摘要:蛋白酶抑制剂广泛存在于生物体内，在许多生命活动过程中发挥必不可少的作用,特别是对蛋白酶活性进行精确调控。其中Kazal型蛋白酶抑制剂是最重要的、研究最为广泛的酶抑制剂之一，该类抑制剂一般由一个或几个结构域组成，每一个结构域具有保守的序列和分子构象，同时发现该类抑制剂与蛋白酶作用的结合部位高度易变，它们大多数暴露于与溶剂接触的环上，其中P1部位是抑制作用的关键部位，抑制剂的专一性由P1部位氨基酸残基的性质决定，其它残基取代结合部位残基对抑制剂－酶的结合常数有显著的影响。Laskowski算法可直接从Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂的序列推测其与6种丝氨酸蛋白酶之间的抑制常数（Ki）。目前在生物体内发现大量的Kazal型蛋白酶抑制剂，并证实其有重要的生物学功 能。

摘要:SARS-CoV S蛋白特异的单克隆抗体2C5具有病毒中和作用。以单克隆抗体2C5为筛选靶分子，筛选噬菌体展示随机7肽库。经三轮淘洗后随机挑选20个噬菌体克隆进行ELISA分析和序列测定。在10个ELISA OD值大于0.2的阳性噬菌体克隆中，有8个噬菌体克隆展示有共同的7肽序列TPEQQFT。展示有该序列的噬菌体克隆能竞争抑制SARS-CoV S蛋白抗原与单抗2C5的结合。结果表明TPEQQFT为单克隆抗体2C5的模拟表位。该结果可对进一步研究S蛋白结构与功能和设计SARS疫苗有一定的参考意义。

摘要:为了进一步认识家蚕浓核病毒_BmDNV-3（中国株）VD₁基因组的结构和功能，VD1被分离、纯化、克隆到pUC119载体上，完成了基因组全序列的测定。序列分析显示VD₁基因组全长为6543个核苷酸，末端拥有224个核苷酸反向重复序列（ITRs）。VD₁基因组正链含有3个大的开放阅读框（ORF1-3），负链含有1个大的开放阅读框（ORF4）。比较BmDNV-3的 VD₁和BmDNV2 (Yamanashi isolate) 的VD₁基因组全序列，两者同源性为98.4%，并且有107个碱基的替代和1个碱基插入，氨基酸突变集中在VD₁ ORF3和VD₁ORF4。Northern杂交结果显示：VD₁的左边正链上有1.1kb和1.5kb两个转录本,右边的负链上有一个3.3kb转录本。3′和5′-RACE结果显示：1.1kb转录本开始于nt 290，结束于nt 1437；1.5kb转录本开始于nt 1423，结束于nt 2931；3.3kb转录本开始于nt 6287，结束于nt 2922。 正链上15kb转录本和负链上3.3kb转录本拥有10个核苷酸的3′端的共同序列。研究结果显示该病毒基因转录与已报道的其它浓核病毒存在较大的差异性。

摘要:为了提高腺病毒载体用于基因治疗的靶向性，采用PCR和体外连接的方法构建了柯萨奇病毒-腺病毒受体（Coxsackie virus_Adenovirus Receptor）胞外段sCAR和表皮生长因子（Epidermal growth factor）EGF融合基因，然后将此融合基因插入穿梭质粒pDC315。利用Ad-MAX腺病毒系统，将重组质粒pDC315_sCAR_EGF与腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE13cre共同转染AD-293细胞，成功包装出一种复制缺陷型腺病毒Ad5-CMV-sCAR-EGF。经PCR鉴定该病毒含有sCAR-EGF融合基因片段，Western blotting证实该病毒能表达sCAR-EGF融合蛋白。体外试验证实该病毒感染细胞所产生的融合蛋白能够引导携带报告基因的腺病毒Ad5-CMV-luc高水平感染肿瘤细胞,为高水平表达EGFR的肿瘤的靶向性基因治疗提供了新的手段。

