摘要:以东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch，BmK) BmαTX14全长cDNA序列设计引物，克隆BmαTX14成熟肽，插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中，转化酵母，诱导表达。TricineSDS PAGE和Western blot分析显示，表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中，诱导84h时的表达量达到高峰，约为120mg/L。通过Ni金属螯合层析柱亲和层析、聚乙二醇沉淀、凝胶分子筛层析获得纯化的rBmαTX14融合蛋白，经毒性实验表明，具有明显的抗昆虫活性。同时以蝎基因组总DNA为模板进行PCR扩增，得到BmαTX14基因克隆，序列分析显示： BmαTX14在编码信号肽的基因序列中有1个长408bp的内含子，其基因组织结构具有α型Na⁺通道毒素的特征。从功能活性和基因组织结构两个角度证实BmαTX14为α型Na⁺通道毒素。

摘要:猪伪狂犬病毒（PRV）是一种良好的兽用活病毒疫苗载体。但以PRV基因缺失疫苗株TK^-/gE^-/LacZ⁺为载体表达PRRSV GP5的重组病毒TK^-/gE^-/GP5⁺免疫实验动物后难以激发抗PRRSV的中和抗体。为了进一步增强这种重组病毒的免疫效力，用具有更好免疫原性的修饰的ORF5基因（ORF5m）代替天然ORF5基因，构建了表达PRRSV的修饰型GP5m蛋白的重组伪狂犬病毒TK^-/gE^-/GP5m⁺。经PCR、Southern blot、Western blot 证实构建正确,并能表达具有活性的GP5m蛋白。将TK^-/gE^-/GP5m⁺与TK^-/gE^-/GP5⁺分别免疫Balb/c小鼠，结果TK^-/gE^-/GP5m⁺免疫小鼠不仅产生了较高水平的抗PRRSV的中和抗体(3/6只达到了1∶16)，而且在诱导PRRSV特异性细胞免疫方面也显著优于TK^-/gE^-/GP5⁺，表明TK^-/gE^-/GP5m⁺是一种极有希望的PRRSV和PRV二价基因工程候选疫苗。

摘要:构建了猪瘟病毒(CSFV)主要保护性抗原E2基因的真核表达质粒pVAXE2。将其电转化猪霍乱沙门氏菌C500疫苗株，得到了携带pVAXE2质粒的猪霍乱沙门氏菌工程菌株S.C500/pVAXE2，对该菌株的特征、培养特性和生化特性进行了鉴定。分别用1×10⁸CFU、2×10⁹CFU S.C500/pVAXE2经口服或肌肉注射免疫小鼠和家兔，间接ELISA检测免疫动物的特异性抗体，在第三次免疫后2周用20ID50猪瘟兔化弱毒和致死量猪霍乱沙门氏菌强毒株对免疫兔进行攻击。结果表明，S.C500/pVAXE2保持了猪霍乱沙门氏菌原有形态特征、培养特性和生化特性，免疫鼠和兔都产生了抗CSFV和猪霍乱沙门菌的ELISA抗体，免疫家兔能抵抗猪瘟兔化弱毒株和猪霍乱沙门氏菌强毒株的攻击。显示了以S.C500为DNA运输载体构建二联或多联猪用疫苗的可行性。

