摘要:将人工合成的编码九肽的随机序列DNA片段克隆进丝状噬菌体表达载体FUSE5，经多次电击转化和表达，获得肽段与噬菌体pⅢ蛋白融合并展示在噬菌体表面的随机序列九肽表位肽库。库容量达10 10个克隆。以Ⅳ型胶原酶为靶蛋白，采用亲和纯化筛选模式，从中筛选出Ⅳ型胶原酶结合肽。进一步ELISA检测筛选出与Ⅳ型胶原酶特异结合的20个阳性克隆。序列分析发现一组肽含有WDXXD的共同序列，一组含有WVGXXR的共同序列。其中WDXXD的序列与Ⅳ型胶原酶单链抗体可变区序列同源。结果表明，多肽库是筛选蛋白特异结合肽的有力工具，表位九肽库的构建和筛选方法的建立为进一步应用筛选具有高亲和力的特异结合肽奠定了基础。

摘要:大肠杆菌的phn操纵子与膦酸酯(Pn)的利用密切相关。实验利用PCR扩增、TA克隆等方法．获得了大肠杆菌phn操纵子中phnE、phnF和phnG基因的亚克隆，并进行了序列测定。通过P1噬菌体转导，构建了phnF的TnphoA’-9转座子插入突变体JW19，该突变仅对大肠杆菌的AEPn同化有微弱的影响，而利用phnE和phnG序列与染色体重组构建的phnF全缺失突变株JW67，则几乎不能在．AEPn培养基上生长。通过phnF基因的诱导高表达，用亲和柱层析分离纯化了PhnF。蛋白，达到电泳纯。并且用凝胶延滞的方法观察到，PhnF蛋白与加phn操纵子DNA片段相互作用后，可使凝胶图谱类型发生改变。

摘要:以水稻“爱知旭”(Aichi—aShahi)为寄主，将带选择标记的质粒pCSN43和pBF101为外源DNA，利用限制酶诱导整合(REMI)这种新方法转化稻瘟病菌原生质体，从筛选到的数百个转化体中分离出3个与致病能力密切相关的突变体R2H65、R2H69和R281565。其中，R2H65和R2H69只产生畸形分生孢子，分生孢子的发育和附着胞的形成以及黑色素的合成均受到极大影响，致病性测试证明完全丧失致病能力；R281565的许多表型与野生型的相似，但致病能力却大大降低。

摘要:研究了不同理化因子对水母雪莲(Saussurea medusa Maxim)愈伤组织生长及黄酮类化合物生物合成的影响。结果表明，有利于细胞生长及黄酮形成的合适温度为25℃。白光对愈伤组织生长无促进作用，但有利于黄酮的形成。培养基中添加1mg／L NAA和O．2mg／L的KT组合对细胞的生长较有促进作用。5％蔗糖和1％葡萄糖的组合有利于细胞的生长和黄酮的形成。用⁶⁰C0-γ射线辐照愈伤组织，在剂量为4000Gy的条件下，获得一个合成黄酮能力高于原愈伤组织70％的细胞系。用高效液相和紫外分光光度法，测定离体培养光照条件下干细胞总黄酮的含量为3．2％，是暗培养的4．4倍。培养温度25℃时干细胞黄酮的含量为2．02％，分别为20℃，35℃时的5倍和3．2倍。

摘要:基于对樟脑(camphor)和苯菌灵(Benomyl)可能分别诱导细胞核膜融合和染色体不分离性重组的机理认识，设计了MCBL共诱导平板，以察氏(Czapek)培养基含有1％camphor及0．5μg／ml Benomyl为基础制作平板。以属间融合组合Aspergilus niger×Trichoserma reesei为例，研究所设计的几种诱导平板处理方法对融合子代群体的基因型和表型变异的影响，结果表明常规分步诱导处理，杂合二倍体阶段缺乏或极短暂难以获得重组单倍体；而经过MCB^L共诱导平板处理能够获得类型齐全的分离子，显著提高表观二倍化率和染色体不分离性重组单倍体的比率。显示MCRL共诱导平板能够有效地扩增捕捉到极短暂杂合二倍体的机率，促进不稳定异核体向重组单倍体的转化。扩增染色体不分离性重组频率。再生菌丝菌 龄对共诱导效果影响显著。由此对共诱导机制和应用前景提出讨论。

