摘要:近年来，氟代糖应用于糖苷酶反应研究，显示出越来越重要的作用。氟代糖可以作为糖苷酶及其突变酶的水解底物研究酶学性质；氟代糖抑制剂可以标记糖苷酶催化中心，鉴定亲核体氨基酸。尤为重要的是，氟代糖可作为糖苷酶的糖基供体来合成糖类。糖苷酶突变后，可生成糖苷合成酶和硫代糖苷合成酶，可以用与正常底物构型相反的氟代糖作为糖基供体高效合成糖类，收率一般为60%～90%，有的可达100％。糖苷酶及其突变酶以氟代糖为底物高效合成糖类的研究，必将促进生物学、糖生物学和纳米生物材料的发展。

摘要:Hepcidin是一种由肝脏合成的富含半胱氨酸的小分子肽。近几年的研究证实hepcidin对于调节机体铁离子的代谢平衡发挥着重要的作用，其可抑制肠道铁吸收和单核巨噬细胞系统铁释放。此外，除了机体铁状况，感染、炎症、贫血和缺氧等原因也会改变hepcidin的表达水平。通过对hepcidin的分子生物学特点、表达调控及生物活性、医学及药用价值等方面研究进展的概述，对采用基因工程的方法生产hepcidin进行了评述及展望。

摘要:猪霍乱沙门氏菌C500株是用化学方法致弱、用于预防仔猪副伤寒的弱毒疫苗株，虽具有较好的免疫原性，但仍有一定的残余毒力。为了研制更加安全并保持C500株良好免疫原性的弱毒株，及将C500开发为适于粘膜免疫的疫苗活载体，本文构建了猪霍乱沙门氏菌C500株△crp△asd双缺失株平衡致死载体系统。首先构建含缺失320bp的crp（cAMP受体蛋白）基因与蔗糖敏感基因（sacB）的重组自杀性质粒，与C500接合转移，两步法筛选无抗性的△crp缺失株，用PCR证实基因组crp基因的缺失突变。用同样方法在crp缺失株基础上构建asd（天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶）基因缺失株。该缺失株生长必需外源DAP（二氨基庚二酸）。进一步鉴定△crp缺失株的表型、生长特性、毒力等，结果表明△crp△asd缺失株构建成功。△crp△asd缺失株可以用来作为宿主载体平衡致死系统来高效表达外源基因，为深入研究以C500株为载体的口服多价疫苗奠定了基础。

摘要:构建并表达人朊蛋白N-糖基化修饰位点突变的真核表达载体，有助于进一步研究朊蛋白N-糖基化修饰的生物学功能。定点突变野生型人朊蛋白基因PRNP，将获得的突变体亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1中，并在人宫颈癌细胞株HeLa中瞬时表达各种朊蛋白糖基化修饰位点突变体，利用免疫印迹和糖苷酶消化等糖蛋白分析方法鉴定表达产物的糖基化形式。经Western blot 鉴定，野生型和突变型朊蛋白表达产物出现不同形式的泳动特征，分别出现特异性糖基化修饰的多个条带，单糖基化修饰的两条条带和无糖基化修饰的一条条带。经PNGase F糖苷酶消化，野生型和糖基化单点突变型表达产物均能被糖苷酶消化，其分子量下移，去糖基化突变型表达产物的分子条带位置不变。通过突变野生型人朊蛋白基因PRNP的N糖基化修饰位点，获得单糖基化修饰和去N-糖基化修饰的6种人朊蛋白突变体，并能够在HeLa细胞株中瞬时表达单糖基化修饰和去N糖基化修饰朊蛋白，为进一步研究朊蛋白的相关功能建立良好基础。

摘要:可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)可以拮抗肿瘤坏死因子的活性，因此已被用来治疗与TNF相关的炎性疾病。 本研究将sTNFR与IgGFc片段的融合蛋白基因克隆到真核表达载体pStar上，转染到人的内皮细胞中，获得了表达。表达的sTNFRIgGFc能够拮抗TNFα对L929细胞的细胞毒活性。将该质粒DNA 与脂质体混合，经尾静脉注射到Ⅱ型胶原诱导的关节炎小鼠体内后，应用RT-PCR在鼠的肝脏检测到了sTNFR-IgGFc的表达，并显著地改善了治疗组小鼠关节炎症状和病理反应。这表明抗TNF基因治疗有可能作为治疗类风湿性关节炎的新的途径。