摘要:Δ⁶-脂肪酸脱氢酶是一种膜整合蛋白，也是多不饱和脂肪酸合成途径中的限速酶。在前期工作中，通过RT-PCR和RACE技术，从少根根霉NK300037中克隆到一个潜在编码Δ⁶-脂肪酸脱氢酶的序列，序列和功能分析结果表明该序列具有一个长度为1377bp、编码由458个氨基酸组成、大小为52kD的新的Δ⁶-脂肪酸脱氢酶基因。把少根根霉Δ⁶-脂肪酸脱氢酶基因(RAD6)亚克隆到表达载体pPIC3.5K，构建重组表达载体pPICRAD6，并转化到毕赤酵母菌株GS115进行表达。提取酵母细胞总脂肪酸和进行甲酯化，经气相色谱和气相色谱质谱连用分析表明，目的基因的编码产物能将C16∶1、C17∶1、C18∶1、亚油酸和α-亚麻酸在Δ⁶和7位间特异性脱氢而引入一个新的双键，生成更高不饱和的脂肪酸，该催化反应没有链长特异性，只有键位特异性。此外，按Kozak序列特点，改变目的基因转译起始密码子周边序列结构，并把改变后序列导入毕赤酵母GS115中进行功能表达分析，结果表明在毕赤酵母中这种改变同样能提高目的基因的表达水平。综合所有分析结果表明，巴斯德毕赤酵母更适合用来综合分析Δ⁶-脂肪酸脱氢酶基因的功能。

摘要:采用PCR方法从里氏木霉(Trichoderma reesei)基因组中获得含有两个内含子的内切-β-甘露聚糖酶全长基因，末端重叠延伸PCR去除内含子后，将其插入到巴斯德毕赤酵母(Picher pastoris)表达载体pPIC9K中，位于α-因子信号肽序列的下游，并与之同框，获得重组质粒pM242。重组质粒线性化后用电击法转化毕赤酵母菌株GS115。经大量筛选，获得高效分泌表达内切甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌株Gpmf25。摇瓶发酵结果表明，培养基中甘露聚糖酶的活力可达12.5IU/mL。重组酶最适pH和最适反应温度分别为5.0和80℃，在pH5.0～6.0时酶活稳定，在pH5.4时70℃保温30min酶活维持50％以上。

摘要:构建遗传稳定的多功能农药降解基因工程菌可以为农药污染的生物修复提供良好的菌种资源，然而，构建遗传稳定且不带入外源抗性的基因工程菌是一个难点。通过以受体菌的16S rDNA为同源重组指导序列、sacB基因为双交换正筛选标记构建同源重组载体，二亲结合的方法将甲基对硫磷水解酶基因（mpd）整合到呋喃丹降解菌Sphingomonas sp.CDS1染色体的16S rDNA位点，分别成功构建了含1个和2个mpd基因插入到rDNA位点且不带入外源抗性的基因工程菌株CDSmpd和CDS-2mpd。同源重组单交换的效率为3.7×10^－7～6.8×10^－7。通过PCR和Southern杂交的方法验证了同源重组事件。基因工程菌遗传稳定，能同时降解甲基对硫磷和呋喃丹。甲基对硫磷水解酶（MPH）的比活在各生长时期均高于原始出发菌株，比活最高达6.22 mu/μg。

摘要:嗜热毛壳菌Chaetomium thermophilum CT2是一种土壤腐生菌，可产生具有重要工业生产价值的纤维素酶类。RACE-PCR获得嗜热毛壳菌纤维二糖水解酶Ⅱ（CBHⅡ）的编码基因(cbh2)。DNA序列分析表明cbh2的开放阅读框由1428个碱基组成，编码476个氨基酸。推断的氨基酸序列包含一个典型真菌纤维素酶的糖结合域（CBD）、催化域（CD）以及二者之间富含脯氨酸和羟基氨基酸的连接桥。根据氨基酸序列推算该酶分子量为53kD，属于糖苷水解酶第六家族，具有该家族催化保守区的典型特征。PCR扩增cbh2的成熟蛋白编码基因，利用基因重组的方法构建可在毕赤酵母分泌表达系统中表达纤维二糖水解酶蛋白的重组表达载体，并转化毕赤酵母得到重组子。在毕赤酵母醇氧化酶AOX1基因启动子的作用下，重组蛋白得到高效表达，小规模发酵量达1.2 mg/mL。经硫酸铵沉淀、DEAESepharose Fast flow阴离子层析等步骤纯化了该重组表达蛋白。SDS-PAGE得到重组蛋白分子量为67kD，与从嗜热毛壳菌中纯化的该酶分子量一致。该重组纤维二糖水解酶作用的最适合温度50℃，最适pH4.0，在70℃的半衰期为30min，具有较好的热稳定性。

