摘要:距链霉菌发育分化控制启动子P_TH4直接控制的下游基因proX间隔24个碱基处存在一个部分开放阅读框(ORF)，根据序列分析推测为丝氨酸蛋白酶的一部分。以此部分DNA序列为探针，在构建的圈卷产色链霉菌7100的DNA文库中克隆到一个与链霉菌发育和分化有关的新基因，称之为sawD。序列测定及分析结果表明，在1320bp的DNA序列中有一个完整的开放阅读框(ORF)，翻译起始位点为210位碱基处的GTG，终止密码子TGA位于序列的999位碱基处。在距翻译起始位点GTG上游4个碱基间隔处有典型的核糖体结合位点区域GAGGGA。在计算机蛋白文库中进行了同源性比较研究，结果表明263个氨基酸的蛋白产物与Caulobacter crescentus的依赖于ATP的丝氨酸蛋白酶有447%的同源性，其中存在功能活性区的丝氨酸保守位点(GPSAG)。基因功能研究表明，sawD在圈卷产色链霉菌发育分化中与气生菌丝分隔和色素的合成有关。该基因被阻断或破坏后，使野生型圈卷产色链霉菌的分化停止在气生菌丝阶段，不能形成具有灰色色素的孢子，而出现白色气生菌丝的表型。

摘要:构建了高效植物表达载体pBinMoBc，其携带有超强表达复合启动子OM及Ω因子控制下的CryIA?基因，作为对照，本实验构建了含有CaMV35S启动子控制下的CryIA?基因的植物表达载体pBinoBc。分别使用两个植物表达载体转化烟草，ELISA检测表明，在pBinMoBc转基因烟草中CryIA?基因的平均表达水平是pBinoBc的2.44倍，最高可达可溶蛋白的0.255%。抗虫检测结果表明，pBinMoBc转基因烟草与pBinoBc转基因烟草相比，具有更强的抗棉铃虫效果。上述结果表明，OM启动子比CaMV 35S启动子更具有实际应用价值，此结果在植物抗虫基因工程研究中具有重要意义。

摘要:用限制酶BamHI将含人TTR基因的DNA片段(约493bp)从质粒 pSK-TTR上切下后并插入到分泌型载体pHIL-SI的BamHI位点上，经酶切鉴定重组质粒pHIL-SI-TTR上的TTR基因插入方向正确。将pHIL-SI-TTRDNA用BglII酶切后，转入真核表达系统——毕赤氏酵母。得到的转化子经摇瓶发酵，上清液用15%SDSPAGE检测，有TTRF的表达。经DEAESepheroseF.F离子交换柱和SephacrylS200分子筛层析，得到纯化的TTRF。体外实验表明TTRF对肝癌细胞有抑制作用。

摘要:采用聚合酶链式反应(PCR)技术对虹鳟生长激素cDNA进行改造。将改造后的基因克隆到含酵母PGK启动子的大肠杆菌酵母穿梭质粒pMA91，转化酿酒酵母Y33，构建表达鱼生长激素的酵母工程菌Y33(pMArGH16)，并在酵母中获得表达，表达量约占细胞可溶性蛋白总量的3%。表达产物作为饲料添加剂投喂罗非鱼，具有明显的促进生长作用。

摘要:采用基因重组技术构建了表达产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的耐热肠毒素(ST)基因和热敏肠毒素B亚基(LT-B)基因融合抗原的疫苗候选株。将ST基因的5’端与LT-B基因的3’端连接，并置于同一阅读框。编码ST的基因是通过PCR从pSLM004质粒中扩增得到的，含有ST的pro序列(其编码ST前体的pro区域)，并应用寡核苷酸定点突变技术将编码ST的第14位氨基酸残基发生突变，使ST的第14位氨基酸残基Ala突变为Leu。在所构建的结构中，于LT-B和proST之间分别插入了不同长度的氨基酸Linkers。表达的融合多肽同时具有ST和LT-B的抗原性，并保留结合GM-1神经节苷脂的能力，且无LT和ST的生物毒性。表达的融合蛋白免疫动物，能诱导产生相应的特异性抗体。

摘要:红花(Carthamus tinctorious)的子叶能诱导出愈伤组织，并且该愈伤组织能合成生育酚。正相高效液相色谱测定的结果表明，其主要成分是α生育酚。在MS培养基基础上添加01%酪蛋白，并将生长调节剂浓度调整为2，4D 030mg/L，6-BA 1.80mg/L，可使α-、β-、γ-生育酚含量分别达4.1706、0.3120、0.1650μg/g鲜重。其有效生育酚含量达4.4091μg/g鲜重，是对照组的57倍。

摘要:以Cytopore多孔微球固定产重组组织型纤溶酶原激活剂(rtPA)CHO工程细胞株4B3，在2L搅拌式生物反应器用无血清培养基DF5S连续灌流培养。4B3细胞的最大活细胞密度和rtPA生产水平分别达到8.83×10⁶/mL和12473 IU/mL。含rtPA的4B3细胞培养上清经MPG吸附层析和Lysine-sepharose 4B亲和层析两步纯化，rt-PA的纯度达到98%。

摘要:在测定了融合株SPSC自絮凝颗粒分布的基础上，研究了其培养过程细胞颗粒生长和连续发酵过程产物酒精生成的动力学规律，建立了如下的动力学模型： μ= 0.134S 19.23+S υ=0.747S 10.871+S［(1-SXp126 3SX 2.593］

