摘要:融合标签最初是作为一种有效的工具用于纯化重组蛋白质，近几年的研究表明，融合标签的作用并不局限于此。本文综述了融合标签技术的发展及在生命科学研究中的各种应用，包括重组蛋白质的纯化；目的蛋白质的检测、定向固定；体内生物事件的可视化；提高重组蛋白质的产量；增强重组蛋白质的可溶性及稳定性。

摘要:为了进一步提高植酸酶的发酵效价，降低植酸酶生产成本，对毕赤酵母表达载体pGAPZα-A进行了改造。将表达载体pPIC9的AOX1启动子序列引入pGAPZα-A，使之成为甲醇可诱导型表达载体pAOXZα, 插入植酸酶基因appA-m后得到重组载体pAOXZα-appA-m 。以染色体上带有一个拷贝的appA-m基因、发酵效价可达到7.5×10⁶IU/mL发酵液的重组酵母菌株74#为受体菌进行转化，在该重组菌株的染色体上的另一位点整合含有植酸酶基因的表达盒，经筛选到高表达植酸酶的重组子。通过PCR进行验证，植酸酶基因被整合到重组酵母的染色体上,且受体菌中原有的植酸酶基因结构未改变。重组菌在5L发酵罐经甲醇诱导120h植酸酶蛋白表达量达到4mg/mL发酵液, 酶活性(发酵效价)达到1.2×10⁷IU/mL发酵液以上, 较含单拷贝植酸酶基因的受体菌株表达量有较大程度提高。PCR检测及表达量分析证明改良的菌株具有很好的遗传稳定性和表达稳定性。

摘要:枯草芽孢杆菌在葡萄糖丰富的环境中，胞内糖分解代谢物浓度的提高将引起碳分解代谢物阻遏效应（CCR）及糖吸收 的抑制，对核黄素等发酵过程产生不利影响。通过缺陷细胞的分解代谢物控制蛋白A（CcpA）可以解除CCR效应，但不能解除糖吸收的抑制。磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统（PTS）是枯草芽孢杆菌主要的糖吸收方式，HPr蛋白和双功能的HPr激酶/HPr-Ser46-P 磷酸酶（HprK/P）参与PTS系统的调控。在葡萄糖丰富的条件下，K96SRQ 的激酶活性受1,6二磷酸果糖激活，催化HPr蛋白46位丝氨酸残基磷酸化，形成HPr-Ser46-P.HPr-Ser46-P抑制某些碳源透过酶基因的表达；同时HPr-Ser46-P难以被酶I在His15磷酸化，不能在PTS系统中发挥转移磷酸基团的作用，使细胞的糖吸收受到抑制。在CcpA缺陷的背景下，敲除核黄素生产菌株B.subtilis24Al/Pmx45 的HprK/P 编码基因hprK，构建了CcpA和HprK/P双缺陷的重组菌B.subtilisZHc/Pmx45.摇瓶发酵显示，B.subtilisZHc/Pmx45核黄素发酵的最适葡萄糖浓度由24Al/Pmx45的8%提高到10%;核黄素产量达到4.374mg/Ml,比24Al/Pmx45提高了19.2%。结果表明，CcpA和HprK/P的双缺陷可有效解除高浓度葡萄糖所引起的CCR效 应和糖吸收抑制，有助于提高细胞对葡萄糖的耐受力，并提高核黄素产量。

摘要:根据天然鲑鱼降钙素（Salmon calcitonin,SCT）和骨生长肽（Osteogenic Growth Peptide，OGP）的序列，人工合成了6个DNA片段，进行退火、连接和转化后，获得含有SCT与OGP融合基因的pPIC9-SCT-OGP表达载体，经测序后将此重组质粒电击转化毕赤酵母GS115，通过培养、筛选以及SDS-PAGE鉴定，在毕赤酵母中获得了SCT-OGP融合蛋白的可溶性表达，经分子筛纯化后在5kD左右可见单一条带。将此条带进行了N端氨基酸组分分析，证实此目的蛋白为SCT-OGP融合蛋白。 MTT法显示SCT-OGP融合蛋白在体外可以促进成骨细胞和成纤维细胞增殖，以小鼠为模型的试验显示SCT-OGP融合蛋白在体内可以提高碱性磷酸酶活性和降低血钙，表明该融合蛋白具有抑制破骨细胞的活性和刺激成骨细胞增殖的活性，从而提示该融合蛋白具有治疗骨质疏松症的药用潜力。