摘要:在构建并成功表达抗CD3/抗CD20双特异性单链抗体(bscCD3×CD20)的基础上，对其在体外介导T淋巴细胞杀伤Ramous B淋巴瘤细胞的生物活性进行了分析。Annexin V/PI (AV/PI)染色和形态学观察及扫描电镜分析表明bscCD3×CD20介导的B淋巴瘤细胞体外裂解作用是通过先诱导靶细胞凋亡而继发坏死、裂解的方式实现的。非放射性细胞毒性分析表明bscCD3×CD20介导的T淋巴细胞杀伤活性随抗体浓度、反应时间和效靶比的升高而增加。在抗体浓度为5μg/mL、作用时间为24h、效靶比为10∶1时，杀伤活性最高可达87.3%。采用美国SuperArray人细胞凋亡芯片检测细胞杀伤起始阶段细胞凋亡相关基因的表达水平变化，许多凋亡相关基因的表达均发生了不同程度的上调或下调，其中ATM基因表达升高了187倍，p53基因升高了15倍，提示ATM-p53途径可能是bscCD3×CD20介导T细胞诱导B淋巴瘤细胞凋亡的主要途径。

摘要:将增强型绿色荧光蛋白基因（eGFP）与鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的VP2基因融合，插入马立克氏病毒（MDV）CVI988/Rispens的非必需区US10片段中，成功构建表达VP2融合蛋白的MDV CVI988转移载体pUC18-US10-VP2。将转移载体质粒与CVI988/Rispens疫苗毒共转染鸡胚成纤维细胞（CEF），筛选获得表达VP2融合蛋白的重组MDV（rMDV）。聚合酶链式反应（PCR）和间接免疫荧光实验（IFA）证明，rMDV传至第31代仍能稳定表达VP2融合蛋白。用rMDV免疫SPF鸡，进行IBDV攻毒保护试验，1日龄SPF鸡分别用1000PFU、2000PFU、5000PFU的rMDV进行免疫，33日龄用100LD50的IBDV JS超强毒进行攻毒，鸡的免疫保护率分别为50%、60%、80%。值得注意的是，5000PFU的rMDV一次免疫1日龄SPF鸡，其法氏囊组织病理损伤等级与IBD中等毒力活疫苗常规二次免疫相当（2.0/1.5），其保护效果无显著差异（p＞0.05），而与非重组病毒免疫组相比较，保护效果差异显著（P＜0.01），这表明构建的表达IBDV VP2融合蛋白的rMDV可以有效地为SPF鸡提供免疫保护作用。

摘要:以QBI-293A细胞基因组DNA为模板，PCR扩增E1A基因，酶切连接到pAdTrack-CMV转移质粒上，pAdTrack-CMV-E1A经PmeI线性化后，与pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183，筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-E1A，经PacI线性化，脂质体转染QBI-293A细胞，获得裂解型腺病毒AdE1A。裂解型腺病毒Ad-E1A在ECV304细胞内复制裂解，抑制细胞的生长，并可以降低VEGF的表达，探讨了Ad-E1A可能通过抑制ECV304细胞NF-κB的激活而引起细胞生长抑制的机制,说明Ad-E1A具有抑制肿瘤转移的功能。

摘要:设计并筛选靶向nm23-H1基因的siRNAs序列，探讨nm23-H1基因与人慢性髓性白血病之间的关系。依据siRNA设计原则，设计3条siRNA序列。将不同靶点的siRNA用lipofectamine2000转染人慢性髓性白血病细胞株K562。转染后24h RT-PCR检测nm23-H1 mRNA水平变化；转染后48h免疫细胞化学法检测nm23-H1蛋白表达。MTT法检测转染后24h、48h和72h有效siRNA对K562细胞生长的影响。3条siRNA中，siNM526能有效地抑制K562细胞nm23-H1基因表达，转染siNM526的K562细胞生长受到抑制。说明下调nm23-H1基因的表达有抑制K562细胞增殖的作用，即降低了K562细胞的恶性程度。Nm23-H1基因有可能成为白血病治疗潜在的分子靶点。

