶体蛋白。生物测定结果表明它既对鳞翅目小菜蛾(Piutella xylostella)有毒性，又对双翅目致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)有毒性。

摘要:将人产肠毒素大肠杆菌(ETEC)，编码耐热肠毒素(ST)的基因片段与编码不耐热肠毒素B亚基(LT—B)的基因进行融合，并在此基础上进行不同数目sT基因的串联，ELJlSA检测融合基因表达蛋白产物观察到sT与LT－B之间存在着相互影响。ST的检测滴度随基因串联个数增加而逐渐升高，而LT的ELISA滴度则减弱。说明了ST可以通过基因串联提高表达产物抗原活性，这为产肠毒素大肠杆菌多价疫苗的研制提供了重要的研究基础。

摘要:利用大鼠甲胎蛋白(AFP)基因片段作为模板，分析大鼠肝癌细胞核蛋白成分对体外转录活性的影响，发现大鼠肝癌含有促进AFP基因体外转录的核蛋白。作为对照．没有发现任何成年大鼠肝核蛋白可以促进AFP基因的体外转录。为了确定促进AFP基因体外转录的核蛋白作用部位，对AFP基因模板5＇端上游序列进行了不同程度的删除，进一步分析核蛋白对删掉5’端上游序列后的模板体外转录的影响，结果表明，AFP基因转录的起始点到255bp这段DNA序列是大鼠肝癌核蛋白促进AFP基因转录必不可少的。以SV40DNA经Pst I酶酶切所得的DNA片段(1216bp和4027bp)代替AFP基因片段作为模板，不存在核蛋白促进体外转录的现象。用AFP基因转录的起始点到 255bp这段的DNA为探针，进行Southwestm印迹分析，结果发现了8种与探针结合的核蛋白。

摘要:对锌酵母分批流加发酵过程的控制变量反应温度和pH的动态最优化进行研究。基于酵母流加发酵有抑制的状态模型．通过龙格一库塔法计算微分方程组、单纯形法优化对模型参数进行估计。采用不同的温度和pH控制策略进行研究，由此获得动力学模型参数与温度和pH关系的回归模型。在此基础上，以极大值原理、梯度法优化求解以获得最高锌酵母产量为目标的最优温度和pH分布T*（t）、pH*(t)。实验验证，在T*(t)和pH*(t)下操作，锌酵母产率可提高13.7％。

摘要:对高径比s≤2．5喷射环流生化反应器的流体力学和传质特性进行了系统的研究，选出反应器的最佳结构，关联出氧的体积传递系数(k_La)表达式。在此基础上，进行了谷氨酸发酵试验，摸索出用该设备进行各氨酸发酵的最佳工艺条件，使5批一次性投糖发酵的糖酸转化率达到50％以上。

摘要:我们用化学方法合成的两个恶性疟原虫杂合抗原基因，即A基因和B基因〔1.2〕，分别与表达载体pwR450·1重组并转化到大肠杆菌使其表达〔3.4〕。经筛选获得了pwR／A·7和pwR／B·164两个表达较高的克隆菌(经扫描测定表达融合蛋白量分别为菌体总蛋白的8．8％和11．O％)。叉将A基因和B基因串连后与pwR450·l重组并转化到大肠杆菌JMl03株，经筛选鉴定获得了上述两个基因串连的pwR／AB·20克隆菌(表达融合蛋白量为35．8％)。为了进一步研究这3个克隆菌表达蛋白的免疫功能等活性，用8．0mol／L脲处理包涵体，离心沉淀上清液进行DEAE-ephacel柱层析，用Tris梯度缓冲液洗脱，但分离效果不好，而应用PAGE方法进行分离纯化，则可得到电泳纯、稳定又具有免疫原性的产物。

摘要:人胰岛素样生长因子(Hurman insulin-1ike growth factor，简称h IGF)是一类既有细胞分化和增殖活性，又有胰岛索样作用的多肽，包括IGF—Ⅰ和IGF—Ⅱ两种。其中IGF—Ⅰ的功能比较清楚。而IGF—Ⅱ的作用正在研究中，可能在胎儿的生长发育及脑组织和神经系统中起重要作用。IGF－Ⅱ能刺激一些细胞系的生长，对不同的肿瘤起自分泌和旁分泌生长因子的作用〔1－6〕，最近又发现IGF—Ⅱ能刺激神经及肌肉的再生。由于天然IGF—Ⅱ的分离困难，我们利用基因工程方法克隆表达IGF—Ⅱ c DNA，以获得大量重组蛋白，为研究和应用打下基础。

摘要:本文报道了利用固定化技术连续发酵生产酸牛奶的方法。对单菌种与双菌种固定化、最适发酵温度和pH、发酵时间、固定化方式等进行了研究，得出了在实验室条件下，连续发酵生产酸牛奶的最佳技术条件。与传统的间歇生产工艺相比，可简化菌种制备过程，反复利用乳酸菌种，充分利用发酵酸化设备、便于自动化控制等优点。作者尚未见国内外利用固定化技术连续生产酸牛奶的报道。