摘要:来源于Pyrococcus furiosus的耐高温α-淀粉酶是一种重要的酒精工业用酶，在植物中表达耐高温α-淀粉酶可以大大降低用植物秸秆生产酒精的成本。选择衣藻叶绿体基因组同源片段clpP-trnL-petB-chlL-rpl23-rpl2和壮观霉素抗性基因，构建了来源于Pyrococcus furiosus的耐高温α-淀粉酶基因的衣藻叶绿体表达载体P64a。通过基因枪将其导入衣藻叶绿体中，经壮观霉素抗性(100mg/L)筛选，获得了9 个抗性衣藻转化子。转化子经过抗性继代筛选后，经PCR、Southern blot 检测分析及暗培养，证实耐高温α-淀粉酶基因已整合到衣藻叶绿体基因组中并得到表达。酶活性检测表明，转基因衣藻表达产物具有耐高温α-淀粉酶活性，每克鲜重衣藻最高达77.5u。 实验结果证明在植物叶绿体中表达工业酶制剂是可行的。

摘要:利用雌激素诱导的Cre/loxP DNA重组系统，构建用于转基因植物删除标记基因的实用新型载体，将所有非目的基因放于两同向loxP位点间，多克隆位点位于两loxP位点外，可插入目的基因，载体设计非常实用。在插入目的基因GUS后转化烟草，雌激素诱导，分析诱导前后DNA的重组情况、不同时间基因转录水平，以及目的基因在诱导前后的表达。结果显示，诱导后染色体DNA实现了高效重组，非目的基因片段消失，目的基因GUS在诱导后表达正常。

摘要:利用PCR扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒的M基因，按正确的读码框与GP5基因串联，成功构建穿梭载体pShuttle-CMV-M-GP5，经PCR、测序鉴定正确。PmeⅠ线性化后在BJ5183大肠杆菌内与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组，产生重组腺病毒DNA。重组腺病毒DNA经PacⅠ线性化后用脂质体转染HEK-293A细胞，在细胞内包装成完整的腺病毒，通过IFA可以检测到M与GP5串联的重组腺病毒构建成功，可以正确地表达目的蛋白。将构建好的重组腺病毒免疫小鼠，结果表明可以诱导产生较强的体液免疫应答（ELISA抗体和中和抗体）和细胞免疫应答（淋巴细胞增殖和CTL反应）。证明该重组腺病毒具有较好的免疫原性，为下一步猪体免疫试验奠定了基础。

摘要:促性腺激素释放激素（gonadotropin_releasing hormone，GnRH）是下丘脑分泌产生的神经激素，对脊椎动物生殖的调控起重要作用。为研究GnRH对奥利亚罗非鱼性腺发育的作用，构建了GnRH cDNA的原核表达载体并进行融合表达。利用RT-PCR方法从丘脑中扩增出长约400bp的目的序列GnRH基因，克隆至T载体中，经酶切鉴定和序列测定分析确认序列的正确性后将此片段克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH，并在大肠杆菌TB1中获得了高表达,目的蛋白约占菌体总蛋白的41.6%。菌体经溶菌酶裂解，制备无细胞抽提液，Amylose-sepharose柱层析后得到分子量为56kD单一条带的目的蛋白。目的蛋白经Factor Xa酶切裂解，Amylose-sepharose过柱纯化后得到纯化的GnRH前体蛋白。以80μg/只的剂量4次免疫ICR小鼠，免疫小鼠可以检测到特异性针对GnRH前体蛋白的血清抗体应答，免疫组抗体水平显著高于空白组（P<005），且加强免疫第5周后抗体效价为0707±0320，达到高峰值，说明表达产物具有免疫原性，可以刺激机体产生免疫应答。