摘要:对表达人骨形成蛋白－2A(BMP－2A)的重组大肠杆菌YK537／pDH－B2m在500ml摇瓶中进行了培养条件的摸索实验，继后用5L自控发酵罐进行分批培养和分批补料培养，以获取rhBMP－2A两种培养方式结果比较表明，在培养过程中保持30％～40％左右的溶解氧和限制性流加葡萄糖可以使BMP-2A的含量达到2．78g／L，最终菌体密度为OD₆₀₀53(相当于干菌21．2g／L)，重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的25％。该培养技术的关键是：(1)在培养过程中保持适当的溶解氧；(2)限制性流加葡萄糖；(3)42℃起始诱导的时间控制在对数生长中期，持续表达时间为4h；(4)细菌持续生长的比生长速率控制在0．3h -1左右。

摘要:用PCR法克隆出nNOS的CaM结合区基因(nNOS 2455～2988bp)，并在大肠杆菌中进行了高效表达。经金属离子螯合亲和层析得到纯度为90％以上的重组蛋白．分子量为22kDa，CaM Oveday assay证实该蛋白具有CaM的结合活性。由于所表达的重组蛋白既具有序列特异性又具有CaM的结合活性．因此。可将它作为筛选nNOS特异性抑制肽的靶蛋白，亦可用于特异性抗体的制备。

摘要:青霉素G酰化酶(PA)操纵子的调节基因(pacR)存在于青霉素G酰化酶结构基因(pac)内部Dral-Taql一段约500bp的DNA片段内，此片段内含有2个ORF。2个ORF及其突变体分别克隆到pUC18得到一系列重组质粒，用这些重组质粒转化青霉素G酰化酶产生菌E.coliD816，测定克隆片段对PA表达的影响。如果克隆片段含有具功能的pacR，诱导剂苯乙酸(PAA)不能使由高拷贝却pacR表达的阻抑物全部失活，部分阻抑物结合pac操纵基因，阻碍RNA聚合酶对pac的转录，因此PA的表达量降低。结果表明，阻抑物是由pac结构基因内部的ORF2编码的蛋白因子，pacR即ORF2。RNA—DNA杂交实验证实了pacR在转录水平阻抑pac的表达。

摘要:以UVS．2为探针从第25期非洲爪蟾胚胎头背部的cDNA文库中筛选出了一个1．8kb的孵化酶基因(xhe)，其转录产物最早出现于第17期胚胎的头背部，在第30期转录量达到高峰，随后便逐渐减少。该基因含有编码514个氨基酸的一个开框阅读框架，含有信号肽和原酶序列。所推测出的成熟蛋白有425个氨基酸，包括位于N一端的含有200个氨基酸的金属蛋白酶序列和位于C端的两个各110个氨基酸的CUB重复区。而UVS．2只代表该基因C端大约3／4的部分。同时还发现该酶分子量为60kDa，是一种胰蛋白酶类型的金属蛋白酶。它很不稳定，在纯化过程中极易降解为40kDa分子。60kDa分子具有很强的卵黄膜溶解活性和蛋白酶活性。其中CUB重复区很可能在介导卵黄膜和40kDa分子中起着重要作用，而40kDa分子很可能是在纯化操作过程中，由60kDa分子发生降解或自身降解丢失了两个CUB重复区而形成的，它只是60kDa分子中的一个金属蛋白酶主功能区，所以它没有卵黄膜溶解活性，尽管仍具有很强的蛋白酶活性。

摘要:用固相化甲肝抗原，对所构建的噬菌体抗体库进行了3轮淘筛。第3轮淘筛后洗脱下来的噬菌体，较第l轮增加了近100倍。含有抗体重链基因和轻链基因的重组克隆．也由淘筛前的25％增至100％。说明甲肝抗原对抗体库的淘筛，富集了表面呈现甲肝人单抗的噬菌体。经夹心ELISA法筛选到抗甲肝病毒噬菌体抗体，并以竞争抑制实验进一步证实了这些抗体的特异性。

摘要:以抗癌药物L－天冬酰胺酶生产为应用背景，针对发酵过程中存在严重耗氧问题，研究了氧载体对发酵过程的影响。通过对几种氧载体的筛选，认为正十二烷最适合于该发酵过程。随后以产物L－天冬酰胺酶活性、菌体浓度以及溶氧水平为主要指标，考察了氧载体在发酵过程中的作用．实验表明，发酵基质中5％正十二烷的添加量为最佳浓度，这种氧载体的加入，明显地提高了发酵介质中的溶氧水平，改善了供氧条件，增加了菌体浓度，提高了L－天冬酰胺酶发酵水平，在优化条件下，可使发酵液最终酶活提高21％左右。

