摘要:冷激蛋白CspA家族在细菌适应低温环境方面起到重要作用。介绍了冷激反应的生理特征以及CspA家族的广泛性，CspA家族结构、功能和诱导调控研究的最新进展。

摘要:将缺失C端信号肽序列的Osmotin基因和在第96位氨基酸处发生琥珀突变的Osmotin基因置于CaMV双35S启动子驱动下，转化马铃薯，获得NPTII抗性植株。经对20株NPTII抗性植株的Southern检测和对55株NPTII抗性植株的Nouthern分析，证实了Osmotin基因的插入和转录。对21株转Osmotin基因和17株转琥珀突变Osmotin基因植株的抗病性测定，分别筛选出8株和10株抗病性与非转基因植株有显著差异(α=0.05)的转基因植株。对8株转Osmotin基因植株的Dot blotELISA和Western杂交分析，证明Osmotin蛋白胞外分泌能够赋予转基因植株叶片抗晚疫病的能力，研究结果暗示Osmotin蛋白具有抑菌活性的部位可能位于其N-端。

摘要:ΦHAU3^R是变铅青链霉菌66中对噬菌体ΦHAU3显示抗性的基因，已从基因组中获得分离。将基因组中邻近于该基因两侧的一个3.5kb和另一个3.8kb的DNA片段分别以其在染色体上的天然取向插入到一个由pIJ101衍生的质粒pIJ653上，构建成pHZ806。然后在pHZ806上对应于pIJ101复制子的区域中插入一个spc/str抗性基因，同时在3.5kb和3.8kb片段之间插入一个潮霉素抗性基因(hyg)，衍生出一个新质粒pHZ808。由于pHZ808中不具有完整的pIJ101复制功能区，所以它不能在链霉菌中复制。然而，在该质粒3.5kb和3.8kb片段之间插入的任何DNA片段，在导入到变铅青链霉菌中后都可借助于3.5kb和3.8kb两个片段与内源染色体的同源区域所发生的双交换而稳定地整入到内源染色体的特定区域(3.5kb和3.8kb片段之间)，同时置换出染色体上的ΦHAU3-R基因。发生了这种基因置换的重组子菌株会对噬菌体ΦHAU3变得敏感，这种反选择方法可用来浓缩和初选携带定域插入片段的重组子。已利用潮霉素抗性基因(hyg)作为一个模式基因片段阐明了这种载体和这种在染色体上定域克隆外源基因片段的方法学和适用性。同时，用pHZ808作载体克隆另外的基因片段时还有另一个优越性：hyg可作为报告基因一同参与外源基因片段的定域整合，携带插入片段的重组子除了对噬菌体ΦHAU3显示敏感性以外，还对潮霉素显示抗性。

摘要:从一株土壤链霉菌(Streptomyces sp.)Y405的发酵液中通过硫酸铵分级盐析、290树脂脱色、Sephadex G-75凝胶过滤、DEAESephadex A-25阴离子交换层析和LysineSepharose4B亲和层析，获得一种新型的具有纤溶活性的蛋白酶SW-1。每升发酵液中可获得4.2mg SW1样品，回收率为12.0%，每毫克蛋白活力达2952.3尿激酶单位，以发酵液作为起始，所获得样品纯度提高230.6倍，HPLC检测纯度约为83.5%。SW-1在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中是单肽链蛋白，分子量为30kD，等电点为8.5，测定其N-端17个氨基酸序列为Arg/Asn/Phe-Pro/Asp-Gly-Met-Thr-Met-Thr-Ala-Ile-Ala-Asn-Gln-Asn-Thr-Gln-Ile-Asn，N端第一和第二残基具有不均一性，根据氨基酸组成分析推算SW1由262个氨基酸组成。SW-1的纤溶活性可被10mmol/L PMSF、1mmol/L EDTA和1mol/L赖氨酸完全抑制，表明SW1其赖氨酸结合位点与活性有关。SW-1的纤溶活性在4～37℃和pH4.0～9.0具有较好的稳定性，最适pH为8.0。在纤维蛋白加热平板上，SW-1和SW-1与纤溶酶原的混合液显示相同的纤溶活性，表明SW-1对纤维蛋白具有直接的降解作用，而不具有激活纤溶酶原的活性，因而SW-1是一种纤溶酶而不是纤溶酶原激活剂。