摘要:以工业生产菌株黑曲霉CICIM F0410基因组DNA为模板，扩增出糖化酶glaA基因，测序并进行表达研究。GlaA基因的核苷酸序列长为2167 bp，包含4个内含子。氨基酸序列比对表明此黑曲霉糖化酶与其他曲霉属来源的糖化酶有很高的同源性。将glaA基因克隆到pBC-Hygro载体中，构建重组质粒pBC-Hygro-glaA并转化A. nigerF0410。携多拷贝glaA的转化子用150μg/mL潮霉素抗性筛选并通过荧光实时定量PCR鉴定。结果表明，在染色体整合2～3倍糖化酶基因对糖化酶的过量合成是适宜的，有助于提高糖化酶活力。对转化子进行摇瓶发酵研究，发酵终止时转化子GB0506的糖化酶活力比出发菌株F0410提高了17.5%。因此，增加黑曲霉染色体糖化酶基因的拷贝数可以显著提高糖化酶活力。

摘要:使用同源重组方法，在昆虫细胞内将多角体启动子驱动的EGFP表达盒插入杆状病毒穿梭载体Bacmid 的p74位相，经5轮空斑纯化获得重组穿梭载体Bacmid-egfp。然后将Bacmid_egfp转化含转座助手质粒的E.coli DH10B，获得受体菌E. coli DH10Bac-egfp，由于Bacmid-egfp保留了完整的转座结构和α互补功能，因此该菌株和原始E. coli DH10Bac一样能有效的利用各种pFastBac系列的载体进行转座并构建出能指示病毒繁殖和目的基因表达的重组病毒。使用红色荧光蛋白DsRed对系统进行了验证，结果表明重组病毒Bac-egfp-DsRed感染的细胞中绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白均得到了高效表达。进一步使用该系统在昆虫细胞中高效表达并纯化了IL-6蛋白，为研究和应用该细胞因子提供物质基础，同时也进一步证明所改造的杆状病毒表达系统的可靠性和实用性。

摘要:用限制酶EcoRⅠ、KpnⅠ分别对雅致枝霉As32806基因组DNA进行消化，而后在低浓度条件下利用T4DNA连接酶使DNA自身环化。根据已知基因序列，设计一对长度为35nt的长反向引物和两对较短的引物，以基因组连接产物为模板，通过三轮嵌套式PCR反应，获得一长度约为4kb的扩增片段。经序列测定表明得到了Δ⁶-脂肪酸脱氢酶基因上游序列约为1.3kb，初步序列分析显示该序列为一潜在的启动子序列。

摘要:应用改进的RAPD方法测定了名贵中药材天麻基因组DNA指纹图谱；通过选择和回收各种天麻种群共有和优良种群特有的DNA片段，加以克隆、测序和生物信息学分析，证明其中5个DNA序列是未报道的，已被美国基因数据库收录，并运用高效液相色谱技术测定了天麻样本的有效成分天麻素含量。运用PCR技术研究了这些DNA序列在9个天麻种群中的分布及其与天麻素含量的关系。结果表明：这5个DNA序列在这些天麻种群中的分布各不相同，其中DNA序列1是所研究的全部天麻种群共有、而其伪品没有的特异DNA分子标记；DNA序列2可能与天麻的天麻素含量高有关。这些DNA标记序列可用于天麻的真伪鉴别、品种鉴定和优选优育等。