摘要:采用RT－PCR技术分别扩增了鹅源高产禽流感病毒的6条内部基因片段，近期分离的H5N1亚型禽流感病毒的血凝素基因以及N3亚型参考毒株的神经氨酸酶基因，分别构建了8个基因的转录与表达载体，利用反向遗传学技术拯救出了全部基因都源于禽源的重组流感病毒疫苗株rH5N3。通过对血凝素蛋白HA1和HA2连接肽处的5个碱性氨基酸(R-R-R-K-K)基因缺失与修饰，从而消除了病毒基因的毒力相关序列,拯救的rH5N3疫苗株对鸡和鸡胚均无致病性，病毒在鸡胚尿囊液和细胞培养上清的HA效价得到极大提高，分别为1：2048和1：512。制备的禽流感疫苗免疫动物后4～5周即可诱导产生高效价的HI抗体，鸡免疫后18周依然保持高水平的HI抗体。重组疫苗不论是对于国内早期分离的禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96还是近期分离的A/Goose/HLJ/QFY/04都能够产生完全的免疫保护作用,免疫鸡攻毒后不发病、不排毒、不死亡。带有N3鉴别诊断标记禽流感疫苗株的研制为H5N1高致病性禽流感的防治提供了新的技术保障。

摘要:利用噬菌体抗体库筛选技术获得抗雄性特异性抗原的噬菌体Fab抗体，首次采用雄鼠脾细胞对鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体库进行3轮亲和富集和2轮雌鼠脾细胞吸附，对筛选后特异性噬菌体Fab抗体进行ELISA分析，重组率鉴定及基因测序分析。结果显示，5次筛选后的15个菌落中有9个能产生抗雄性特异性抗原特异性噬菌体抗体，噬菌体Fab抗体的基因重组率为60%，E5克隆的重链、轻链可变区序列分别属于V-H1和VκⅣ基因家族，这为挑选出高亲和力的抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体奠定了实验基础，将推进雄性特异性抗原及其抗体的研究进程，并为性别控制研究开创新途径。

摘要:利用毕赤酵母系统对O型口蹄疫病毒VP1基因与结核杆菌HSP70基因进行融合表达，并检测此融合蛋白对小鼠细胞免疫和体液免疫的影响。将人工合成的O型口蹄疫病毒VP1基因与结核杆菌HSP70基因克隆入酵母表达载体pPICZαA中，以电穿孔法转化酵母菌X_33，用Zeocin+YPDS平板筛选重组子，经甲醇诱导表达后，SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物。以皮下接种的方式给小鼠进行3次免疫，同时设两组对照，分别免疫PBS和常规灭活疫苗，然后通过MTT法和ELISA分别检测淋巴细胞的增殖情况和抗体水平。结果表明融合蛋白既能诱导细胞免疫应答又能诱导体液免疫应答，其诱导产生的抗体水平略低于常规灭活疫苗，而细胞免疫水平则高于后者。

摘要:通过PCR从三黄肉鸡的肝脏基因组中扩增了鸡α干扰素 (ChIFN-α)全长基因。序列分析表明ChIFN-α基因全长582bp，亚克隆其成熟蛋白编码基因(489bp)，利用基因重组技术构建了E.coli/pET-28a(+)-IFNα，使IFN-α置于pET-28a的T7启动子下游并同6×His(多聚组氨酸标签)_Tag融合。经酶切鉴定，DNA测序证实重组质粒构建正确；将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达，SDS-PAGE，Western_blot分析证实表达出22kD左右的融合蛋白，表达的蛋白以不溶性的包涵体形式存在并且具有良好的免疫学活性。提纯的包涵体纯度可达70%以上，用镍亲和层析方法纯化蛋白则可达到95%。经透析复性后的蛋白在鸡胚成纤维细胞上能够抑制H9N2禽流感病毒的复制。鸡胚试验中重组干扰素抗病毒效果好：在H9N2禽流感病毒攻毒组中，能保护鸡胚并使其孵出率达到100%的重组干扰素最小蛋白含量为2μg；重组干扰素对新城疫病毒复制也有一定的抑制能力，延迟该病毒复制时间为12h至48h；雏鸡试验表明重组干扰素也能较好地抵抗H9N2禽流感病毒对雏鸡的感染。两组试验均表明，亲和层析纯化蛋白是包涵体蛋白活性的20倍左右。