摘要:构建鼠源性松材线虫纤维素酶（Bursaphelenchus xylophilus cellulase, BXC）的噬菌体单链抗体库，从中筛选特异性BXC的单链抗体。以BXC为抗原免疫BALB/C小鼠，从脾脏提取总RNA，用RT-PCR技术扩增小鼠抗体重链（V_H）和轻链(V_L)可变区基因。经重叠PCR(SOE-PCR)在体外将V_H和V_L连接成单链抗体(scFv)基因，并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中，电转化至大肠杆菌TG1，经辅助噬菌体超感染，成功构建了库容为5×10⁴的Anti-BXC单链抗体库，并从该抗体库中初步筛选到了特异性识别BXC的噬菌体单链抗体scFv。将表面展示单链抗体的单克隆噬菌体转化大肠杆菌HB2151进行可溶性表达，SDS-PAGE及Western blot分析结果显示，可溶性scFv获得表达，且与BXC具有结合活性，为松材线虫的检验检疫以及病理学研究奠定了基础。

摘要:DREB类转录因子特异地与DRE元件结合，在植物感受非生物逆境(干旱、高盐和低温)胁迫时，激活一系列逆境应答基因的表达。我们选用银新杨(Populus alba×P. alba var. pyramidalis)为材料，通过PCR和同源EST搜索的方法克隆得到了一个类DREB的基因，命名为PaDREB2。酵母单杂交实验表明，该基因编码的蛋白能特异地与DRE元件结合并激活下游报告基因的表达。用RT-PCR的方法研究了PaDREB2的表达模式，结果表明PaDREB2受低温、干旱和高盐的胁迫诱导。

摘要:从脑膜炎脓杆菌（Flavobacterium meningosepticum）基因组中通过PCR扩增了N-糖酰胺酶F（PNGase F）基因,经酶切后与表达载体pET28a连接，获得的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)。重组大肠杆菌经诱导表达和纯化提取后,获取大量高纯度N-糖酰胺酶F，其纯度达90%以上。试验证明，经纯化的重组N-糖酰胺酶F可以切除核糖核酸酶B、转铁蛋白和人IgG等糖蛋白上的N-糖链，具有脱糖基化作用。

摘要:大车前不仅有很高的药用价值，在生态学研究方面也是重要模式植物。关于大车前的组培，目前报道很少。我们通过不定芽直接再生和愈伤组织诱导两种途径，建立了大车前（Plantago major L. ‘Giant Turkish.’）的快速高效组培再生系统。完整的成熟种子培养在添加IAA和TDZ的MS培养基中，不经过愈伤的分化阶段，从子叶节的部位产生不定芽，直接不定芽的诱导频率达到100%。在0.2mg/L IAA和1.0mg/L TDZ作用下，培养4～5周后平均每个外植体产生再生芽的数目达到14.6个。对同一个外植体诱导得到的9株再生植株进行的RAPD检测表明，部分植株在DNA水平上发生了变异。以叶片作为外植体，在添加1.0mg/L NAA的MS固体培养基中培养3周后，伤口处形成愈伤组织，产生愈伤的频率平均为98%。愈伤组织在添加4.0mg/L 6BA的MS固体培养基中分化得到再生芽，分化频率为25%，平均每块愈伤产生再生芽2.8个。两种途径得到的再生芽转到1/2 MS培养基上均可生根、长成完整植株，小苗移栽到温室90%能够存活。