摘要:不同的碳源条件下，真养产碱杆菌可在胞内积累聚羟丁酸(PHB)或含羟基戊酸单体(HV)比例不等的聚羟丁戊酸共聚物(PHBv)。利用次氯酸钠，氯仿混合液体系提取上述羟基脂肪酸聚酯(PHA)，提取率为85％，纯度达97．O％。以差示扫描热分析法对PHB和PHBV材料进行热性质研究，发现材料中的HV组分逐渐增加．材料的熔点Tm，熔化焓Hm逐渐下降。热分解峰值逐渐向低温区偏移。但含HV为6lmol％的PHBV材料有关热性质出现回升现象。

摘要:对经过修饰的烟草Ⅰ类几丁质酶(Ⅰ—chitnaseⅠ-Chi)和β－1，3－葡聚糖酶(Ⅰ—gIu—canase，Ⅰ-Glu)cDNA分别构建了原核表达载体，并转化大肠杆菌BL2l。经IPTG诱导表达，SDS-PAGE法证明表达产物Ⅰ—Chi和Ⅰ—Glu的分子量分别约为30kDa和31kDa，在菌内以包涵体形式存在。经包涵体的收集、洗涤、裂解和复性，两种表达产物在体外均表现出较强的抑病原真菌活性，且Ⅰ-chi的抑菌活力大于ⅠI—Glu，二者具有很强的体外抑菌协同性。

摘要:用水稻幼穗为外植体进行组织培养，研究了影响其体细胞胚胎发生的有关因素，建立了高频率体细胞胚胎发生的培养程序。结果表明不同基因型之间体细胞胚胎发生率的差异达到61．2％；生长素2，4－D对诱导水稻体细胞胚起重要的调控作用，细胞分裂素BA有一定的协同促进作用。干燥处理可提高愈伤组织体细胞胚胎发生率，愈伤组织含水量在60％～80％范围的培养效果较好；外源DNA溶液浸泡发育早期的心状体细胞胚．其进一步发育时异常胚的频率显著增加．成苗率降低。

摘要:将在木聚糖上生长的瑞氏木霉(Trichoderma reesei)RutC-30的cDNA文库全部质粒转化已携带有毕赤氏酵(Pithia stipitis)木糖还原酶基因的重组酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)菌株H475，在H475中构建了瑞氏木霉的cDNA表达亚文库。在以木糖为唯一碳源的选择性酵母合成培养基上，从该亚文库中筛选到瑞氏木霉木糖醇脱氢酶cDNA基因．该基因片段长为1．3kb。Southern、Norhern印迹杂交分析和蛋白质凝胶电泳结果表明该基因确实来源于瑞氏木霉，所编码蛋白质分子量约为40kDa。携带有毕赤氏酵母木糖还原酶和瑞氏木霉木糖醇脱氢酶基因的重组酵母能够在以木糖为唯一碳源的培养基上生长，并能将90％以上的木糖转化为木糖醇、乙醇和其它副产品。

摘要:根据杂交瘤细胞培养中单克隆抗体生产的动力学原理，采用灌注培养方式、添加醋酸钾和丰富营养物培养的途径，对反应器放大培养过程进行了优化。每天灌注l／2反应器工作体积，与分批培养相比，细胞密度由4 5×10⁵／ml提高到l1×10⁵／ml，单抗浓度由19mg／L提高到28mg/L；添加1g／L醋酸钾，细胞密度基本保持不变．但单抗浓度增加到38μg／ml；用丰富营养物培养后，细胞密度和单抗浓度分别进一步提高到42×10⁵／ml和94mg/L。抗B型红细胞单抗的血凝滴度，由分批培养的1：32．最终提高到l：256

摘要:酿酒酵母是基因工程产品研究和生产的一个重要表达系统，表达载体和宿主细胞是构成表达系统的两大要素，虽然外源基因表达的方式、强度主要由表达载体控制．但宿主细胞的选择对最终获取产品的质量和数量也具有十分关键的作用。酿酒酵母基因工程宿主菌除要求具有高的DNA转化效率、细胞生长密度和稳定性、低的内源蛋白水解酶活性外，还必须具备与表达载体相对应的营养缺陷筛选标记，用传统随机诱变方法得到的营养缺陷变异株，因含有本底和隐性突变，在细胞生长密度和稳定性方面往往不能满足基因工程产品研究和生产的要求，甚至不能有效地表达外源基因。本文报道用重组技术，通过非随机方法构建了酿酒酵母基因工程宿主茁。研究表明用该方法得到的宿主菌在细胞生长密度、稳定性和表达外源基因方面优于用传统随机诱变方法得到的宿主菌。