摘要:在植物转基因植株产生过程中，对转化细胞进行抗性筛选是通用程序，转化细胞的抗性一般是抗生素抗性或除草剂抗性，将赋予转化细胞抗性的选择标记基因删除是提高转基因植物生物安全性的重要措施。来自于啤酒酵母的FLP/frt位点特异性重组系统可有效删除同向定点重组位点frt之间的基因。通过多步骤重组，建立了可在植物中广泛应用的FLP/frt位点特异性重组系统。该系统包括含有frt位点的植物表达载体pCAMBIA1300-betA-frt-als-frt和含有由热诱导启动子hsp启动的FLP重组酶基因的植物表达载体pCAMBIA1300-hsp-FLP-hpt。利用二次转化的方式将二者先后转入烟草植株，热激处理后，热诱导型启动子hsp调控的重组酶FLP基因的表达催化位于选择标记基因als两侧同向frt位点间的重组反应，有效地删除了选择标记基因als。41%的经热激处理的二次转化植株发生了选择标记基因的删除，表明该系统在获得无选择标记基因的转基因植株中有很好的应用价值。

摘要:以一个与甘蓝显性核不育相关的差异表达片段的序列为信息探针，通过在NCBI与TAIR网站数据库中进行同源EST序列搜索，经人工拼接、RT-PCR、PCR 克隆与序列分析，获得了青花菜脱氢抗坏血酸还原酶DHAR dehydroascorbate reductase 基因的 cDNA 与 DNA 全长序列，命名为BoDHAR。并利用双链接头介导 PCR 的染色体步行技术（genome walking）克隆了其上游 644bp 的5′端序列。所获的BoDHAR基因全长 1486bp，存在两个内含子，DNA 编码区序列633bp，编码210个氨基酸；序列分析表明：BoDHAR与同源基因AT1G195701cDNA 序列有 82.3% 的一致性，推导的氨基酸序列有 79.6% 的一致性；编码的水溶性蛋白存在多个磷酸化位点；5′端上游区存在明显的转录调控序列。半定量RT-PCR结果表明：BoDHAR 在可育系花蕾中的表达量明显高于不育系花蕾，在花药中的表达明显高于其它部位。

摘要:nsdA基因是在天蓝色链霉菌中发现的抗生素合成负调控基因。以nsdA基因片段为探针，通过Southern杂交发现nsdA存在于多种链霉菌中。根据天蓝色链霉菌和阿维链霉菌的nsdA序列设计PCR引物，扩增多种链霉菌中nsdA基因并测序。发现在不同链霉菌中nsdA基因的相似性高达77%～100%。其中变铅青链霉菌与天蓝色链霉菌A3(2)的nsdA序列100%一致。变铅青链霉菌通常不合成放线紫红素，中断nsdA获得的突变菌株WQ2能够合成放线紫红素；在WQ2中重新引入野生型nsdA，又失去产抗生素能力。表明nsdA的中断可以激活变铅青链霉菌中沉默的放线紫红素生物合成基因簇的表达；nsdA的广泛存在及其序列高度保守则提示可以尝试用于这些菌种的抗生素高产育种。

摘要:ω-3多不饱和脂肪酸（ω-3 PUFAs）是一类被广泛研究和关注的脂肪酸，对人类及其他哺乳动物的正常发育和保持良好的健康状况极其重要，并且对于人类的多种疾病的预防和治疗亦有着明显的作用。在人和哺乳动物体内，ω-3 PUFAs的含量与ω-6 PUFAs（其代谢方式和功能与前者不同，通常其作用也相反）相比很低。而对于人体，无论ω-3 PUFAs的过低还是ω-6 PUFAs的过高都会带来极为不利的影响。所以人们一直在努力寻求提高人体中ω-3 PUFAs含量的途径或者大量生产ω-PUFAs的方法。本研究经过密码子优化后，用化学合成的方法获得了C.briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1，并构建了哺乳动物细胞表达载体pcDNA31-sFat1-EGFP，通过脂质体转染了CHO细胞系并对其进行抗性筛选获得稳定转染细胞株。对稳定转染sFat-1细胞株的RT-PCR分析及脂肪酸组成的GC-MS分析表明，sFat1基因完全能够在CHO细胞中表达和发挥其ω-3去饱和酶的作用，即促使ω-6系列不饱和脂肪酸转变为相应的ω-3系列不饱和脂肪酸（从十八碳到二十二碳）。Ω-6不饱和脂肪酸总量从48.97%下降到35.29%，而ω-3不饱和脂肪酸总量则相应地从7.86%上升到24.02%。Ω-6多不饱和脂肪酸和ω-3多不饱和脂肪酸的比值从正常细胞中的6.23下降到转染细胞中的1.47。这说明C.briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1的合成是成功的，试验所获得的结果为今后的进一步的研究或应用其大量生产ω-3PUFAs奠定了基础。