摘要:根据报道的cDNA序列，用RT-PCR的方法从美洲商陆夏季的叶片中克隆美洲商陆抗病毒蛋白-Ⅱ（pokeweed antiviral protein Ⅱ，PAP-Ⅱ）基因。将PAP-Ⅱ基因克隆至表达载体pET-28a(+)并在大肠杆菌中表达，SDS-PAGE电泳分析结果表明，PAP-Ⅱ蛋白在BL21(DE3)菌中获得表达，表达产物以不溶性包涵体形式存在，经过溶解包涵体、复性和BBST NTA树脂柱亲和层析纯化，获得高纯度的PAP-Ⅱ蛋白。用非放射性基于ELISA方法检测经过复性纯化后PAP-Ⅱ蛋白和蓖麻毒素A链（RTA）在体外对HIV-1整合酶有较强的抑制活性，其IC₅₀分别约为303μg/mL，220μg/mL。用MTT法分析PAP-Ⅱ蛋白的生物学活性，复性纯化后蛋白对HEP-G2和Hela细胞有细胞毒作用，IC₅₀分别为93μg/mL，102μg/mL，说明了PAP-Ⅱ蛋白能抑制肿瘤细胞的生长。构建的PAP-Ⅱ表达系统所表达的蛋白经复性后具有生物学活性，为进一步研究PAP-Ⅱ的抗HIV-1机制和抗肿瘤作用奠定了基础。

摘要:用BamHⅠ和BglⅡ双酶切含SS2嵌合基因片段的重组质粒pAO815-SS2，分离含AOX1启动子区、SS2嵌合基因和AOX1转录终止序列的表达盒。将分离的BamHⅠ-BglⅡ表达盒与经BamHⅠ线性化的pAO815-SS1质粒连接，转化大肠杆菌Top10F′，提取质粒，用BamHⅠ和BglⅡ双酶切分析重组质粒并筛选正向插入SS2表达盒的重组子。将该重组质粒用电转化法导入Pichiapastoris GS115细胞，经表型筛选、小试表达和产物鉴定，构建了重组表达菌株GS115-SS1S2。重组菌株经甲醇诱导后制备抗原粗提液，进一步进行ELISA和Western blot鉴定。ELISA结果显示，产物同时具有S、前S1和前S2抗原性。Western blot分析进一步表明，表达产物既能与S抗体结合，也能与前S1和前S2抗体结合。工程菌经高密度发酵，表达量达到300～600mg/L。抗原经纯化后进行电镜观察，形成直径20～35nm的球形颗粒。纯化抗原经SDS-PAGE分析，SS1和SS2多肽仍然保持完整，基本无降解。

摘要:分析了培养光强对转基因鱼腥藻生长和hTNF-α基因表达的影响，以及转基因鱼腥藻IB02的光合放氧活性、光系统Ⅰ及光系统Ⅱ活性。发现光强对转基因鱼腥藻IB02的生长和hTNF-α基因表达都有促进； hTNF-α基因在鱼腥藻中的表达率与真正光合、光系统Ⅰ和光系统Ⅱ活性存在一定的联系。hTNF-α基因表达同时对宿主的光合放氧特性也产生了显著的影响,与正对照相比转基因藻光呼吸速率增强68%，饱和点降低66%，说明转基因鱼腥藻的代谢负荷增加，并在低光强下生长比野生型快。

摘要:在确定了最适接种量和外植体细胞生理时间的基础上，研究了在不同起始磷浓度下，霍山石斛类原球茎生长、碳、氮消耗和多糖积累的动力学特性。以生长30d的类原球茎为材料，在接种量为100g/L时，类原球茎生长的最佳起始磷浓度为25mmol/L，培养36d时，类原球茎鲜重达496.5g/L。动力学分析表明，磷是霍山石斛类原球茎生长的限制性因素，胞内磷的积累水平与细胞生长具有相关性，2.5mmol/L的磷酸盐有利于碳、氮等营养物质的吸收；而多糖积累的最佳起始磷浓度为0.312mmol/L，培养36d时，其产量为2.22g/L。

摘要:研究了外源激素对液体培养何首乌毛状根生长及其蒽醌类化合物生物合成的影响。结果表明：外源激素2,4-D、NAA和6-BA对何首乌毛状根的生长及蒽醌生物合成有较大的影响。在MS培养基中添加2,4-D对何首乌毛状根的生长和蒽醌类化合物的生物合成有很强的抑制作用，而添加适量浓度NAA和6-BA则可促进何首乌毛状根的生长以及蒽醌类物质的生物合成。