摘要:以K562细胞为模型，分别进行微囊化和游离培养，运用流式细胞术考察两种培养体系下细胞周期和生长代谢变化；建立数学模型，模拟了两种培养体系下细胞的生长活性和代谢特性。实验发现：微囊化培养过程中的K562细胞处于DNA合成期（S期）的百分含量显著高于游离培养，并且细胞保持较高的增殖活性。模型计算表明，所建模型动力学参数能够很好地描述微囊化和游离两种培养体系下细胞的代谢情况；对细胞活性的理论计算表明，微囊化的细胞具有较高的增殖和代谢活性，同时细胞能够较长时间保持此活性；模型参数表明，两种培养体系下，葡萄糖对细胞生长的影响无显著差别 (k^Free_L≈k^APA_L)，乳酸对游离培养细胞的生长具有明显抑制作用，但对微囊化培养细胞抑制作用较小(kFreeL>≈kAPAL)。

摘要:通过DEAE-Sepharose离子交换分段层析，DEAE-Sepharose离子交换梯度层析和Sephadex G100凝胶过滤层析三种方法的联用从中华白玉蜗牛消化酶中分离出一种人参皂苷Rb1水解酶。分离后该酶在SDS-PAGE上呈单一蛋白质条带。应用SDS-PAGE和凝胶过滤层析对分子量的测定，提示该酶是由4个分子量为110～115 kD的相同亚基组成的同源四聚体。Rb1为底物的动力学参数K_m和V_max分别为0.790 mmol/L和10.192 μmol/min/mg。该酶对人参皂苷Rb₁糖键进行有选择的水解，可水解人参皂苷Rb₁C₂₀位的一个糖苷键生成人参皂苷Rd。

摘要:Wistar大鼠随机分为正常组和模型组，采用改进的线栓法制备模型，在规定的时间点快速断头取脑，分离脑皮质组织，提取蛋白质后双向电泳展示，以ImageMaster 2D Elite v301软件对2_DE图谱进行差异表达分析，目标蛋白点用基质辅助激光解析电离质谱测定肽质量指纹图进行鉴定。线粒体应激70蛋白前体、血小板活化因子乙酰基水解酶Ibβ亚单位、ADP核糖基化因子蛋白3、电压依赖性阴离子选择通道蛋白1、泛素C末端水解酶同工酶L1、突触结合蛋白等11个蛋白在模型6h组表达上调，谷胱甘肽S-转移酶omega 1、 谷胱甘肽S-转移酶P、Cu-Zn超氧化物歧化酶、 ATP合酶D链、G蛋白β亚单位1、微管蛋白β链15、苹果酸脱氢酶等15个蛋白在模型6h组表达上调。胆绿素还原酶B、细胞因子A4前体为模型组新出现点，腺苷酸激酶同工酶1在模型组消失，Thiore doxin peroxidase 1在模型组分为2个点。以双向电泳技术得到分辨率较好的电泳图谱，并初步鉴定脑缺血后差异表达蛋白，为深入研究缺血性脑损伤病理机制奠定了基础。

摘要:用来源于啤酒酵母的γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶基因（GSH1）和铜抗性基因（CUP1）取代质粒pLZ-2中α-乙酰乳酸合成酶基因（ILV2）内部约2.3kb的DNA片段，构建成重组质粒pICG。限制酶酶切质粒pICG后获得在基因GSH1和CUP1两端含有ILV2序列的6.0kb的DNA片段。用此片段转化啤酒酵母YSF31，得到铜抗性高的转化子。并通过PCR和α-乙酰乳酸合成酶（AHAS）活性测定筛选到酵母工程菌。小试实验结果表明酵母工程菌谷胱甘肽含量比受体高34％，而双乙酰含量是受体的75％。其他发酵指标并没有发生改变。中试实验表明酵母工程菌发酵周期缩短3d，而且成品啤酒的保鲜时间延长50％。由于DNA操作过程中没有外源基因介入，因此啤酒酵母工程菌为生物安全的自克隆菌株，具有重要的实际应用价值。