摘要:PTHrP(甲状旁腺激素相关蛋白，Parathyroid hormone related protein)与多种肿瘤的生物学行为有关，尤其对肿瘤的骨转移起重要作用。应用其可溶性受体阻断它的病理作用是一个非常值得研究的课题。从肾癌组织中提取RNA，采用逆转录PCR (RT-PCR)方法获得PTHrP受体N端胞外区543碱基对的带信号肽的cDNA片段。将其核苷酸序列与国外发表的资料相比，基因中第262位核苷酸由T变为C，相应密码子由TAC变为CAC，导致氨基酸变异，即由酪氨酸变为组氨酸。将获得的受体基因克隆到原核表达载体pET-3a，在大肠杆菌得到高效表达，经ELISA证实表达产物可与PTHrP特异性结合。体外生物学活性检测表明表达产物可阻断PTHrP的生物学活性。

摘要:地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediterranei)U-32是一种临床上重要的抗生素——力复霉素SV的产生菌。研究表明，在地中海拟无枝菌酸菌的力复霉素生物合成过程中，3-氨基5-羟基苯甲酸合成酶(AHBAS)是合成中间体C₇N母核(又称AHBA)的关键酶。通过筛选以广宿主粘粒(Cosmid)pLAFR3为载体构建的地中海拟无枝菌酸菌U-32的基因文库，获得6个阳性克隆子。将含有AHBAS基因的约2.5kb的片段克隆到pBluescript Ⅱ SK和KS上，进行酶谱分析得到其在染色体上的初步定位。序列测定表明地中海拟无枝菌酸菌U-32中的AHBA合成酶基因，由1167bp组成，起始密码子为ATG，终止密码子为TGA，共编码388个氨基酸，所克隆到的AHBA合成酶基因在大肠杆菌的启动子控制下获得诱导表达，蛋白分子量约为43kD。

摘要:通过PCR方法从羊肝总DNA中获得了羊β-乳球蛋白(BLG)基因第一和第二内含子，以羊β-乳球蛋白基因(BLG)5′区5kb为调控序列，构建了乳腺表达组织纤溶酶原激活剂突变体(La-tPA)载体。对540枚小鼠受精卵进行显微注射，经PCR和Southern blot检测，获得6只整合有人La-tPA的转基因小鼠，整合率为32%。同时研究了转基因在小鼠体内的表达。Northern blot分析表明，在一些转基因鼠乳腺中表达出La-tPA。在基因鼠乳汁中检测出La-tPA的表达达6μg/mL。这为未来利用转基因动物生产La-tPA提供依据。

摘要:运用同源重组技术将异戊酰基转移酶基因整合至螺旋霉素产生菌(Streptomyces spiramyceticus F21) 的染色体上，构建了稳定的生技霉素基因工程菌。在不加压的情况下传代，菌种携带选择性遗传标记情况、生长、发酵效价及发酵产物的TLC分析均表明此基因工程菌有较好的遗传稳定性，且发酵效价及产物的组分均得到改善。Southern杂交证明外源基因在螺旋霉素产生菌染色体上的整合情况。