摘要:喜树碱是一种从木本植物喜树(Camptotheca acuminata)中分离得到的抗癌活性物质，通过细胞培养合成喜树碱是喜树碱生产的一条重要途径。研究Cu²⁺对喜树愈伤细胞培养中喜树碱积累的影响，结果表明，在B5培养基中添加0.008mg/mL Cu-Cl²时，对喜树愈伤细胞的生长没有明显影响，但是对喜树愈伤细胞合成喜树碱的促进作用最强，喜树碱含量比未诱导前增加了约30倍。Cu²⁺阻止培养细胞后期过氧化物酶活力的下降，并抑制花青素的生成。与黑暗培养相比，光照条件下添加Cu²⁺更利于喜树愈伤细胞诱导合成喜树碱。

摘要:通过改进提纯方法获得了柑橘衰退病毒（Citrus tristeza virus，CTV）的提纯液，其产量为1mg/100g植物组织。用CTV免疫大耳白兔，获得多克隆抗体，间接ELISA效价为1∶25 600。用CTV免疫小鼠，经细胞融合、ELISA筛选和克隆化培养，获得18株能稳定分泌抗CTV单克隆抗体的杂交瘤单细胞株。对其中4株单克隆腹水抗体进行分析的结果表明，这些抗体的ELISA效价为1∶51 200～1∶204 800，其中2G和3H的抗体类型及亚类为IgG2a，1E和4H为IgG2b。用所制备抗体对不同来源柑橘样品的CTV检测结果显示，单克隆和多克隆抗体结合使用，采用三抗体夹心ELISA（TASELISA）可以获得理想的检测效果，其特异性强、灵敏度高。同时发现所分析4株单克隆抗体对不同的CTV分离物鉴别能力存在差异，但有关这些CTV分离物的特性及其血清学关系还需进一步研究。

摘要:利用Absidia sp.R菌株，通过液体发酵的方法，得到了一种高活性的大豆异黄酮糖基水解酶。该酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Cellocuse（DE52）离子交换层析纯化，被纯化了11倍，收率为10.9%；经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶的分子量为53kD；该酶的最适反应温度为50℃；最适pH为5.0；温度低于60℃，pH在5.0～7.0范围内该酶较稳定，Co²⁺、Ca²⁺对该酶有激活作用；Ag⁺、Cu²⁺对该酶有抑制作用。当以染料木甙为底物时该酶的米氏常数（K_m）为1.3×10^-2mol/L。等电聚焦电泳测得其等电点为3.2。

摘要:通过硫酸铵分段沉淀、DEAE-纤维素柱和Sephadex G75柱层析从雌地鳖（Eupolyphage sinensis walker）体内分离纯化到一种相对分子质量约为41.3kD的纤溶活性蛋白，纤维蛋白平板测定表明，该蛋白具有纤溶作用，经SDS-PAGE电泳显示为一条带，含糖量为10.5%。其水解纤维蛋白的比活力为547.86u/mg 。该成分受蛋白抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF的抑制，但EDTA对其影响不大，提示该成分属于丝氨酸蛋白酶类。该成分在40℃下基本稳定，最适温度40℃，最适pH为8.0,其激活纤维蛋白溶解酶(PLG)的机制与尿激酶(UK)有一定区别。推测其可能是一种新的地鳖纤溶酶组分。

摘要:对Bacillus subtilis fmbJ脂肽类抗菌物质的分离和鉴定进行了系统研究。通过HPLC层析确定Bacillus subtilis fmbJ抗菌物质由多种组分构成，其中含有保留时间与surfactin相似的成分。通过TLC层析和原位酸解确定Bacillus subtilis fmbJ抗菌物质含有两个具有闭合肽键类的物质，其中之一为迁移率Rf与标样surfactin非常相近的组分。通过 ESIMS分析检测到Bacillus subtilis fmbJ抗菌物质含有分子量与fengicin相同的m/z1449.9、m/z1463.8、m/z1477.8、m/z1491.9和m/z1505.9五种同系物，和分子量与surfactin相同的m/z1008.8、m/z1022.8和m/z1036.8三种同系物。