摘要:定量分析血糖在门诊和许多疾病如糖尿病，甲状腺机能抗进，粘液腺癌．垂体机能减退。肾上腺机能减退和妨碍葡萄糖吸收等疾病的诊断有重要意义。测定葡萄糖有很多方法，采用葡萄糖氧化酶比色法，由于操作简便．专一性强，灵敏度高，因此比较适合用于常规测定⑴。但是葡萄糖氧化酶的价格高。把酶固定在不溶于水的支持物上，酶可以重复使用，因此可以降低成本。虽然葡萄糖氧化酶固定在烷基胺玻璃上。在连续流动系统中测定葡萄糖，但烷基胺固定的酶还没有用来测定血糖。一般来说．烷基胺玻璃抗微生物的腐蚀。有很广的pH适应性和不同溶剂如乙醇和丙酮的稳定性。本文报道利用烷基胺玻璃珠固定葡萄糖氧化酶常规分析血糖。

摘要:由于2－酮－L－古龙酸还原酶(简称KGR)的存在，理论上造成了Vc合成前体2－酮－L－古龙酸(简称2KLG)部分被还原成L－艾杜糖酸〔1.2〕，影响了Vc二步发酵的产率。而从L－山梨糖到2－酮－L－古龙酸的转化中，除被KGR催化的还原负反应外，均属于氧化反应。所以，从该角度出发，抑制KGR的活性，消除还原负反应，是提高2KLG产酸率，进而提高Vc二步发酵产率的关键。本研究在纯化KGR的基础上⑶，对其物质组成及性质进行了研究，并研制了几种稀土元素化合物，考察了它们对KGR纯酶及在L－山梨糖发酵中对2－KLG产酸率的影响。

摘要:聚－β－羟基丁酸酯(PHB)是微生物合成的一种以颗粒状态存在于细胞中的高分子聚合物，由于它具有生物可降解性、生物相容性等特性，在医学上具有独特而广阔的应用前景。从微生物细胞中分离PHB的方法有溶剂萃取法⑵、化学试剂法〔2-4〕和酶法⑸。目前工业生产中以溶剂萃取法和酶法为主，但这两种方法成本均很高。用次氯酸钠破细胞壁从真养产碱杆菌中分离PFIB的化学试剂法具有操作简单、效率高等优点⑹，但次氯酸钠会引起PHB分子的严重降解〔7.8〕。Hahn等人⑼比较了用次氯酸钠作用于真养产碱杆菌和重组大肠杆菌的情况，发现低浓度的次氯酸钠对重组大肠杆菌中的PHB几乎不降解，高浓度的次氯酸钠降解作用也小于对真养产碱杆菌中PHB的降解。本文研究了用NaClO与SDS相结合的作用从重组大肠杆菌中分离PHB的方法，试图利用二者的互补作用．降低SDS用量，减少对PHB分子量的降解．以获得较高纯度和分子量的PHB。

摘要:我们以前的细胞核移植工作^[1，2]表明：移核卵早期胚胎发育模式(主要指卵裂速度及卵裂模式)与受体卵相同，而与供体核种类无关；供体与受体之间亲缘关系的远近及染色体数目的差异程度，对移核卵囊胚以后的发育有重要影响，但对不同组合间细胞核移植所得囊胚比例影响较小。由此我们可以假定，移核卵最初发育的启动及囊胚以前的发育主要与受体卵有关，而和供体与受体之间亲缘关系的远近关系不大。为了进一步验证这一理论并寻找除染色体数目⑵以外其它影响移核卵囊胚以后发育的因素，在本实验中，我们选择了小鼠(图版Ⅰ—A)和泥鳅(Ⅰ—B)即不同纲间动物作为细胞核移植的材料。

摘要:多孔微载体是近年来发展起来的一种用于大规模高密度培养动物细胞的支持物，具有许多优点，如：容易固定细胞，适合于贴壁细胞和悬浮细胞的固定化连续灌流培养；细胞生长在载体内部，增加了细胞固定化的稳定性，可降低血清用量，适合长期培养；能保护细胞免受机械损伤，增加搅拌强度和通气量，强化反应器的传质；比表面积大，为细胞提供了充分的生长空间；细胞固定化过程简单无害，细胞能从长满细胞的微载体中自动转移到未长细胞的新载体中生长，接种方便，操作简单。特别适合于搅拌式、气升式、周定床和流化床等生物反应器的大规模培养〔1，2。尿激酶原(pro-UK)是一种重要的溶栓药物．与一般的生物医药制品相比，pro-UK给药量较大(约20mg／人～80mg／人)，小规模生产不能满足市场需求。本文报道利用20L搅拌式反应器培养分泌pro-UK的重组CHO细胞的工艺条件，取得了初步结果。