摘要:对由中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达的多聚亚基蛋白HBsAg在离子交换层析过程中容易因亚基解离而导致蛋白解聚和丧失生物活性的难题，实验中选择聚乙二醇（PEG）作为保护剂伴随式（Polyethylene Glycol-Accompanied）离子交换层析分离纯化HBsAg。实验表明，在流动相中加入1% PEG10000(W/V)作为纯化伴侣， HBsAg的回收率由55% 左右提高到80%以上，纯化倍数基本保持在12左右。对纯化产物进行SDS_PAGE分析表明，1% PEG10000的纯化伴侣伴随式离子交换层析能全部保留HBsAg的糖基化蛋白单体（27kD和30kD），高效液相色谱联用多角度激光散射(High Performance Size Exclusion Chromatography_Multiangle Laser Light Scattering, HPSEC-MALLS )进一步分析阐明了PEG能促使HBsAg颗粒尺寸分布更均一，结构更接近天然乙肝表面抗原。

摘要:从三唑磷生产厂周围的土壤中用土壤富集的方法筛选分离出一株三唑磷降解菌Klebsiella sp.，它能以三唑磷为唯一碳源、唯一氮源、唯一磷源生长同时实现对三唑磷的降解，三唑磷作为唯一氮源时的降解速度最快，是实现三唑磷降解的最佳营养方案。在三唑磷为唯一氮源时，1000 mg/L的三唑磷浓度对菌体降解无抑制作用。此降解菌首先通过水解作用实现对TAP 的降解，之后把水解产物进一步降解为无毒的无机物质。降解菌的这些降解特性表明了它用于生物降解消除三唑磷污染的巨大潜力。

摘要:采用主成分分析、偏最小二乘回归和BP神经网络三种方法对嗜热和常温蛋白进行模式识别。结果表明，三种方法对训练集拟合的平均正确率分别为92％、95％和98％，对测试集进行预测的平均正确率分别为60％、72.5％和72.5％，对嗜热蛋白预测正确率最高为75％，常温蛋白最高为85％。构建了数学模型并对其生物学意义进行了解释，建立了一种基于序列的识别嗜热和常温蛋白的新方法。

摘要:制备单修饰的PEG蛋白偶联物，对获得重复性好的修饰产品，减少后续分离步骤具有重要的意义。用N-羟基琥珀酰亚胺活化法对单甲氧基聚乙二醇 (mPEG，分子量20000) 进行活化，红外光谱分析, 并考察了其水解动力学性质。对重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行化学修饰，通过正交试验结合SDS-PAGE电泳检测建立了单条PEG链修饰rhG-CSF的条件，单修饰PEG-rhG-CSF的收率为90%。离子交换层析对修饰产物进行分离纯化，高效凝胶过滤色谱(SEC-HPLC)检测纯度达到97%。

摘要:从烟草基因组中克隆到两条新的MAR片段（M14和M17），序列分析表明，它们具有90%AT-box,A-box,T-box，碱基非配对区域，拓扑异构酶Ⅱ识别位点，弯曲DNA序列，复制起始序列和ATATTT等典型的MAR序列特征,并与原有MAR序列的特征不同。将它们分别构建到植物表达载体pCAMBIA2301 GUS基因（uidA）表达盒一侧及两侧，通过农杆菌介导转化烟草。组织化学染色法定性检测GUS活性表明，带有M14和M17的uidA基因在转基因烟草中稳定表达。GUS活性的定量检测表明，表达载体上uidA基因一端或两端连接有MAR的转化烟草中,GUS的表达水平与对照相比都有了明显提高，而uidA基因两侧连有MAR的载体提高表达水平的效果优于一端连有MAR的载体，可使GUS活性增强3.14倍,但不同转化个体之间表达水平的差异仍然明显。上述结果表明，所得DNA序列为两条新的MAR片段，并且具有提高转基因表达水平的功能。