摘要:采用PCR技术分别从人全血基因组DNA及引产胚胎肾组织Cdna中扩增得到gpr81的全长Cdna序列(1041bp)，运用生物信息学手段绘制该基因的分子进化树，显示该基因的氨基酸序列与烟酸受体同源性最高；然后，采用RT-PCR法分析该基因表达的组织分布，组织表达谱显示该基因在多种组织均有表达，以心脏及肝脏组织为最高；利用分子克隆手段构建含6×组氨酸（His）标签蛋白的真核表达载体pcDNA3.1(-)/hismyc-A-gpr81，通过脂质体介导，将该重组质粒转染CHO-K1细胞，RT-PCR证实该基因已整合入CHO-K1 细胞的基因组中，Westernblot表明GPR81在CHO-GPR81工程细胞株中有表达。组织表达谱的检测和工程细胞株的建立为进一步研究该受体的生物学功能奠定了基础。

摘要:克隆人白细胞介素-26（human interleukin-26,Hil-26）基因，构建高效稳定的大肠杆菌表达菌株。对GenBank上报道的Hil26基因进行序列分析后设计合成引物，利用RT-PCR技术从人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA中反转录并扩增得到人成熟肽IL-26基因。将得到的基因克隆到Pmd18-T载体中，菌落PCR筛选、酶切鉴定并进行DNA序列分析。用Bam-HI和EcoRⅠ将目的片段切下，插入表达载体Pbv220相应的位点。42℃热诱导表达目的蛋白，SDS-PAGE分析显示表达蛋白约占菌体总蛋白的20%，Western印迹法证实重组蛋白为特异性蛋白，分子筛纯化后纯度达90%以上。表达的重组蛋白经谷胱甘肽复性缓冲液复性，用RT-PCR检测复性的重组蛋白能促进PBMC合成IFN-γ。

摘要:囊膜功能糖蛋白F和G的重组杆状病毒rBac-NF、rBac-NG。Westernblot证实大小分别为61kD和66kD的重组融合蛋白（Rnf）和受体结合蛋白（Rng）分别在rBac-NF、rBac-NG感染的昆虫细胞中获得表达，并且Rnf前体F0可在昆虫细胞内进一步有效裂解为F1（～49kD）和F2；采用兔抗NiV病毒高免血清间接免疫荧光检测重组杆状病毒表达F和G蛋白显示出良好的特异免疫反应原性。以rBac-NF、rBac-NG感染的昆虫细胞裂解液稀释后直接包被ELISA板，间接ELISA检测兔抗灭活 NiV全病毒高免血清中的F和G蛋白特异性抗体，同样具有良好的敏感性和特异性；以rBac-NF和rBac-NG感染昆虫细胞培养物直接免疫BALB/c小鼠，可诱导显著的NiV F和G蛋白特异体液免疫反应，产生的特异抗体可有效中和NiV囊膜蛋白F和G介导的伪型VSV重组病毒侵入NiV易感宿主细胞的感染性。结果表明，杆状病毒表达重组F和G蛋白抗原具有替代NiV全病毒，作为安全、经济、敏感和特异的诊断抗原的潜力，并为重组病毒亚单位疫苗防制尼帕病毒性脑炎的探索研究奠定了基础。

摘要:将白细胞介素-2基因和猪细小病毒VP2基因主要抗原区克隆至pCI-neo真核表达载体中，构建了pCIneo-IL₂-VP₂重组质粒，用脂质体将其转染到PK-15细胞中，利用免疫荧光方法检测在体外表达情况。并以小鼠为动物模型，将pCIneo-IL₂-VP₂重组质粒、对照组pCI-neo和猪细小病毒活疫苗通过肌肉注射进行免疫，检测免疫小鼠的淋巴细胞转化功能，特异性CTL杀伤活性和血清抗体滴度。结果显示，pCIneo-IL₂-VP₂在体外能够诱导PK-15细胞表达VP-2蛋白，小鼠注射pCIneo-IL₂-VP₂质粒1周后能够诱导机体产生抗体，4周时达到峰值，与活疫苗对照组产生的抗体滴度、诱导T淋巴细胞增殖和诱导强的细胞毒性基本一致。试验表明，构建的pCIneoIL₂-VP₂能够有效诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。