摘要:利用RT-PCR方法从PHA活化的人外周血单个核细胞(PBMCs)中克隆hIL-17F基因，亚克隆至逆转录病毒载体pSIV-1，与辅助病毒载体pHIT456和pHIT60脂质体法共转染293T包装细胞，获得的成熟重组逆转录病毒（RV-hIL-_17F）再感染SMMC-7721人肝癌细胞，并经G418筛选建立hIL-17F转基因肝癌细胞。PCR、RT-PCR和Western blot结果表明hIL-17F基因在肝癌细胞中能成功整合、转录和表达。MTT和FCM结果表明hIL-17F不能改变SMMC-7721肝癌细胞的增殖活力和细胞周期，但ELISA结果表明其能明显下调肝癌细胞IL-6、IL-8和VEGF的表达。转基因肝癌细胞rhIL-17F表达上清具有抑制ECV304人脐静脉内皮细胞生长的作用。裸鼠皮下成瘤试验结果表明hIL-17F转基因肝癌细胞裸鼠致瘤能力明显减弱，VEGF和CD34表达降低，血管形成显著减少。hIL-17F可通过减少肿瘤血管形成显著抑制裸鼠人肝癌移植瘤的生长，为其进一步开展肿瘤血管靶向基因治疗和开发抗血管新药提供了一定的实验依据。

摘要:根据NCBI中公布的人瘦素cDNA序列，设计并合成了6个89bp 左右的DNA 小片段,经重叠延伸PCR 扩增获得464bp的rhLep的完整基因片段。构建pET22b(+)/rhLep表达载体，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达。目的蛋白以包涵体的形式表达, 表达量占菌体总蛋白的50%以上。表达产物用Ni²⁺亲和层析柱纯化, SDS-PAGE结果表明,含6×His标签的目的蛋白的相对分子量约16kD。MTT比色法实验显示，当低剂量（10～30ng/mL）时，rhLep具有促进内皮细胞生长的作用；在高剂量（50～225ng/mL）时，rhLep具有杀伤人内皮细胞的活性。其最大杀伤率达到98.8%。吖啶橙荧光染色观察到高剂量rhLep对人内皮细胞有明显的凋亡作用。以上工作为进一步了解瘦素的体内体外生物活性奠定了基础。

摘要:在掌握小鼠ICSI技术的基础上，进行了ICSI技术生产转基因小鼠的研究。来自成年KM小鼠附睾尾的精子，使用未加抗冻剂的HEPESCZB溶液，在液氮中冻融1次后，用于本实验。解冻精子与DNA混匀1 min后，精子头被显微注射到B6D2F1小鼠成熟卵母细胞质中。精子头与pEGFPN1环状DNA共注射生产的ICSI受精卵，在CZB溶液中培养至囊胚期时，39.1% (9/23)的囊胚表达GFP基因。精子注射后6h，直接移植ICSI受精卵后，7只妊娠受体一共产仔30只，效率为23.8% (30/126)。 Southern blot分析其中16只小鼠发现，3只（18.8%）转基因小鼠同时整合了GFP和Neomycin基因，它们全部来自精子和线性DNA混合的实验组（阳性效率为33.3%，3/9），相反，精子与环状质粒DNA共注射生产的7只ICSI后代中，没有检测到外源基因。 转基因小鼠整合的外源基因能够传递给它们后代。结果说明，利用ICSI技术可以高效地生产转基因小鼠，宿主基因组可能更容易整合线性化的外源基因。

