摘要:透明颤菌(Vitreoscila)血红蛋白(VHB)是一种氧调节、氧结合蛋白。其基因(vgb)已被克隆及表达。Vgb基因表达在转录水平上受氧控制．FNR蛋白作为厌氧激活于介入该调节过程。VHb可与氧结合参与细胞代谢过程，使细胞适应贫氧环境。Vgb基因的氧调控启动子和VHb蛋白的生理功能在基因工程和发酵工程具有良好的应用前景。

摘要:El区缺失的腺病毒载体插入人γ-干扰素cDNA序列．与pJM17质粒通过磷酸钙沉淀法共转染293细胞．经同源重组．共获得6个病毒噬斑。经PCR共扩增检测．证实这6个噬斑均为带有人γ-干扰素cDNA的重组腺病毒；受其感染的293细胞的上清中，都能洲到γ-干扰素的活性，且这种活性可被一定稀释度的兔抗人γ-干扰素多克隆抗体所中和。其中的1号重组病毒纯化后，接不同的M()I(Multiple of infection)值感染复制缺陷型腺病毒不能在其中增殖的B16F10细胞，未出现细胞病变效应(cytopalhic effect，CPE)．而上清中的γ-干扰素活性却随M()I值增大而升高，这证实构建的复制缺陷型腺病毒是能表达井分泌人γ-干扰素的。

摘要:用定点突变和随机突变的方法，对枯草杆菌碱性蛋白酶E基因进行改造。突变后的基因插入大肠杆菌-枯草杆菌穿梭质粒pBE-2中，在碱性和中性蛋白酶缺陷型的枯草杆菌DBl04中进行表达，得到突变种的碱性蛋白酶．它们的突变位点分别是(M222A)、(M222A、N118S)、(M222A、N118S、Q103R)、(M222A、N118S、Q103R、D60N)。各突变种酶的性质测定 结果表明．M222A突变使酶抗氧化，N118S突变使酶增加热稳定性，Q103R和D60N突变虽然能增加酶的比活，但使酶的热稳定性大大下降，尤其是D60N突变使酶变得极不稳定。野生型碱性蛋白酶与(M222A)突变种的等电点均为8．92．而M222A，N118S)。(M222A，N118S ，Ql03R)和(M222A，118S．Q103R，D60N)突变酶分别为8.88．9.10和9．17。用Nsuc-AAPF-pNA作为底物时酶反应景适pH值为7.5～9.5，而用酪蛋白底物时最适pH值为10～12。

摘要:根据阻遏蛋白，辅阻遏因子与启动基因之间的相互作用，建立了采用色氨酸启动子的基因工程重组徽生物的产物表达数学模型。提出了mRNA最大转录速率常数和产物表达速率常数与比生长速率呈线性关系的假设，用干扰素基因工程菌培养过程中的实验数据估计了mR—NA转录速率常数，干扰素表达速率常数和干扰素降解速率常数。推导出了发酵过程中干扰素表达量和细胞内干扰素比活计算公式。运用这些公式可以通过检测色氨酸浓度和细胞比生长速率来计算预测干扰紊表达量。确定最佳的终止培养时间。

摘要:产碱菌培养液的酶谱呈-主带G₄A-l及两次带G₄A-2与G₄A-3，分别进行纯化并鉴定其水解产物，均为麦芽四糖．说明三者全是麦芽四塘淀粉酶,它们以多型性形式存在于产碱菌培养液中。培养液中没有检出塘苷酶。24,72，96h培养液中不含蛋白酶(仅48h培养液中有微量蛋白酶)，说明多型性不是糖苷酶和蛋白酶造成的。改变培养条件不影响多型性产生．仅影响到G₄A-2及G₄A-3生成量的多少。

摘要:三亲交配方法分别将载有褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum)呈组成型表达的nifAC的质粒pCK5和肺炎克氏杆菌(Kldosiella pneumoniae)含有nifAc和nifA—ntrc基因的质粒pcK3．pSZ36和pSZ23-CA导入根癌土壤杆菌Agrobacterium tumefaciem)C58／pGV3850，所得转移接合子的生长速率和野生型相似。在10mmol／L，NH₄⁺浓度下，Western blotting测出A．Tumefaciens C58／pGV3850(pCK5)有固氮酶合成，乙炔还原法测定固氮酶活性恢复分别为73％．24％，11％和62％。这些结果表明，褐球固氨菌和肺炎克氏杆菌的固氮调节基因对土壤杆菌同氮基因表达有调节作用。其中．褐球固氮菌nifAc的调节功能最强(73％)，其次是肺炎克氏杆菌nifA和nrrC的融合子(62％)，肺炎克氏杆菌nifAc的调节功能较弱(24％。11％)。