摘要:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统将圆环病毒2型的ORF2全基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac^TM1中，获得重组转移载体pFast-OFR2，再将其转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中，发生转座作用，经蓝白菌落筛选得到含ORF2基因的重组穿梭载体Bac-ORF2，以脂质体介导的方法将重组穿梭载体转染sf9细胞，获得重组病毒，命名为Ac-ORF2。间接免疫荧光分析表明，PCV2阳性血清能使Ac-ORF2感染的sf9昆虫细胞呈强的荧光着色; SDS-PAGE与Western-blotting分析可见大小约为28kD的特异性带，表明Ac.ORF2在sf9细胞中成功表达了PCV2-ORF2蛋白。将该表达蛋白纯化并经磷钨酸负染后，通过电镜观察可见形态与PCV2病毒粒子相似的病毒样颗粒(VLPs)，其中某些颗粒由于中心浓染而似空衣壳，其直径也为17nm左右。

摘要:应用包含9024条鸡cDNA的表达谱芯片，对从两品种鸡脂肪组织抽提及纯化的mRNA进行芯片杂交，并对基因表达谱进行分析，旨在筛选高脂肉鸡和白耳蛋鸡脂肪组织差异表达的基因，探讨造成两品种体脂性状差异的分子生物学机理。结果按差异显著阳性标准分析，共筛选出差异表达基因67条，主要涉及脂类代谢、能量代谢、细胞骨架构成、转录和剪接因子以及蛋白质合成与分解等相关基因，此外，还筛选出一些尚未在GenBank上登陆的序列，推测可能是未知的新基因，它们在鸡脂类代谢的过程所起到的作用还需进一步实验证明。

摘要:将来源于黑曲霉N25的植酸酶基因phyA^m重组于大肠杆菌表达载体pET30b(+)，以重组表达载体pET30b-F-phyA^m为模板经PCR扩增获得结构延伸突变植酸酶基因phyA^e（在植酸酶基因C端增加了来源于pET-30b-F-phyA^m载体上13氨基酸残基）。含突变基因的重组表达载体pPIC9k-phyA^e在GS115酵母中表达。纯化的突变酶PP-NP-e与野生型酶PP-NP-m8相比：PP-NPAe的最适反应温度上升了3℃，75℃处理10min，热稳定性提高21%，比活力略有提高。最适反应pH为5.6,有效pH范围pH4.6到pH6.6。比未突变酶扩大了0.4单位。

摘要:研究了不同的脂肪酶在有机溶剂体系中催化合成L-维生素C棕榈酸酯的反应。针对维生素C在有机溶剂中溶解度较低这一问题，对催化合成维生素C棕榈酸酯反应的脂肪酶和反应介质进行比较，同时对影响合成维生素C棕榈酸酯反应的因素（温度、底物浓度、底物摩尔比、反应时间和酶量等）进行探讨，优化了反应条件：在10mL的丙酮中，1.094g棕榈酸与0.107g维生素C在酶量为20％（W/W, 固定化酶/维生素C）的固定化脂肪酶催化下，初始含0.4nm分子筛20%，温度为60℃，转速为200r/min，反应48h转化率可以达到80%，产物维生素C棕榈酸酯的浓度可达20g/L。

摘要:将重组人铜锌超氧化物歧化酶（rhCu,ZnSOD）包含体（经纯化后纯度达80％以上）以稀释法或透析法初步复性后，分别再经金属螯合亲和层析（MCAC）纯化。结果透析复性样品和稀释复性样品经MCAC纯化后的rhSOD比活是各自上柱前样品比活的2.2倍和5.3倍，蛋白回收率分别为64％和25％，同时两者活性回收率皆大于130％。表明目标蛋白rhSOD在经过MCAC纯化的同时又获得进一步复性。SDS-PAGE显示rhSOD为19kD的单一条带，纯度大于95％，比活达到5000 u/mg左右，同时NBT生物活性染色鉴定显示出很强的超氧化物歧化酶活性。表明MCAC对于复性不完全的rhCu,ZnSOD而言是一种纯化和使其进一步复性的简便省时且有效的方法。该方法为以包含体形式表达的基因重组蛋白的纯化和复性提供了新思路。