摘要:测定了斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura multinucleocapsid nuclear polyhedrosis virus, SlNPV)中山大学分离株(Zhongshan University isolate, ZSU)蜕皮甾体尿苷二磷酸葡糖转移酶(Ecdysteroid UDPglucosyltransferase, EGT)基因的核苷酸全序列。该基因编码框包含1530个核苷酸，有509个氨基酸组成的蛋白质，分子量为58.5kD，TATA框位于ATG上游44处。在终止密码子TAA下游13位，有真核生物基因mRNA转录poly(A)加尾酶信号序列：AATAAA。同源性比较显示，SlNPV egt基因推测的氨基酸序列与其它昆虫杆状核多角体病毒EGT序列同源性很高，与海灰翅夜蛾核多角体病毒(Spodoptera littoralis nuclear polyhedrosis virus, SliNPV)同源性最高，核苷酸和氨基酸序列同源性分别为84%和91%，而且有一些与EGT结构和功能密切相关的氨基酸是绝对保守的；根据EGT蛋白进行分子进化树分析，把昆虫杆状病毒EGT主要分成两大类。

摘要:在批式发酵优化条件基础上，通过对流加补料方式、流加起始时间、批式流加间隔时间、补料液的组成等对发酵过程的各种参数，如产物量、转化率、生物量、溶氧、发酵液pH、发酵液黏度以及产物分子量等的影响进行了研究，确定了普鲁兰流加补料发酵的优化条件，使发酵转化率达到70%以上，产物平均分子量在10万以上。

摘要:构建了人肿瘤坏死因子缺失1～7位和102～107位共13个氨基酸编码序列的cDNA，即人肿瘤坏死因子衍生物b(rhTNFαDb)，转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导后，目的蛋白的表达量占菌体总蛋白量的30%～60％。其中可溶性rhTNFα Db蛋白约占超声上清总蛋白的40%。经柱层析纯化后，目的蛋白纯度达95%以上。以L929细胞株检测rhTNFα Db的细胞毒活性，测得rhTNFα Db的比活性为2×10⁸IU/mg。较rhTNFα 原型提高一个数量级。rhTNFα Db的体内外抑瘤试验也取得了初步结果

摘要:将能够在大肠杆菌内高效表达棒状杆菌2，5-DKG还原酶I基因的质粒pBL4改造成为具有链霉素抗性的质粒pBLS，采用改进的感受态转化法将pBLS导入能够利用葡萄糖高产2,5-DKG的欧文氏菌SCB125中，通过提高温度诱导，经SDS-PAGE分析2，5-DKG还原酶I获得了高效表达，占菌体总蛋白的22%，不形成包涵体。体外酶活测定结果表明表达的酶具有较高的活力。同时，通过凝胶活力染色发现了宿主欧文氏菌SCB125中存在一个活力较强的2-酮基醛糖还原酶。

摘要:维生素C的生产目前国内广泛采用由产酸菌(Gluconobacter oxydans)与伴生菌(Bacillus megaterium)组成的2980菌系，在2980中G.oxydans单独生长传代困难，其生长和产酸需要B.megaterium参与。以Bacillus subtilis Ki-2-132(pUB110)作为伴生菌与原2980的G.oxydans组合，获得稳定产酸的新菌系。在此基础上建立了适合我国混菌发酵产酸菌外源基因(Kanr)转移的筛选模型。同时报道了以携带有自杀性载体P1：：Tn5的大肠杆菌E.coli W3110为供体菌对G.oxydans进行Tn5诱变的条件和结果。

摘要:对银杏细胞悬浮培养及其次生代谢产物银杏内酯的产生进行了研究。考察了各种理化因子对细胞生长及银杏内酯产生的影响；对培养物中银杏内酯进行了定性及定量测定。HPLC测定结果显示，银杏悬浮细胞培养物中银杏内酯的含量可达0.0099%。

摘要:用PCR方法扩增人微小纤溶酶原(Microplasminogen,mplg)cDNA，与分泌型酵母表达载体pHIL-D8重组，构成受醇氧化酶基因(AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒，然后转化GS115酵母菌，经表型筛选、PCR扩增筛选阳性克隆，然后以甲醇诱导表达，mplg分泌至培液，以酪蛋白-琼脂糖平板溶圈法、发色底物法检测，mplg显示出纤溶活性。