摘要:以本实验室选育的小麦优良品系的胚性愈伤组织为材料，采用农杆菌介导将抗虫基因豇豆胰蛋白酶抑制剂基因CpTI转入小麦培养细胞，经筛选获得抗卡那霉素的愈伤组织并再生植株。经PCR和实时PCR检测、PCR-Southern和Southern blot验证，确定了3株独立再生植株为含有CpTI的转基因植株。农杆菌菌浓度、侵染时间及转化处理方式对小麦转化率均有明显影响。3株转基因植株正常可育并结籽，形成转基因株系。外源基因在转基因植株T₁代中的分离呈多样性，部分株系（转基因株系T-Ⅰ、T-Ⅲ）表现出孟德尔遗传规律。抗虫试验表明，3株转基因植株T₂代籽粒对储粮害虫麦蛾具有一定的抗性，转基因株系T-Ⅰ、T-Ⅱ、T-Ⅲ及非转基因植株的T2代籽粒虫蛀率分别为19.8%、21.9%、32.9%和58.3%。转基因植株T₁代群体农艺性状调查显示，3个株系具有良好的农艺性状，为小麦的遗传改良提供了新的种质抗虫材料。

摘要:以皖麦48为受体导入反义trxs基因已获得00T89第4代（T₄）转基因株系，对其进行反义基因的PCR鉴定、相对定量RT-PCR基因表达检测以及抗穗发芽特性研究。结果表明，18个T₄代转基因株系中，13个株系目的基因检测呈阳性；成熟期籽粒萌发过程中，8个株系转录水平上mRNA丰度极显著降低（P<0.01），mRNA丰度与穗发芽指标呈显著和极显著的相关性（r=0.7181）。其中6个株系在开花后30d至成熟后10d表现出明显的抗穗发芽特性。与非转基因对照相比，平均穗开始发芽时间推迟2.7d（P<0.01），穗粒发芽率和穗发芽度分别降低35.5%（P<0.01）和47.5%（P<0.01）,成熟后25d这些株系又逐渐恢复发芽特性，无显著差异（P>0.05）。

摘要:根据GenBank报道的鸡新城疫病毒F基因序列设计了一对引物，以鸡新城疫病毒HeB02分离株基因组为模板，通过RT-PCR扩增出了1.66kb左右的F基因片段，序列分析表明HeB02株F基因与国内标准强毒株F48 E9及弱毒疫苗La Sota和Clone30 的F基因核苷酸序列的同源性分别为88.1 %、84.9 %和83.8 %。将HeB02株F基因插入真核表达载体pVAX1中，构建了真核表达质粒pSV-F，通过脂质体转染COS-7细胞， SDS-PAGE分析可见表达的特异蛋白条带；Western blot、ELISA和中和试验检测结果表明：真核表达的蛋白与抗新城疫病毒的抗体发生特异性反应，说明F蛋白具有很好的免疫原性。采用活体电击法以真核表达质粒pSV-F免疫3周龄SPF鸡，剂量为50μg/只，3周后加强免疫1次，5周后以100倍鸡胚感染剂量(EID)的F基因同源病毒对所有鸡进行攻毒，攻毒前后每周分别以喉拭子进行病毒分离和HI效价测定。结果显示对照组在攻毒前一直没有检测到抗体效价，攻毒后检测效价为3.0 log2±1.40，并且于攻毒后第9天全部死亡；活疫苗组和实验组免疫后第2周检测到抗体效价，第5周最高，HI效价分别为8.3 log2±1.30和7.2log2±1.23，攻毒1周后HI效价分别达9.8log2±1.55和8.9log2±1.77, 极显著高于对照组（P＜0.01)。免疫组未分离到新城疫病毒，对照组全部分离到新城疫病毒。表明所构建的F基因真核表达质粒可作为候选基因疫苗诱导鸡产生免疫保护反应。