摘要:甲基对硫磷水解酶（MPH）是一种新的有机磷水解酶。将完整的甲基对硫磷水解酶基因（mpd）构建入pUC19载体，使得mpd基因以自身的启动子在Escherichia coli DH5α中表达并得到了纯化。金属螯合实验发现MPH的活性不受金属螯合剂1, 10菲NFDA1啉的影响；但用电感耦合等离子发射光谱测定其金属含量显示MPH是金属酶，1mol酶中结合了2mol的Zn²⁺。为确定参与MPH催化活性的必需氨基酸，用化学修饰剂碳化二亚胺、二乙基焦磷酸酯、磷酸吡哆醛和丁二酮处理MPH，然后检测其残余酶活力，结果表明天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸和精氨酸残基与酶的催化活性无关；而二乙基焦磷酸酯对组氨酸侧链的化学修饰引起酶活性的大幅度的下降，其对酶活性的抑制率达到9.6h^-1，说明组氨酸是酶活力所必需的基团。这些结果为进一步研究酶的结构及对酶进行分子改造提供了必要的基础数据。

摘要:研究了蔗糖浓度和光对固体培养的三裂叶野葛毛状根生长及其总异黄酮和葛根素产生的影响。结果表明：在供试的分别添加1%、3%、5%、7%和9%蔗糖的MS固体培养基中，3%蔗糖能促进三裂叶野葛毛状根的生长及其异黄酮类化合物和葛根素的积累；培养20d后，其生物量达到0.48g(DW，干重)/瓶，总异黄酮和葛根素含量分别为25.44mg/g(DW)和11.64mg/g(DW)。与添加3%蔗糖的MS培养基培养的三裂叶野葛毛状根相比，含5%蔗糖的培养基培养的毛状根干重增殖倍数提高了7.0％，而含1％、7％和9％蔗糖的培养基培养的毛状根干重增殖倍数分别下降62.4％、42.8％和65.3％；其总异黄酮含量分别降低574％、13％和33.4％，葛根素含量分别下降47.9％、15.8％和35.1％，但其毛状根培养物的可溶性糖含量则分别增加了0.52、1.45和1.54倍。暗培养30d的毛状根的生物量达到0.83g(DW)/瓶，分别比蓝光和白光培养的毛状根提高37.1%和23.3%。在蓝光和白光下培养的部分毛状根的表面呈淡绿色；但白光处理的毛状根中总异黄酮含量比蓝光和暗培养处理的分别提高了14.7%和19.2%；蓝光抑制毛状根中葛根素含量的积累，白光和暗培养的毛状根培养物中的葛根素含量分别是蓝光处理的1.61倍和1.52倍。

摘要:利用FTA滤膜,采用PCR技术可直接检测肉及肉制品中的金黄色葡萄球菌，无需增菌，灵敏度高。在采用浮选与溶剂萃取相结合方法的基础上，使用FTA膜可高效地从鲜肉中提取金黄色葡萄球菌的DNA,消除PCR反应的抑制因子。以金黄色葡萄球菌耐热核酸酶基因（nuc）为靶基因，经过PCR扩增得到279bp的产物。经过DNA测序证实该产物为目的扩增产物。使用FTA滤膜处理样品，再通过PCR方法检测金黄色葡萄球菌，猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉匀浆液的检出限均为10cfu/mL，可在6h内完成对肉中金黄色葡萄球菌的检测，比目前普遍采用的先增菌再进行PCR检测的方法缩短了12～24h 。实际检测了72份样品，同时与GB 4789.10-94方法及两种快速检测致病性金黄色葡萄球菌检测方法做比较，PCR方法的检出率为72.2％，检出时间为6h,GB 4789.10-94方法检出率为70.8%,检出时间为5d,Prfilm RSA方法的检出率为61.1％, 检出时间为18h,BairdParker R.P.F方法的检出率为69.4％，检出时间为18h,结果表明FTA滤膜用于PCR检测肉中金黄色葡萄球菌检出率高，耗时短。使用FTA滤膜法制备模板DNA,为食品中的致病菌快速检测构建了一个技术平台。