摘要:采用均匀设计和单因子试验法，系统考察了圆红冬孢酵母菌(Rhodosporidium toruloides)在不同碳氮比条件下产油发酵情况以及添加无机盐对产油发酵的影响，通过均匀设计软件对二次多项回归方程求解及单因素分析得知在培养基组成分别为：葡萄糖 70g/L，硫酸铵 0.1g/L，酵母粉 0.75g/L，磷酸二氢钾 0.4g/L，七水硫酸镁 1.5g/L，初始pH 6.0，在灭菌(121℃ 15min)后添加ZnSO₄ 1.91×10^-6mmol/L、CaCl₂ 1.50mmol/L、MnCl₂ 1.22×10^-4mmol/L、CuSO₄ 1.00×10^-4mmol/L。发酵摇瓶装液量为250mL三角瓶装培养基50mL，接种量为10%(种龄28h)。在上述条件下，30℃振荡(200r/min)培养120h，所得菌体油脂含量高达76.1%，脂肪得率系数可达22.7。

摘要:将SRAP与ISSR 2种分子标记技术应用于8种甘蓝类植物（Brassica oleracea L.）的种子鉴别中。先以甘蓝（Brassica oleracea var. capitata）基因组DNA为模板，通过对SRAP、ISSR反应体系中各影响因素的逐一筛选，优化了甘蓝类植物SRAP、ISSR反应体系。进而采用30个SRAP引物组合和15个ISSR引物对白甘蓝、皱叶甘蓝、红甘蓝、羽衣甘蓝、花椰菜、青花菜、抱子甘蓝、球茎甘蓝的基因组DNA进行了PCR扩增，结果表明：M3E5与M4E5两个SRAP引物组合可以在8种甘蓝类植物之间显示较高的多态性；844和888两个ISSR引物也可在8种甘蓝类植物之间产生很好的多态，特别是844引物单独应用即可区分所有材料。

摘要:环氧黄体酮羟化产物是多种甾体激素药物的中间体，其11-羟化过程利用犁头霉（Absidia coerulea）所得转化率远高于其他菌株。采用拟结晶投料方式，将环氧黄体酮颗粒细化后加一定量水，β-环糊精，吐温80，超声波乳化后投入发酵液中。这种投料方式可避免传统投料中使用有机溶剂毒害细胞的缺点，更利于底物转化。采用多层前传神经网络建立培养基和投料成分配比与转化率关系模型，并将具有全局寻优性能的粒子群优化算法（PSO）应用于培养基和投料成分配比的优化，收敛速度快，效果好。在优化的操作条件下，摇瓶中投料浓度为10g/L时底物转化率达到87.5%，在3.7L发酵罐中投料浓度提高到20g/L时底物转化率仍高达86.6%。

摘要:ATPNAD激酶利用ATP，催化NAD磷酸化，生成NADP，而ATP-NADH激酶则催化NAD和NADH发生磷酸化。酿酒酵母细胞内存在三种NAD激酶同功酶：Utr1p、Pos5p和Yef1p，它们都是ATPNADH激酶，对细胞内NADP(H)的供应起到重要作用。酵母偶数位双键不饱和脂肪酸的β-氧化依赖于过氧化物酶体基质内的NADPH。通过构建NAD激酶基因的单、双基因缺失株，并验证它们和对照菌株对不饱和脂肪酸的氧化、利用能力，证实NAD激酶同功酶，尤其是Pos5p，对过氧化物酶体基质内NADP(H)的供应起着重要作用，并推测NADP可以从过氧化物酶体膜外转运至过氧化物酶体基质内。