摘要:利用PCR技术从重组质粒pET-3c-tum中扩增人tumstatin的cDNA片段，连入pPICZαA酵母表达载体，获得的重组质粒pPICZα-tum电激法转化毕赤酵母GS115。经表型鉴定、诱导表达筛选，得到可分泌表达人tumstatin的重组酵母转化子，表达蛋白质的相对分子量约30kD，表达量约25mg/L。表达上清经超滤浓缩和离子交换法初步纯化，所得产物具有免疫活性，能够抑制内皮细胞增殖，诱导其发生细胞凋亡，并能抑制鸡胚尿囊膜血管生成。

摘要:老年性痴呆（Alzheimer's disease, AD）是老年人群中最普遍的痴呆类型，是一种神经退行性紊乱疾病，目前临床上还没有有效的治疗方法。快速老化小鼠亚系P8（senescenceaccelerated mouse prone8, SAMP8）是研究增龄相关性认知缺陷机制以及研究脑老化机制的良好动物，同时也是研究AD较为理想的实验动物模型之一。cDNA芯片技术可以同时规模研究成千上万个基因的表达，尤其适于AD这种多机制、多靶标、多途径的复杂疾病的研究，为了揭示AD的发病机制，发现用于治疗AD的药物靶标，以SAMP8和SAMR1海马抑制消减cDNA文库中的cDNA片段为材料，以β-actin和G3PDH为内参，设计了16×（14×14）点阵方案，并点制了含有3136个点的SAM海马差异表达cDNA芯片。芯片背景均匀一致，点的大小均一，排列规则整齐。在靶分子与探针杂交过程中，进行了杂交条件和洗涤芯片的优化。将杂交结果进行统计分析，选择差异表达的cDNA进行测序并进行生物信息学分析，用实时定量RT-PCR对部分基因的表达进行了验证，检测了芯片筛选结果的可靠性。该芯片的成功制备为进一步进行差异表达基因的筛选和研究提供了良好的手段，并将成为揭示SAMP8脑老化和AD发病机制的有力手段。

摘要:从印度娃儿藤节间外植体获取愈伤组织，分析了糖、赤霉素（GA₃）及脱落酸（ABA）对愈伤组织形成体细胞的影响。实验证明，含4 μmol/L 2, 4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D）的MS培养基是获得具有成胚功能的愈伤组织的最佳培养基。在含有6 μmol/L激动素（Kn）的MS培养基上，高达69%的愈伤组织分化为体细胞胚，平均单位外植体（每克愈伤组织）产胚25个。在6 μmol/L Kn存在的条件下，分析了蔗糖、葡糖糖对胚产生的影响，不同的糖及不同糖浓度对体细胞胚的发生影响很大。6 μmol/L Kn 与200 mmol/L 蔗糖处理胚胎发生率最大（71%），单位外植体生成49个胚。然而葡萄糖与Kn、或者葡糖糖、蔗糖与Kn三者加在一起则降低成胚率及产胚数。一定浓度的GA₃ 和 ABA能促进体细胞胚的产生。在含200 mmol/L蔗糖的培养基中加10 μmol/L GA₃胚的生成率为98%，单位外植体产胚51个。在含200 mmol/L蔗糖的培养基中加2 μmol/L ABA能显著增加体细胞胚的量，该培养基上每外植体平均生成44个胚，产率为95％。本研究显示，含200 mmol/L蔗糖的培养基中分别加入6 μmol/L Kn、10 μmol/L GA₃ 或者 2 μmol/L ABA能显著提高印度娃儿藤体细胞胚发生率，而单独的葡萄糖或葡糖糖和蔗糖则有抑制作用。得到的胚均能正常发育并分化为植株。

