摘要:为了提高人白细胞介素－3(bhIL-3)在大肠杆菌中的表达，在计算机辅助下，设计合成了PCR突变引物，用于改造起始密码AUG上下游序列，并在不改变5’端氨基酸编码的前提下，尽可能选用大肠杆菌高频使用的密码子。将经改造后的Hil-3cDNA和翻译起始区置于PL启动子之下，转入大肠杆菌Tapl06，经42℃热诱导后．获得表达产物，提高表达水平近一倍，表达量达到菌体总蛋白量的30％左右。表达产物经Western blot验证，经PVDF膜转移后进行N端顺序分析，证明前15个氨基酸正确，产物经包涵体纯化后，纯度提高至80％以上，初步复性后能明显促进Hil－3依赖细胞的生长。

摘要:采用PCR方法改变了表达构建物pRL－rhTNF中的结构，即去掉rhTNFα cDNA 3’端非翻译区序列110bp(命名为pRL—rhTNα2)，转人大肠杆菌后，观察数个阳性转化子的表达情况，并与原型pRL—rhTNFα的表达进行比较。结果表明，去掉3’端非翻译区的pRL—rhTNFα能稳定表达rhTNFα，其发酵及纯化产品的生物学特征均等同于原型的，且其表达量比原型的有提高．提示3＇端非翻译区序列对表达有影响。3＇端非翻译区内存在一个相似于 TA的重复序列——TTTA TTA七聚体。这可能是本研究中影响TNFα表达量的原因之一。

摘要:合成Gas－3-O－HAS免疫原的同时，往往产生Gaa－7－CONH—HAS等其它成分，从而有可能通过特定的ELISA分步筛选法，在一次单抗研制流程中兼得两类针对不同Gas抗原决定簇的单克隆抗体(Mabs)。交叉反应结果表明，其中的Mab BG2对GA_7/4甲酯具有高亲和力和专一性，它与GA7me的亲和力比GA3me与GA1me分别高出100与200倍。7位羧基的甲酯化可显著增加Gas与该抗体的结合，而A环上双键或3β基的缺失，19，10－r-内酯环的破坏及D环上13位羟基的存在却严重降低Gas．与它的结合。这种高专一性的单抗将可用于高等植物和真菌体内早期非羟化途径中的GA7与GA4的免疫定量与定位研究。用该抗体建立的GA4me与GA7me ELlSAs具有极高的灵敏度，两者的检测范围分别为1．0×10^-14～1．O×1O^-13mol与2．0×10^-15～2．0×10^-13mol。

摘要:用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)转化药用植物青蒿(Artemisia annua L．)并建立了发根体外培养系统。Southern杂交、NPT Ⅱ酶的检测证明Ri质粒的T—DNA转移并整合到植物的核基因组上。在发根培养系统中，检测了青蒿的重要次生代谢物一青蒿素的含量，检测了不同理化因子对发根生长及青蒿素含量的影响。结果表明：光照(日光灯，12h光周期，20001x)有利于次生产物青蒿素的积累。培养基的pH值为5．4。蔗糖浓度为3％不仅促进发根的生长，而且促进青蒿素的积累。低浓度萘乙酸(NAA)对发根生长具有促进作用，但抑制青蒿素的合成。赤霉素GA，对发根的生长及次生产物的合成都具有促进作用，其最适浓度为4．8mg／L。

摘要:把黑曲霉糖化酶cDNA连同酵母α因子启动子及其分泌序列，通过转化整合到酿酒酵母染色体DNA上，获得了整合型的分解淀粉酵母转化子。Southern印迹分析证明了糖化酶cDNA对酵母染色体DNA的整入。整合型转化子在以可溶性淀粉为碳源的培养基中分泌糖化酶活力达2．5u／m1，在非选择性培养基中连续转移10次．糖化酶分泌活力稳定不变。

摘要:比较了14种不同来源的脂肪酶催化油酸油醇酯的合成。其中，假丝酵母(Candidasp．)1619脂肪酶酯化能力最强，以硅藻土为载体，分别按0．1％添加椰子油、吐温80．按l％添加MgSO43种共固定物，醇化反应初速度提高了1．5倍。此固定化酶催化油酸油醇酯合成的最适温度为30℃，0～60℃下反应24h的酯化率均在90％以上，100℃下还有10．25％的酯化率。最适酯化pH6．0。反应中去水，可使终酯化率提高到99％。在添加的23种有机溶剂中，以异辛烷促进酯化的效果最好．正壬烷和正己烷次之。此固定化酶在28℃下批式重复反应的半衰期为990h，柱式固定床反应器中28℃连续运转1000h后酯化率为78％。