摘要:利用反转录PCR方法，对甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)5个中国分离物的RNA5进行了检测，结果表明新疆分离物、黑龙江分离物和内蒙古乌拉特前旗分离物不含有RNA5，只有包头分离物和呼和浩特分离物有RNA5。序列分析结果，包头分离物和呼和浩特分离物RNA5基因组分别为1338nt和1358nt，均只包含1个开放阅读框架，编码产生26kD蛋白。与法国F72分离物和日本D5分离物相比，各分离物间核苷酸序列同源性为93.7%～98.5%，由此推导的氨基酸序列同源性为91.8%～98.2%。

摘要:以胎盘组织提取的mRNA为模板，RTPCR扩增人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)受体膜外区CRH的cDNA片段，克隆于供体质粒pF_ASTB_AC1，与杆状病毒表达载体Bacmid同源重组后，转染昆虫细胞SF9，获得重组杆状病毒并证明了CRH的高效表达。表达产物经G-CSF亲和层析进一步纯化，纯度可达90%以上。受体竞争性结合实验结果表明，该表达产物能特异性结合G-CSF，具有较高的亲和力(Kd=3.8nmol/L)。

摘要:在B.Braun ES-10型15L和NBS BioFlo 3000型5L发酵罐中，利用补料分批培养技术高密度表达培养含重组质粒pSBHL-11的大肠杆菌YK537，生产重组人白细胞介素-3(IL-3)，发现在发酵过程中，限制性流加甘油，控制溶解氧在30%～40％左右、30℃生长11h，42℃诱导培养4h，能将发酵液中最终菌体密度从OD₁₆600提高到OD₅₃600(相当于每升发酵液含106克湿菌体)，并且保持了白细胞介素-3的表达量，占菌体总蛋白的30%左右，含量超过3.3%g/L，使IL-3包涵体产量从湿重2.2g/L提高到8.5 g/L，纯化步骤比较简单，超声破菌后经两次洗涤纯度就达到70%以上。

摘要:将人p53基因装入Pichia分泌型质粒Phil-S1中，酶切线性化后电穿孔导入酵母细胞进行整合，经筛选得到一高表达p53蛋白的克隆。SDS-PAGE显示表达量约占分泌总量的30%。ELISA验证重组人p53存在免疫学活性。在诱导时就降低Pichia酵母系统水解酶活力等方面进行优化，经FPLC分离纯化得到约200mg/L表达量。

摘要:带有1～2mm子叶柄的芥菜型油菜子叶经农杆菌感染后，培养在附加10～20mg/L卡那霉素的MS选择培养基上筛选转化愈伤组织及不定芽。卡那霉素抗性苗相继在含30～50mg/L卡那霉素的选择培养基上继代培养，再转移到含20mg/L卡那霉素的生根培养基上诱导生根。以苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因为探针，进行Southern blot分子杂交，得到阳性结果。PCR分析也证明外源基因整合到油菜基因组并稳定传递到后代。转基因植株的抗虫性和卡那霉素抗性在自交后代中得到保持，筛选得到纯合的转基因植株后代株系。

摘要:化学合成法合成以植物偏爱密码子编码的新抗菌肽ABP3基因片段，合成片段拼接后，与pUC19重组，经限制酶片段分析与核苷酸序列分析，获得抗菌肽ABP3基因。ABP3基因与表达载体pPIC9重组，构建受乙醇氧化酶1基因(AOX1)的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒，转化GS115宿主菌，经表型筛选，阳性克隆用甲醇诱导表达，重组ABP3以分泌型表达，具抗菌活性，且符合ABP3的抗菌特性。

摘要:通过农杆菌介导法用含有抗潮霉素和GUS基因的双元载体将杀虫结晶蛋白基因cryIA(b)和cryIA(c)导入到籼、粳稻幼穗愈伤组织中，然后经过在含有不同浓度潮霉素的培养基上进行数次筛选，获得一批Bt转基因株。经PCR、Southern杂交及Western印迹分析证实此二基因已整合进水稻中，饲虫试验结果表明，转基因株具有100%杀虫率。

摘要:用PCR方法从产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)中克隆出09kb的DNA片段，经DNA测序证明是α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase,α-ALDC)基因。将α-ALDC基因重组到质粒pBV220后，转化大肠杆菌，经筛选获得高效表达的重组子菌株。重组α-ALDC基因表达量占菌体总蛋白量的27%。酶活检测表明重组子细胞表达的α-ALDC活性是产气肠杆菌的12000倍。另外，粗提的重组α-ALDC的最适pH为6.5～7.0，pH稳定范围为5.5～8.0，适合的温度为35～45℃。Ba²⁺、Cd²⁺、Fe²⁺、Co²⁺、Mn²⁺、Sn²⁺可提高重组α-ALDC的活性。氨基酸修饰剂可降低其活性。

摘要:蛹虫草菌(Cordyceps militaris)胞外多糖(EPS)的发酵过程和发酵动力学进行了研究。基于Logitic方程和Luedeking-Piret方程，得到了描述发酵过程的动力学数学模型和模型参数，同时对实验数据与模型进行了验证比较。模型计算与实验结果拟合良好，模型正确地反应了蛹虫草菌胞外多糖的发酵过程及其动力学机制。

摘要:用摇瓶试验对金针菇菌丝体在淀粉废水中培养的营养条件进行了研究。结果表明，利用淀粉废水进行金针菇液体发酵的最适营养条件为：经液化处理的淀粉废水，加KH₂PO₄0.25 g/100 mL，MgSO₄·7H₂O0.05g/100mL，V_B1150μg/L,V_B250μg/L，pH5.40。测定了该营养条件下菌体的生长曲线及发酵过程中培养基残糖的变化。发酵周期为7d，发酵终点生物量达2.08 g/100 mL，COD去除率为70.8%。

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