摘要:白细胞介素1受体拮抗剂（Interleukin 1 receptor antagonist，IL-1ra）是IL-1家族的一员，由于它可以特异性地抑制IL1的生物学效应，因此在类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA)的治疗中倍受重视。为了提高IL1ra的代谢稳定性，利用Ala代替其序列中的双碱性氨基酸，构建了3个突变体，分别为IL-1ra-1（R⁶K⁷-AA），IL-1ra-2（R⁹³K⁹⁴-AA），IL-1ra-3（K⁹⁷R⁹⁸-AA）；将突变后的序列插入表达载体pTIG-Trx，转化大肠杆菌BL21(DE3)；利用Ni2+金属螯合层析，SephadexG75凝胶过滤纯化表达产物；体外活性检测的结果表明，3个突变体的生物学活性与IL-1ra相比没有显著性差别（P=0.2248）；初步的药代动力学分析结果显示：3号突变体IL-1ra-3的半衰期与IL-ra相比提高了2.26倍。

摘要:以克隆的CD40 cDNA为模板，经多步PCR构建羧基端融合异亮氨酸拉链(isoleucine zipper, IZ)三聚化基序和His6标签的可溶性CD40融合蛋白(sCD40IZ)的原核表达载体，在大肠杆菌中获得高效表达，分子量为27kD, 与理论大小相符，表达产物主要存在于包涵体中，对包涵体蛋白进行稀释复性和纯化得到可溶性的sCD40IZ重组蛋白，该蛋白在溶液中的分子量为91kD，表明最有可能以三聚体形式存在。活性分析显示该蛋白能够与细胞上的CD40L结合，并且其结合活性与不含IZ基序的可溶性CD40相比明显提高。这些结果表明，在可溶性CD40羧基端融合IZ基序能够促进形成三聚体，并且具有增强的配基结合活性。

摘要:针对发酵过程非线性和时变特点，提出了一种具有实时性的动态MPCA方法，采用多模型非线性结构代替传统MPCA单模型线性化结构，克服了后者不能处理非线性过程和实时性的问题，并避免了MPCA在线应用时预报未来测量值带来的误差，提高了发酵过程性能监测和故障诊断的准确性。对头孢菌素C发酵过程的拟在线仿真研究，验证了基于动态MPCA的统计过程监测的有效性。

摘要:根据转铁蛋白受体和转铁蛋白特异性结合的性质，利用亲和纯化的方法从胎盘中提取转铁蛋白受体。以转铁蛋白受体为抗原包被免疫管，从全合成人源噬菌体单链抗体库中筛选其抗体。对筛选到的抗体进行特异性鉴定后，将抗体基因插入表达载体pET22b(+)，转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导后获得可溶性表达。HeLa细胞的免疫组化结果显示，表达的抗体可以与转铁蛋白受体结合。表达产物经NiNTA金属螯和层析柱纯化、脱咪唑后，从尾静脉注射小鼠。1h后，去除血液及毛细血管的干扰，在脑实质中检测到了抗体的存在，说明该抗体可以通过血脑屏障。

摘要:黄热疫苗是一种减毒的黄热病毒17D（YF-17D）活疫苗，是现有疫苗中最安全、最有效的疫苗之一，适于发展为疫苗载体。用RT-PCR法扩增出覆盖YF17D全长基因组的3个cDNA片段：5′cDNA（A）、3′cDNA（B）和中间cDNA（C），同时引入SP6增强子序列、酶切位点和重复序列。顺序将A和B同E.coli yeast穿梭质粒pRS424连接，再与C共转染酵母菌，利用缺少色氨酸和尿嘧啶的选择性固体培养基筛选出含YF-17D全长基因组的cDNA质粒。以该质粒为模板，经过DNA重组和酵母同源重组，获得含有口蹄疫病毒蛋白水解酶2A片段的重组YF-17D表达载体。将该表达载体体外转录后，电击转染BHK-21细胞。间接免疫荧光检测结果表明，RNA转录体在BHK-21细胞中进行了稳定的表达；滴度测定与形态学观察结果表明，重组病毒在细胞中的生长曲线等特征同母本YF-17D十分相似。结果提示，利用酵母菌同源重组在2A部位引入异种抗原基因，重组YF-17D表达载体pRS-YF-2A1具有成为高效活疫苗表达载体的潜力。