摘要:观察了家蚕BmN(从silkworm Bombyxmori获得的细胞系)细胞在微载体cytodex3上的贴壁分布，提出其分布符合Poisson规律．并由此估计了不同细胞接种浓度时裸球的百分比．与实际观测结果基本符合；研究了不同接种浓度与微载体浓度时细胞的生长情况，家蚕BmN细胞在Cytodex 3上生长的临界接种数为一珠粒6．4个细胞。当微载体浓度为3 g／L时，最低的接种浓度为1．O×10⁵／ml。

摘要:用杂交瘤技术制备了5株产生抗黄曲霉毒紊B₁单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中之一AFB1－2H8进行了较系统的研究。AFB1一2H8属IgC3。纯化腹水抗体效价约5×10⁶。ELISA检测标准毒素的线性范围为0．5～50ng／ml。最低检出量为0．01ng／ml。该单抗与参试的其它黄曲霉代谢物的交叉反应系数为0～0．21，该抗体有较大的应用价值。

摘要:采用固定化青霉素酰化酶(Penicillin acylase)在反应器中进行青霉素G水解生产6－APA，同时与离子交换柱相组合以连续地去除反应混合液中的苯乙酸。建立了离子变换柱的分格模型(Comparunent model)．在确定了青霉素G和苯乙酸沿柱高的浓度分布的基础上，与描述固定化酶反应器的状态方程相结合，得到了固定化酶－离子交换组合系统的数学模型。在将计算机模拟值与实验值进行验证后，探讨了组合系统中树脂量、循环流速和组合起始时间对青霉素G酶解过程的影响。

摘要:室温下用50mmol/L CaCl₂处理根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)以制备感受态细胞．然后经O℃冰浴及28℃热击处理，成功地将Ti质粒中间载体(>10kb)导入了根癌土壤农杆菌中。转化效率每个活细胞可达10 -4～10 -5转化子或10 6转化子／μgDNA。探讨了该菌细胞生长状态、CaCl2溶液浓度、温度、液氮、热击、复苏时间以及感受态细胞于4℃或-20℃(加15％甘油)下保存时间对根癌土壤杆菌转化的影响。

摘要:诺卡氏菌(Nocardia sp．N13)休止细胞对油酸(顾-9-十八碳烯酸)进行羟基化作用。用休止细胞转化时最适温度为30℃，最适pH为6．5，当菌体(干菌)与底物的最适比例为20 ：1对，对油酸的转化率为83．4％，不同的表面活性剂影响转化的效果。N13休止细胞在磷酸缓冲液中重复转化3次仍可保持50％左右的转化率。红外光谱、质谱、棱磁共振鉴定产物为10－羟基硬脂酸。

摘要:对培养条件，如氮源种类、C／N比率、pH、种子种龄与接种量对被孢霉(Mortierellasp.)M14菌株的细胞生长和油脂形成的影响作了研究。结果表明，二级发酵优于一级发酵。M14菌株二级发酵时，种子种龄以49h为适，接种量宜大(30％)。无机氮源有利于不饱和脂肪酸的产生，有机氮源有利于细胞的增殖。低C／N比率有利于菌丝体产量的提高，提高C／N比率则能促进菌体细胞内的油脂合成。pH对菌体生长、油脂产生以及γ-亚麻酸含量都有显著的影响。

摘要:化学合成的人α降钙素基因相关肽(CCRP)基因用PCR法改造后使其能正确融合在酵母分泌型表达载体pVT102U/α中的α交配因子前导肽序列之后，然后进行克隆并转化酵母宿主菌S－78进行表达．培养物的上清用酶标(ELlSA)鉴定为阳性，而对照S－78、pVT102u／α为阴性，表达量用ELISA定量大于2mg／L。表达产物经阳离子交按层析(CM—Sphadex C₂₅)和HPLC纯化得到了HPLC纯产品。纯化后的CGRP能引起小鼠血压的降低，说明表达的目的蛋白既有CGRP的免疫结合活性，又有CGRP的生理活性。测定其N－端10个氨基酸序列，证明人工合成的CGRP基因在酵母细胞中已正确表达。