摘要:对20余种细菌16S rDNAs进行多序列比对与进化树分析，设计铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa, PA）荧光定量PCR（fluorescence quantitative PCR，FQPCR）特异性引物。提取PA基因组DNA，以特异性引物扩增16S rDNA靶片段，并构建重组质粒pMDTPfr。将梯度稀释的pMDT-Pfr质粒作为模板，用于建立定量标准曲线。以SYBR Green I荧光染料建立20μL反应体系，对不同浓度的PA DNA样品进行FQ-PCR检测。同时，以金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、福氏志贺菌、变形杆菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌和结核杆菌的基因组DNA作阴性对照，验证FQ-PCR方法检测PA的特异性。结果显示，设计的FQ-PCR引物的靶向序列，仅对PA 16S rDNA有高度同源性；FQ-PCR方法检测PA，其灵敏度达3.6pg/μL的基因组DNA或（2.1×10³ ± 3.1×10²）拷贝/μL的16S rDNA基因，并且具有很强的特异性；从细菌DNA提取到FQ-PCR检测，可在2h左右完成PA鉴定。较传统的培养鉴定法而言，以16S rDNA作为FQ-PCR靶基因快速检测PA，具有很好的研究价值与应用前景。

摘要:为寻找一种简单、经济、有效的DNA递送系统用于基因转染和基因治疗，制备了表面电荷为正电的纳米HAP，与表面电荷为负电的DNA结合形成DNA-HAP复合物，采用逆向蒸发法,用卵磷脂、DOPE和胆固醇制备成脂质体包封DNA-HAP复合物形成脂质HAP-DNA复合体, 脂质体和HAP对照，对所形成的脂质HAP-DNA复合体（LHD）的特性、包封率、转染Hela细胞的效果进行初步检测研究。所获得的脂质HAP-DNA复合体呈球形、平均粒径为643nm;平均包封率达11.67%,为中性脂质体;能有效转染真核细胞。该方法可作为提高基因转染效果的简单、经济、有效的手段之一，也为进一步提高非病毒载体的转染效率提供了一个思路。

摘要:利用紫花曼陀罗细胞悬浮培养转化外源对羟基苯甲醛合成天麻素，并应用多种色谱技术进行分离纯化，根据转化产物的理化性质和光谱数据分析鉴定结构。实验表明，紫花曼陀罗细胞成功将对羟基苯甲醛转化为天麻素（Ⅱ），同时也得到了由对羟基苯甲醛生成天麻素的转化中间体对羟基苯甲醇（Ⅰ）。在培养基中添加0.1mg/L的水杨酸能显著提高细胞对外源对羟基苯甲醛的糖基化率，而保持气升式发酵罐（25L）罐内压力为低压（0.001MPa）也能提高细胞对外源对羟基苯甲醛的糖基化率。实验证明，紫花曼陀罗细胞悬浮培养能有效转化对羟基苯甲醛合成天麻素。

摘要:通过色差筛选法建立了一个相对均一的葡萄细胞悬浮系E，其细胞团较小，在长期继代培养过程中花青素合成能力的变异系数为8.7%，重复摇瓶实验的变异系数为5%。以E为实验材料进行的各组前体饲喂、诱导子添加、光照等联合作用实验，其生物量和花青素合成的变异系数均可控制在12%以内，充分说明了培养体系的均一性对维持稳定生产的重要性；黑暗条件下添加30μmol/L苯丙氨酸（Phe）和218μmol/L茉莉酸甲酯（MeJA）可使单位细胞花青素含量达到对照组的5.89倍，花青素产量为对照组的4.30倍，且连续5次继代培养过程中生物量和花青素合成的变异系数均比对照组降低