摘要:为制备rpZP3α蛋白供发展避孕疫苗研究，将编码天然提取pZP3α上的DNA序列（446～1423）插入至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA上，重组质粒pPICZαApZP3α线性化后通过电穿孔转入毕赤酵母GS115，经抗生素Zeocin筛选获得工程菌。在2L发酵罐中，用甲醇诱导工程菌进行高密度发酵生产rpZP3α。分离浓缩发酵上清液，通过螯合铜离子的亲和柱纯化rpZP3α，用SDSPAGE 和Western blot进行鉴定，以Quantity One软件对rpZP3α进行定量分析并计算纯度和回收率。用rpZP3α免疫家兔，以ELISA法和间接免疫荧光法检测抗血清对rpZP3α和猪卵透明带的抗体反应。 获得了分泌表达rpZP3α的工程菌，其高密度发酵产物经分离纯化后获得能与抗pZP3抗体反应的46kD成分，命名为rpZP3α， 平均产量为8mg/L,纯度达92%，回收率为63%。 用其免疫家兔获得抗rpZP3α抗血清，ELISA测定显示能与rpZP3α和天然提取pZP3反应。间接免疫荧光法分析显示抗rpZP3α抗血清能与猪卵透明带反应，产生亮绿荧光。用酵母表达系统成功表达了rpZP3α，该蛋白保留有天然pZP3的免疫活性。

摘要:建立了小分子DNA的高效分离纯化方法，适合于分离几十到300个核苷酸组成的基因，在此基础上，建立更大的DNA片段的分离纯化方法。对不同大小的DNA片段经琼脂糖凝胶电泳后，采用石英棉分离纯化法纯化DNA。结果显示，石英棉的分离效果最好，对于200个碱基以下的DNA的回收率约高达90％以上，对于300个碱基的DNA回收率为约85～90，该项技术纯化的DNA的酶切、酶连效率与试剂盒法纯化的DNA的酶切、酶连效率相同。该分离纯化DNA技术明显优于试剂盒方法。

摘要:在完全合成培养基条件下，就渗透压保护剂和营养物质对一株产高浓度酒精的酿酒酵母X330高浓度发酵时耐酒精性能的影响进行了初步研究。结果表明，与渗透压相比，营养缺乏对酿酒酵母高浓度发酵时酒精耐受性能可能起着更为关键和重要的作用。发酵培养基中各营养元素对耐酒精性能的影响不同，由高到低的顺序是酵母抽提物＞蛋白胨＞硫酸镁＞ 维生素C = 磷酸二氢钾＞氯化钙 = 硫酸铵。渗透压保护剂（甘氨酸和脯氨酸）能有效提高菌体酒精耐受性能。当甘氨酸添加浓度为20mmol/L或脯氨酸添加浓度为10mmol/L时，发酵终点酒精浓度最高，菌体于30 ℃在18%（V/V）酒精冲击下的存活率最大，且均高于对照组（未添加甘氨酸且未添加脯氨酸）水平，但甘氨酸的促进作用强于脯氨酸。

摘要:含农杆碱型Ri质粒pRiA4b的发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)ATCC15834 感染黄瓜子叶外植体5 d 后产生毛状根,毛状根可直接从叶片外植体叶脉处产生。感染10d 后,约90 %的子叶外植体产生毛状根。毛状根能在无外源生长调节剂的MS 固体和液体培养基上自主生长。PCR 扩增结果证实,发根农杆菌Ri 质粒的rolB 和rolC 基因已在黄瓜毛状根基因组中整合并得到表达。挑选一无菌黄瓜毛状根系置于含不同浓度6-BA的MS培养基中悬浮培养来探讨细胞分裂素6-BA对黄瓜毛状根生长及其形态变化的影响。结果表明，细胞分裂素6-BA能促进黄瓜毛状根的生长及改变其生长形态。随着培养基中6-BA浓度的升高，黄瓜毛状根变得越来越短而粗，更少分枝。与对照相比，培养基中添加0.1～3.0 mg/L 6-BA能推迟毛状根最大生长峰的出现，降低其可溶性蛋白含量、SOD和POD酶活性；而黄瓜毛状根的乙烯释放高峰比其最大生长峰和SOD和POD酶活性高峰提前5天，但6-BA处理能降低毛状根的内源乙烯释放量。该结果表明细胞分裂素6-BA可能通过对乙烯生成和释放的调节来影响黄瓜毛状根的生长和形态并延缓毛状根的衰老。