摘要:用明胶包埋酒石酸诺卡氏菌(Nocardia tartaricans SWl3—57)得到顺式环氧琥珀酸开环水解酶活力较高的固定化细胞。固定化细胞的最适温度为30～45℃，而游离细胞的最适温度为35～45℃。两者的最适pH均为8．0～9．0，固定化细胞的表观米氏常数Km为0．256mol／L,而游离细胞有底物抑制作用，在底物浓度小于0．45mol／L时Km为0．246mol／L。用固定化细胞装柱(y=100ml)，pH8．S，温度37℃，稀释速率D=0．25h^-1，以0．5mol／L浓度顺式环氧琥珀酸钠溶液为底物，连续运转53d，平均产L(+)酒石酸66．95g／L，克分子转化率为92．09％，反应器生产能力达到16．58g／L·h。

摘要:经纯化后，甘蓝下胚轴原生质体的产量为1．5×10⁶g^-1(Fw)，采用液体浅层培养的方法进行培养。2～3d后，发生第一次分裂，第10天，统计分裂频率为6l％，5周内形成大量的细胞团和小愈伤组织，统计植板率为1．1％，把小愈伤组织转到与原生质体培养基相同激素的MS固体培养基上增殖。当愈伤组织长到3～5mm大小时，接到分化培养基上，芽分化率为46.7％．分化出来的芽长到3～4cm长时，从基部切下，插入生根培养基，两星期左右即可长成完整植株。

摘要:随着全球性人口的增长和土地退化的加剧，开发利用广阔盐碱地和干旱土地的需要日益迫切。植物生物技术的日臻完善，为培育高效耐盐植物迎来了一丝曙光。在高渗条件下，耐盐的微生物或植物细胞通过增加胞内一些相溶性溶质的浓度来维持渗透压的平衡。这些可溶性溶质包括无机离子、糖类、多元醇、氨基酸和生物碱等。通过基因工程手段，使细胞内积累脯氮酸⑴、甜菜碱⑵、甘露醇⑶、海藻糖⑷，能够不同程度地提高转基因烟草的耐盐性。多元醇含有多个羟基，亲水性能强，能有效维持细胞内水活度。山梨醇、甘露醇等己糖分子结构、理化性质和生理功能相近。故此．我们认为：不同糖醇在转基因烟草中的积累．可能具有协同(或累加)效应，有希望更大地提高植物耐盐性。我们在获得大肠杆菌mtlD基因(编码l-磷酸甘露醇脱氢酶)和gutD基因(编码6-磷酸山梨醇脱氢酶)克隆⑸的基础上，获得了分别表达mtlD和gutD基因的单价转基因烟草，并首次证实了gucD基因的表达，能显著地提高转基因烟草的耐盐性⑹。本文工作进一步报道同时表达大肠杆菌mtlD和gutD基因双价转基因烟草的高效高度耐盐性。

摘要:固氯螺菌(Azospirillum)是一类仅在限铵和微好氧条件下固氮的微生物，它可与许多禾本科作物联合共生⑴，具有较大的应用潜力。铵作为固氮作用的调节信号，在固氮螺菌的实际应用中是首要的限制因素。在固氯螺菌中，铵不但具有与肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)相似的阻遏固氮酶合成的作用，而且还对已合成的固氮酶进行活性调节⑵。研究表明，其固氮酶翻译后活性调节的机制类似于深红红螺菌(Rhodospirillum rubrum)⑶，即在有铵条件下其固氮酶铁蛋白的一个亚基被共价修饰而丧失活性，这一过程是可逆的。由于铵在固氮螺菌中双水平地调节固氮作用，使得在野生菌株中研究其固氮基因表达水平上的调节较为困难。Zhang等⑷利用区域定位诱变技术获得了巴西固氮螺菌Sp7（A．Brasilense Sp7)的draT-突变株，在该突变株中铵不再影响固氮酶的活性，这为其固氮基因表达调节的研究提供了一个良好的材料。本文将组成型表达的肺炎克氏杆菌nifA基围引入该突变株中，通过分析讨论铵对巴西固氮螺菌固氮基固表达的调节作用方式。