摘要:应用手工固相DCC/HOBt法合成Cecropin B、shival、ABP 3、WHD4种抗菌肽。各抗菌肢的C端均为酰胺化。最终用}珏，LC分离纯化。这4种肽对大肠杆菌K₁₂D₃₁野生型大肠杆菌、产气杆菌及4种植物病原菌青枯菌、临床致病型大肠杆菌、伤寒杆菌、硝酸盐杆菌均有明显的杀伤或抑制作用．对白血病细胞K 560、肺癌细胞A 549也有杀伤作用。其中尤以wHD杀伤作用最为明显，并用对其它3种肽不能作用的枯草杆菌、绿脓杆菌也略有抑制。而shiva l对细菌的作用较其它3种肽弱,另外还用cD谱对4种抗菌肽的溶液构象做了初步研究。

摘要:以原核高效表达载体pBV，220为骨架载体，采用互补寡核苷酸插入法在pBV220多克隆位点的上游插入了起始密码子和6组氨酸编码序列，将此新质粒命名为pBV222，以此载体表达的目的蛋白在N-段带有His6尾以利于IMAC层折快速纯化目的蛋白，酶切及核苷酸序列分析验证了我们的设计。将IL-2和GM—CSF cDNA克隆入pBV222载体中，表达的目的蛋白与预期的分子量相同，表达产物以包涵体的形式存在，表达量比非融合蛋白有明显的提高。且这种融合蛋白保留GM-CSF的生物学活性。表达菌体直接用6mol／L盐酸胍裂解或首先分离包涵体之后盐酸胍裂解，上清直接IMAC层析，以阶段性或线性pH梯度洗脱特异的目的蛋白。SDS-PAGE分析蛋白纯度在90％以上。

摘要:编码霍乱CT—B和LPSO抗原的基因与载体质粒pYA248重组后，转入△cya△crp △ asd减毒鼠伤寒疫苗株x4072，构建成无药物抗性、带双价抗原的工程菌株x4072(pMG306)。该菌株能分泌表达特异的霍乱CTB抗原，并且在菌体表面同时表达霍乱和鼠伤寒的。抗原。小鼠腹腔免疫和攻击试验表明该菌苗株对霍乱毒株的攻击具有良好的保护作用。本研究为新型霍乱／鼠伤寒双价口服活疫苗的构建打下了基础。

摘要:将苜蓿无菌苗下胚轴切割后，在附加2mg／L 2，4-D的MS培养基上诱导愈伤组织。愈伤组织在附加O．5mg／L 2，4-D的SH培养基中悬浮培养。悬浮培养物在用于转化之前，用0．45mol/L甘露醇处理1h．然后用O．16mol/L CaCl₂．2H₂O洗涤两次。预处理后的悬浮培养物用SH培养基悬浮(10ml／g悬浮培养物)，再加O．2ml农杆菌悬浮液，于25±2℃共培养2d。共培养的悬浮培养物洗涤后在附加0．5mg／L羧苄青霉索的无激素培养基上选择培养。悬浮培养天数、悬浮培养基激素组成和选择培养基种类明显影响转化频率。纸电泳分折表明70％的转化体可以台成农杆碱和甘露碱。染色体观察显示转化组织细胞存在严重的数目和结构变异。

摘要:对原生质体电融合技术获得的11株酵母多倍体融合株，进行了一系列生理特性的分析比较．结果发现，在电融合过程中，融合株的细胞体积及DNA含量并不随着核倍性呈线性递增．而是有其特殊的变化规律。当糖化酵母sta1、sta2和sta3在细胞核中各自纯合时，明显表现出表达的剂量效应。其中sta1、sta2纯合的融合株．在YEPS培养中，GA分泌可被淀粉大量诱导，表现出一定的二次生长特性。从分析结果推测，在亲株5301-14D及HU-TY—1A中可能有对GA分泌不利的因素。