摘要:大肠杆菌高密度发酵表达肠激酶轻链融合蛋白DsbA-rEK_L，主要以包涵体形式存在。包涵体经4mol/L尿素和 0.5% Triton X100洗涤，以6mol/L盐酸胍、100mmol/L DTT溶解，在胱氨酸存在下，以脉冲加样方式复性。融合蛋白复性在6mmol/L胱氨酸存在下、脉冲加量0.03mg/mL和复性终蛋白浓度0.3mg/mL为最佳复性方案。 复性的融合蛋白加2mmol/L CaCL2后快速自切。经IDASepharose及Qsepharose 纯化，rEKL纯度可达95%以上，可高效酶切重组瑞特普酶融合蛋白Trx-rPA。实现了大规模生产rEK_L，每升发酵液经复性及纯化后，可得rEK_L 60mg/L以上，使以融合蛋白表达rPA等药用蛋白成为现实。

摘要:模拟现有酒精发酵行业普遍采用的多级发酵罐串联系统，建立了一套由三级串联操作的搅拌式发酵罐和两个沉降罐组成的反应器系统，以脱胚脱皮玉米粉双酶法制备的糖化液为发酵底物，培养基初始还原糖浓度为220g/L，添加(NH₄)₂HPO₄ 1.5g/L和KH₂PO₄ 2.5g/L，以0.057h^-1的恒定稀释速率流加，将自沉降浓缩后的酵母乳先后经活化和不活化两种方式处理并循环至第一级发酵罐，系统在两种操作条件下分别达到了拟稳态。实验结果表明：活化处理对改善发酵工艺技术指标方面发挥了显著的作用，发酵终点乙醇浓度达到101g/L，还原糖和残总糖分别在3.2和7.7g/L左右，发酵系统的设备生产强度指标为5.77g/(L·h)，与无酵母回用的搅拌式反应器系统中自絮凝颗粒酵母乙醇发酵工艺相比，提高了70%。

摘要:微藻光生物反应器具有脱除空气中CO₂能力。从光生物反应器构型、进气流速、混合传质，及微藻光合/呼吸速率等方面，探讨气升式光生物反应器脱除空气中CO₂效果，提出了时间离散化和集中参数法两种分析方法。运用集中参数法建立了气升式柱型光生物反应器脱除CO₂的数学模型，模拟了藻液中溶氧浓度（DO）、pH随时间的变化情况，及进气CO₂浓度影响，预测并验证了光照条件下出气CO₂、O2浓度的变化趋势。模拟结果和实验数据基本吻合，所提出的模型对光生物反应器的优化设计、微藻的高密度培养，及CO2去除能力预测具有参考意义。

摘要:应用酸解法对黄花蒿（Artemisia annua L.）内生胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）菌丝体进行提取，在黄花蒿发根培养系统中比较了各制备提取物的青蒿素诱导活性。活性提取物经过Sephadex G25层析后，部分纯化的内生菌寡糖提取物（MW<2500）可显著促进发根青蒿素的合成，培养23d的发根经诱导子（0.4mg/mL）处理4d后，青蒿素产量可达13.51mg/L，比同期对照产量提高51.63%，诱导作用与诱导子浓度、作用时间相关。内生菌寡糖诱导子的制备和使用，在青蒿素生物技术生产研究中为首次应用。

摘要:维生素E是一类人体所必需的脂溶性的维生素，具有重要的生理功能。Γ-生育酚甲基转移酶（γTMT）是维生素E生物合成途径中的关键酶之一，催化γ、δ-生育酚甲基化，生成α、β-生育酚。从拟南芥中分离了γ-生育酚甲基转移酶基因1552bp的启动子序列，构建了含有该启动子和GUS报告基因的植物表达载体，通过农杆菌介导转化拟南芥，获得了转基因植株。GUS组织化学染色结果表明，在γ-TMT启动子的驱动下，报告基因GUS在拟南芥的叶、茎以及花均有表达，且在茎尖、雄蕊和幼叶中表达最强，而在根、种子和种荚中则没有检测到GUS基因的表达，表明γ-TMT基因可能仅在拟南芥某些组织中特异性高表达。