摘要:与传统的单层平面培养相比，细胞三维培养可更好地模拟生物体内细胞的生长状态和微环境。以Cytodex3微载体为支持物，利用旋转式细胞培养系统（RCCS）模拟微重力条件，悬浮培养法构建大鼠WBF344细胞微重力三维培养模型。并通过细胞计数、光学显微镜、透射电镜、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和流式细胞术等方法分析了细胞增殖、显微结构、粘附分子及钙粘蛋白（E-cadherin）表达情况。结果表明，模拟微重力三维培养条件下WBF344细胞增殖块，呈紧密多层排列、可见丰富的微绒毛和线粒体、胞间有桥粒和紧密连接形成，细胞粘着力加强、表现出良好的三维生长特征；与静置三维培养相比，纤粘连蛋白（Fn）mRNA表达呈上调趋势，细胞内Ecadherin表达量增加，这可能是微重力效应下细胞粘附力增强的部分机制。该培养体系可能有利于细胞之间，细胞与胞外基质之间相互作用及其作用机制的研究。

摘要:提取猪卵巢总RNA，用RT-PCR方法克隆了猪FollistatincDNA的完整开放阅读框，长1038 bp。将Follistatin cDNA连接到原核表达载体pGEX-4T-3中，转化大肠杆菌BL21(DE3), 以IPTG诱导, 进行了GST-FS融合蛋白表达。用SDS-PAGE和Western杂交检测，结果显示在63kD处有特异性表达蛋白。

摘要:酰胺酶是一种重要的工业酶。利用生物信息学手段，在和已知酰胺酶基因序列分析比对的基础上，首次从Ncordia sp. YS-2002中成功地克隆得到酰胺酶基因ami，并对其基因序列及氨基酸序列的性质进行了分析。结果表明，所得酰胺酶基因ami片段大小共为1446bp，由启动子区、阅读框和回文结构终止区三部分构成。序列分析和进化树分析表明，Ncordia sp. YS-2002 酰胺酶是一种比较特殊的酰胺酶，不含大多数酰胺酶共同具有的保守区序列。进一步将酰胺酶基因连接到pET28a（+）上，转入大肠杆菌BL21(DE3)中筛选获得重组菌株PEAB。酶活测定结果表明：重组菌具有酰胺酶酶活，但较低，其原因可能是因为大量表达的产物主要以包涵体的形式存在。

摘要:昆虫细-杆状病毒系统是昆虫杀虫剂生产和医用外源基因表达的有效工具。昆虫细胞的无血清或低血清培养是十分必要的。从三种商业化的培养基TC-100、GRACE和IPL-41中筛选出了最适合棉铃虫细胞HzAm1生长的基础培养基TC-100。 以该培养基为基础，将血清用量从常用的10%降至1%，同时补加一定量的水解乳蛋白以及酵母提取物等，对棉铃虫细胞HzAm1进行驯化培养，效果良好。

摘要:对不同发育阶段五指山小型猪（WZSP）近交系的睾丸组织，采用不同的消化和培养方法进行了一系列的探索、研究。实验显示： 培养SSCs 的最佳时限为仔猪出生后1～20日龄；对不同日龄仔猪采用不同消化方法,以DMEM为基础培养液并添加不同成分，34℃，5％CO2培养箱中饱和湿度条件下培养，可获得较好的分离培养结果；原代SSCs在培养8d后，SSCs开始增殖，桑椹状的SSCs集落半悬浮隆突生长；SSCs集落AKP染色，细胞呈阳性反应；对SSCs细胞团在STO饲养层上进行传代培养，SSCs贴壁良好，培养4d左右大部分SSCs集落和单细胞消失；采用曲精细管组织贴壁培养法也同样获得桑椹状SSCs集落，细胞集落在培养5d后出现，半悬浮生长。此外，睾丸组织在4℃PBS液中存放24h后，仍可作为SSCs分离、培养的材料。结果表明：本研究初步掌握了WZSP近交系精原干细胞体外分离、培养的技术方法，为其进一步深入研究提供了技术方法和操作依据。