摘要:用PCR方法扩增人微小纤溶酶原(Microplasmingen，mPlg)基因，再与表达载体重组．构造mPlg原核表达质粒并转化大肠杆菌。阳性克隆pSSE-mPlg经温度诱导表达，SDS-PAGE等方法证明表达产物的分子量约为29kDa。占全菌总蛋白的24％左右，并在菌内形成包涵体。经半胱氨酸再氧化法和空气氧化法复性。表达产物r-mPlg经SK作用后显示纤溶活性。同时对蛋白质浓度、复性时间等因素对复性的影响进行了初步探讨。

摘要:研究了探红酵母(Rhodotorula rubra)的培养基成分、培养固定化及转化条件。实验表明最佳培养基成分(％)：葡萄糖0 5，胰蛋白胨0．5，酵母膏0．5，磷酸二氢钾0．05，L-Phe0．05，pH．0，30℃，20L发酵罐中培养15～17h.最佳固定化条件为：用2．5％卡拉胶包埋18％的湿菌体。最佳转化条件为：1．0％反式肉桂酸，4mol／L铵离子，pH10．5，30℃。用卡拉胶固定化的深红酵母(Rhodotorula rubra)可以将77．7％的反式肉桂酸转化为L-苯丙氪酸。

摘要:研究了具有不同微生物群系的接种污泥、流动方式和流速对上流式厌氧污泥床(UASB)反应器中活性污泥粒化的影响。颗粒化过程包括：微生物絮凝体的形成、亚核的形成，亚核增长和颗粒成熟四个阶段。微絮凝体的形成取决于酸化菌的作用。流体的动量传递和流体对悬浮物的剪切作用是影响亚核形成的关键性工程因素。为此提出最低流速概念，即形成污泥膨胀床的最低流速。合适的进料速率、污泥负荷、布水均匀性以及碱度控制是UASB反应器工程放大和过程控制的四大要素。

摘要:豌豆根瘤菌(Rhizobium Leguminosarum)结瘤基因nod A的启动子内发现了具有两个不同功能的结构区域：其一我们称为Rip在nodA诱导表达中起着关键作用，可能识别经诱导剂作用而发生构象变化的调控蛋自NodD；另一为Rip缺失后留下的，我们称为Rp区。只要Rp存在，不需要诱导荆，NodD蛋白即能导致结瘤基因nodA的表达。因此该区可能识别原始构象的调控蛋白NodD。

摘要:研究了蚕丝固定化脂肪酶的工艺条件，并考察了固定化脂肪酶的稳定性。试验结果表明：蚕丝与对-β-硫酸酯乙砜基苯胺(SESA)进行反应的最适条件是PH=10．8，SESA：2．0g／g蚕丝，反应生成的对氨基苯磺酰乙基蚕丝(ABSE-蚕丝)经重氮化后与脂肪酶偶联的最适条件是：pH=7．5，偶联时间>10h。加酶量为168～308u／g蚕丝时，所得固定化脂肪酶活力为106～160u√g蚕丝．此时固定化冀的活力回收率较高(>52％)。固定化脂肪酶稳定性较高．其操作半衰期约为250h。

摘要:设计并装置容积1000L玻璃管道光合生物反应器进行小球藻大规模中试培养研究。当停留时间为3d．收获培养物总体积的1／3时。可建立稳定的连续培养系统，使小球藻的平均密度保持干重3g／L，最大生长量为干重0．605g／L·d，平均生长量为干重O．375g／L·d。所设计的光合反应器是稳定的．研究建立的培养技术具有推广应用前景。

摘要:为了得到t—PA组合突变体FrGGI在CHO细胞中的高效表达，将表达质粒筛选基因启动子上游的增强子(enhancer)去除．构建了FrGGI真核表达质粒pZLFrGGI。酶切线性化后．采用大剂量DNA电击介导法，转染dhfr基因缺陷型中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-dhfr^-)。氨甲喋呤(MTX)筛选转染细胞，混合加压．挑选克隆。在1×10^-7mol／L MTX压力下。获得表达水平达1 500～2500Iu/106细胞·24h的细胞株。此细胞株表达水平稳定，形态良好．倍增时间约为36h．且有进一步提高表达水平的潜能，有望发展为工程细胞株。