摘要:研究了同步厌氧生物脱氮除硫工艺的性能。该工艺具有很高的硫化物和硝酸盐转化潜能，稳态运行时的容积硫化物去除率和容积硝酸盐去除率分别为3.73kg/(m³·d)和0.80kg/(m³·d)；能够耐受580mg/L的硫化物浓度和110mg/L的硝酸盐浓度，适宜浓度分别为280mg/L和67.5mg/L；能够耐受较高的水力负荷，适宜的水力停留时间为0.13d，反应器运行性能会因缩短水力停留时间而突发性恶化。

摘要:从20头供体母猪获得的291枚可用胚胎（囊胚/桑葚胚），采用二步法开放式拉长细管（OPS, open pulled straw）玻璃化冷冻技术进行保存，即胚胎首先在冷冻液I（TCM199+20%FBS+10%EG+10%DMSO）中平衡3min，然后立即转入冷冻液II（TCM199+20%FBS+20%EG+20%DMSO+0.4mol/L SUC）中并在1min内装管，直接投入液氮保存；3个月后解冻移植给8头受体母猪，其中1头怀孕产仔（8头活仔），在我国首次获得猪胚胎超低温（-196℃）冷冻后代。

摘要:分别以0μmol/L (对照组)、10μmol/L (低剂量组)，20μmol/ L (中等剂量组)，50μmol/L, 100μmol/ L (高剂量组)的白藜芦醇（Resveratrol，RES）处理体外培养1～3日龄健康仔猪前体脂肪细胞，采用MTT比色法检测细胞活性及增殖状况；油红O染色化学比色法定量分析细胞内脂肪生成及细胞分化程度；RT-PCR法分析Sirt1 (sirtuin1) mRNA 表达情况,探讨Sirt1对猪前体脂肪细胞增殖分化的影响及其分子机制。结果表明，脂肪细胞经RES处理后,各组MTT和油红O染色测得的光密度值(OD值)均低于对照组, 50μmol/L, 100μmol/L组在96～120h作用极显著(P<0.01)，与中低剂量组差异显著(P<0.05)；以20μmol/L，100μmol/L RES处理细胞后，Sirt1 mRNA表达量随细胞分化的进行而逐渐升高，100μmol/L组均显著高于对照组和20μmol/L组(P<0.05)。RES对猪前体脂肪细胞增殖分化均有一定抑制作用,高剂量RES (50μmol/L和 100μmol/L)可显著减少细胞内脂肪的合成、抑制脂肪细胞增殖与分化, Sirt1 mRNA表达量显著升高可能是RES抑制细胞分化的重要原因之一。

摘要:将亲和素共价固定在表面改性后的硅片上，通过亲和素与生物素相互作用将生物素标记的噬菌体抗体GP3固定在亲和素膜层表面，当含有M13KO7噬菌体的样品经过抗体表面时，通过噬菌体与抗体之间的相互作用噬菌体就会被抗体捕获，生物学信号可以通过芯片上的膜层厚度变化表现出来，这种膜层厚度变化可以被椭偏生物传感器技术识别。结果表明，GP3抗体在芯片表面形成了饱和的抗体膜层，厚度为6.9nm；M13KO7噬菌体与芯片上固定的抗体会发生特异性相互作用，噬菌体被抗体捕获后形成的复合物膜层厚度为17.5nm，并且随着噬菌体浓度升高膜层厚度增加，检测含有M13KO7噬菌体的样品灵敏度为10⁹pfu/mL。与其它研究病毒与抗体相互作用方法相比光学蛋白芯片技术具有简便快捷、无需标记待检样品和结果直观等优点，为研究病毒与其抗体相互作用以及疾病早期临床诊断提供了一个新的方法。

摘要:AFLP标记技术自诞生以来，由于集成高效性、高通量、无需知道序列信息等诸多优点而在分子生物学研究中得以广泛应用。近年来，研究人员对该技术进行了不断的优化和完善，并由之衍生出多种相关技术，不仅能区分纯合子和杂合子，还能够将感兴趣AFLP条带进行位点特异性标记的高效转化，从而有利于进行大规模单位点检测和基因克隆，检测技术更趋高效。重点评述近年来“常规”AFLP技术向更高通量、更加高效和信息完全AFLP技术的转化和发展，了解这些变革对高效利用AFLP技术实现研究目标具有重要的意义。