摘要:分别以枯草芽孢杆菌大肠杆菌穿梭质粒pHB201和pRP22为载体，通过感受态转化方法，将Bt-HD-1杀虫蛋白基因cry1Ac导入了水稻纹枯病生防菌株枯草芽孢杆菌B916。工程菌株质粒酶切电泳分析、Southern印迹分析和杀虫生物活性测定结果证实了cry1Ac基因的导入及其在B916中的有效表达。抑菌测定证明工程菌株保持了原野生型菌株良好的抑菌活性。质粒稳定性分析表明以载体pRP22构建的工程菌株Bs2249具有良好的稳定性，而以载体pBH201构建的工程菌株Bs2014则不稳定。此外，实验还证实Bt基因的导入与表达对B916的生长没有不良影响。

摘要:应用RT-PCR技术从分泌抗人黑色素瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞HB8760中克隆了抗体轻、重链可变区基因，用(Gly₄Ser)₃连接肽基因将V_H、V_L连接成ScFv基因，并进行了序列测定。ScFv基因全长927bp，其中VH基因长360bp，编码120个氨基酸，V_L基因长324bp，编码108个氨基酸。在大肠杆菌融合表达载体pGEX-4T-1中表达了GST-ScFv融合蛋白，表达产量占菌体总蛋白的29%。凝血酶消化后的产物具有黑色素瘤细胞结合活性。

摘要:利用分子生物学方法，构建了大肠杆菌分枝杆菌(E.coliMycobacterium)穿梭表达质粒pBCG-2100，研究了编码日本血吸虫中国大陆株谷胱甘肽S转移酶(Glutathione Stransferase,GST)抗原基因在卡介苗(Bacillus Calmette Guerin,BCG)中的表达。以含人结核杆菌热休克蛋白(Heat shock protein,hsp)70基因全长序列的质粒pMT-70为模板，扩增出hsp70启动子，测序选出无错配的启动子，将其定向克隆入E.coliMycobacterium穿梭质粒pBCG-2000中，构建成E.coliMycobacterium穿梭表达质粒pBCG-2100。再将编码GST的cDNA按正确的阅读框顺序，克隆到pBCG-2100中hsp70启动子的下游，得到分枝杆菌表达质粒pBCG-GST。将pBCG-GST电转化入BCG中，筛选出重组BCG疫苗，经热诱导后所表达的重组GST(rGST)抗原，为可溶性蛋白，经纯化后，在SDS-PAGE上分子量为26kD处可见明显的表达蛋白带，其表达量占BCG菌体总蛋白的13%。Western blot提示rGST能与抗GST的抗体反应。

摘要:在MS培养基上进行水母雪莲(Saussurea medusa Maxim)细胞悬浮培养时研究了碳源和氮源的影响。结果表明碳源以蔗糖最适合，蔗糖浓度则以40g/L较好，细胞生长量干重为18.12g/L，总黄酮合成量达到1423.25mg/L。在培养过程中，水母雪莲细胞能够快速将蔗糖水解为葡萄糖和果糖，并首先利用葡萄糖。氮源总浓度(包括NH⁺₄和NO^-₃)为60～120mmol/L，NH⁺₄/NO^-₃比例为20/40有利于雪莲细胞生长和黄酮合成。用HPLC检测显示4′,5,7-三羟基3′，6-二甲氧基黄酮(Jaceosidin)和4′，5，7-三羟基-6-甲氧基黄酮(Hispidulin)2种黄酮的含量分别达到细胞干重的1.46%和0.010%

摘要:研究了接种病毒后的鸡胚成纤维细胞(CEF)代谢与传染性法氏囊病病毒(IBDV)增殖的关系，结果表明，感染细胞对未感染细胞葡萄糖消耗的相对增加量α可作为IBDV增殖的参数。Α随感染过程而增加，当α达到最大值不再改变时，IBDV增殖也达最大。此点可作为培养IBDV时的收毒点

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