摘要:乳链菌肽(Nisin)是由核糖体合成，经翻译后修饰、加工而含有稀有氨基酸的一种小肽分子。它对许多革兰氏阳性菌，包括利斯特氏菌属、梭菌属和芽孢杆菌属这些腐败苗和病原菌有强烈抑制作用。 已被50多个国家和地区广泛应用于乳制品、罐头食品、高蛋白食品及乙醇饮料的防腐保鲜，是越来越 受到人们重视的一种无毒的天然食品防腐剂⑴。对乳链菌肽分子结构与功能及生物合成遗传控制的研 究不仅有应用价值，而且有其理论意义。本实验室以产乳链菌肽的乳酸乳酸球菌ATCC 11454总DNA 为模板，利用PCR技术成功地扩增了乳链菌肽前体基因，并对其核苷酸序列进行了测定。

摘要:复膜式氧传感器是1956年Clark发明的，可耐高温灭菌的溶氧传感器是70年代才发展起来的，国外已有定型产品，其中以瑞士的Ingold、美国的900型以及日本的DY一2镕氧传感器最为优良。国内也于70年代开始了溶氧传感器的研制工作，80年代达到国际水平。1985年，我们研制成功了YQ－W－I型复合式溶氧传感器及其检测放大器，1987年获得了国家医药管理总局科技进步二等奖。1990年完成了国家“七五”重点科技项目75－7l－08－10《YQ－W－Ⅱ型溶氧传感器及其检测放大器》的研制工作。同年12月6日在轻工部的主持下，通过了技术鉴定，并于12月22日在北京通过了国家级验收。鉴定结论指出：YQ－W－Ⅱ型溶氧传感器属于结构型传感器，结构新颖，采用水冷与压力补偿技术，工作可靠，不易染菌，使用方便．易于维护，主要性能已达到国际上同类产品水平；YQ－w－Ⅱ型溶氧传感器耐高温，稳定性好，工作寿命长，其指标超过了国际上同类产品水平。其配套的检测放大器达到一级精度．工作稳定可靠，线性和恒流特性良好，可与Ⅱ型、Ⅲ型仪表及微机配套使用，构成溶氧的自动记录、自动调节或实时控制系统。1992年．我们又研制成功了YQ－W－Ⅱ型开孔式溶氧传感器、补偿式溶氧传感器和新型溶氧传感器以及与其配套的检测放大器。以上几种产品，获得了天津市技术监督局颁发的生产许可证书，已经投入了生产。本文分别介绍发酵罐溶解氧测定仪包括的溶氧传感器及检测放大器两部分的结构特点。

摘要:目前，固定化延胡素酸酶生产L一苹果酸的技术中一般采用单一的聚合有机电解质包埋体系，例如：聚丙烯酰胺凝胶，海藻胶，卡拉胶等，迄今为止，已公开发表了卡拉胶固定化产延胡素酸酶的产氨短杆菌、黄色短杆菌的方法，并认为以卡拉胶包埋体系细胞及延胡素酸酶的转化率最高⑴。卡拉胶是一种含有许多硫酸根基团的多糖化合物，作为固定化材料具有稳定性好的优点，但它的凝固点太高，众所周知工业生产上固定化操作均在凝固点附近进行，这不仅给固定化成形带来困难，而且严重影响被包埋细胞及酶的活性。为了降低卡拉胶的凝固点，在较低的温度下具有良好的流动性，减少操作过程中细胞及酶活力的损失，本文建立了混合凝胶体系，在卡拉胶中加入明胶，羧甲基纤维素钠琼脂等物，同时溶解后，此复合电解质的凝固温度将大大降低，这将使固定化操作范围扩大，包埋介质与细胞及酶有充分的机会均匀混合，固定化条件变得温和，较低的温度下具有很好的流动性，在工业生产上较易实现机械化成形制胶。

摘要:哺乳动物细胞的大规模培养是生产许多医学上重要生物制品的一种主要方法之－⑴。很多有工业价值的动物细胞都是贴壁细胞，必须附着在一定的表面上才能生长，微载体培养是一种有效的体系⑵。用于微载体培养的反应器多为搅拌式反应器，近年来，流化床式反应器越来越引起生化工程学家的重视。有希望用于大规模动物细胞培养的主要是液升和气升式。液升式反应器的优点是培养液可以间接氧饱和，气泡和细胞不直接接触。在气升式流态反应器中，气泡与细胞直接接触，其优点是操作方便，设备筒单。本文报道通过气升流态化反应器实现高密度贴壁细胞培养工艺条件的研究。