摘要:利用DNA重组技术生产自然界不能或难以得到的多肽产品用于医药、农业、食品工业等领域，目前在生物领域已有了很大的进展。近年来，科学工作者经体外合成人溶菌酶基因，经克隆、转化，在真核、原核细胞中获得表达^[1-3]。溶菌酶能水解革兰氏阳性菌细胞壁上的β-1，4糖苷键，在内部渗透压的作用下，细胞胀裂开[4，5]。它对有些革兰氏阴性菌，如埃希氏大肠杆菌、伤寒沙门氏菌，也有同样作用。因此此酶在食品，特别是在医药上具有重要意义。在这篇文章中，我们报道人工合成人溶酶的克隆和在 温控启动子P_RP_L调控下在大肠杆菌中的表达。

摘要:P16^ink4是CDK(Cyclin Dependent Kinase)抑制蛋白家族中的一员，在细胞内特异性地与CDK4和CDK6结合，抑制Cyclin D1／CDK4 和 Cyclin D1/CDK6 功能，参与调控细胞G1期至s期的转换[1,2]。1994年，Kamh和Nobon等发现在多种肿瘤细胞株中。P16^ink4基因存在突变^[3,4]。进一步的研究表明多种原发性肿瘤，比如胰腺癌、食管癌、肺癌、头颈部鳞癌、膀胱癌、前列腺癌以及白血病等都发现存在P16^ink4基因的突变^[5-7]．而且家族性黑色素瘤患者中该基因存在种系突变(Germline mutation)^[8]，表明该基因与黑色素瘤的发病有关。体外研究表明导入P16^ink4基因表达裁体可抑制肿瘤细胞的增殖^[9]，并可抑制Ras引起的细胞增殖和转化^[10]，而突变的P16^ink4则丧失了抑制Cyclin D/CDK的功能^[11.12]。这些研究结果表明P16^ink4基因可能是功能上非常重要的抑癌基因。为了研究该基因的功能。以及该基因突变与肿瘤发生、发展间的关系，我们克隆了P16^ink4基因的cDNA编码序列。

摘要:在真菌的反硝化作用中，一种细胞色素P-450起着一氧化氮还原酶的作用，被称为细胞色素P-450nor^[1]。最近的研究发现：真菌细胞色素P-450nor有三种类型。除了缣孢菌(Fusarium oxysporum)P+450nor(即F．P-450nor)外。还有两种存在于柱孢菌(Cylindrocarpon tonkinense)．即C. P-450norl和2^[2]。 F．P-450nox和C．P-450norl能以NADH为直接的电子供体，使NO还原生成N₂O。C. P-450nor2不仅能直接利用NADH。而且能直接利用NADPH．还原NO生成N₂O。F. P-450nor基因已被克隆和测序^[3-4]。本文测定了C．P-450nor2的eDNA编码区全序列，3’非编码区部分序列和5’引导序列。

摘要:固定化技术已在生物工程中得到广泛的实际应用，特别是应用于生物转化以提高酶或细胞的稳定性，实现连续操作等。对于含胞内酶的细胞的生物转化．一般先破碎细胞，使酶释放出来，再进行酶固定化。由于酶的稳定性通常与细胞膜的结台有关^[1]，细胞破碎中常导致酶的失活。如果不破碎细胞，对完整细胞固定化，又会有传质困难抑制酶活力的发挥。我们研究出渗透交联固定化细胞技术以解决这个矛盾。先采用某种试剂(多为表面活性剂)处理细胞，提高细胞的通透性，再进行交联固定化．可以保证酶的活力破坏较小，又减小了传质阻力。既提高了固定化细胞的稳定性，又提高了固定化细胞的表观酶活。称这种固定化技术为渗透交联固定化细胞技术。Prabhuaney等采用CTAB-戊二醛处理聚丙烯酰胺凝胶包理的含青霉素酰化酶E. coli细胞^[2]。Nmhida采用1，6-己二胺-戊二醛处理含天冬氨酸酶的E．Coli细胞^[3]。渗透交联固定化处理会损伤细胞和酶是这种技术的一个矛盾。本文采用多乙烯多胺-戊二处理方法．因多乙烯多胺既起到表面活性剂的作用．又是交联剂。而且渗透能力比CTAB和1,6-已二 胺为低，故对细胞和酶损伤较小。