摘要:生物制品是一类预防、诊断和治疗疫病的特殊制剂。生物制品的研发是融合微生物学、免疫学、分子生物学、细胞学、基因工程及发酵工艺等学科知识的综合技术体现。生物制品产业是整个生物技术产业的核心和热点。近年来，我国在生物制品研发方面取得了较大进步，为促进我国生物制品研究的交流，本期“生物制品”专刊集中展现了我国生物制品研究人员在预防生物制品、诊断制品、治疗生物制品领域所取得的最新进展。

摘要:干扰素反应在脊椎动物抵抗病毒感染过程中发挥重要作用。近年来，鱼类干扰素抗病毒免疫反应的研究取得了重要进展，不仅克隆鉴定了一系列鱼类干扰素系统基因，而且通过功能研究揭示了鱼类具有类似于高等哺乳类的干扰素反应。但是，鱼类干扰素反应及分子调控具有自身特点。以下综述了最近这方面的研究结果。

摘要:基因工程技术已经在大分子多肽表达上得到了广泛的应用。但是小分子多肽不稳定且易降解，使其表达后很难检测和纯化。多拷贝策略是将目的基因或是含有目的基因的表达盒首尾串联，而串联构建多拷贝表达载体是目前解决小分子多肽表达量少的有效方法。总结和比较非对称粘性末端互补法、接头连接法、同尾酶法和表达盒串联法在多肽表达方面的应用情况，为小分子多肽的体外表达提供方法和思路。

摘要:抗体是高等动物特异性免疫应答反应所产生的免疫球蛋白，负责特异抗原的识别和清除。抗体不仅是机体抵抗病原体入侵的强大武器，也是基础科学研究中用于特异性分子识别的专用工具。抗体分子的多样性导致了抗体库概念的产生，让我们认识到每个高等生物个体都是一个天然的抗体库。在后基因组时代，为了适应各种“组学”研究，特别是为了蛋白质组学研究的高通量技术需求，在噬菌体展示技术平台的基础上，构建了各种基因工程抗体库和抗体替代物库。但现在越来越多的其他展示技术如核糖体展示、mRNA展示等体外展示技术也被用于抗体库的研究，而且表现出了相比于噬菌体展示更多的优势。以下根据目前最新发表的有关综述文章和研究论文，对抗体库的起源、发展及应用前景给予粗略的描述，为读者提供最新的参考文献，通过分析目前存在的问题，论述了抗体库技术的应用前景和发展趋势。

摘要:核酸适配体指利用指数富集配体系统进化技术筛选出的寡聚核苷酸片段，它可以特异性地识别靶标并与之结合，已经广泛应用于基础研究、临床诊断、纳米技术等。以下综述了适配体在微生物学方面的应用。

摘要:热休克蛋白Gp96属于HSP90家族，是内质网中最丰富的蛋白质之一，在细胞内发挥着分子伴侣的作用。在天然免疫中，Gp96则通过与Toll样受体等相互作用刺激抗原呈递细胞 (如DC等) 产生各种细胞因子激活免疫系统；而在获得性免疫中，Gp96-抗原肽复合物通过抗原交叉将抗原肽呈递给MHC-I类分子，诱发机体抗原特异性细胞毒T细胞免疫应答，清除病原物感染和肿瘤；近年来的研究还发现Gp96具有免疫佐剂的功能。以下从Gp96的生物学特性、免疫学机制以及其在抗病原感染和抗肿瘤免疫中的应用等方面做一小结，为设计以Gp96-抗原肽为新一代疫苗的临床研究提供理论基础。

摘要:手足口病是由多种肠道病毒感染导致的一种急性儿科传染病。近年来，我国肠道病毒71型 (EV71) 手足口病发病率急剧上升，重症病例时有报道，严重威胁儿童健康。临床上对于重症手足口病的治疗缺乏有效手段，主要以对症治疗和支持疗法为主。静脉注射人免疫球蛋白由健康献血员血浆提取纯化而来，含有包括EV71在内的多种肠道病毒的中和抗体，可作为重症手足口病被动免疫和免疫调节的重要手段，值得关注。

摘要:可以稳定表达治疗基因而无明显不良反应的重组腺相关病毒 (rAAV) 载体被认为是最有发展前景的基因治疗载体。但如何建立可以有效去除rAAV载体内具有潜在致病危害的杂质、产品质量符合临床使用要求的纯化工艺是研究人员面临的巨大挑战。其中针对载体相关性杂质的纯化工艺尤为关键，因为该类杂质的性质与真正的rAAV载体极其相似，一旦存在便难以去除，且会引起严重不良反应。以下总结了该类杂质形成的过程及有别于rAAV载体的特点，并对可以防止其生成或将其与rAAV载体有效分离的技术手段进行了评价。

摘要:文中简述了罕见疾病的定义、发病原因、分类，总结了国内外罕见疾病研究和孤儿药物研发的现状，分析了生物技术的研究手段在罕见疾病药物研发方面的应用，进一步阐述了罕见疾病研究和孤儿药物开发的必要性和紧迫性，对推动科学技术的进步和人类健康事业的发展具有深远的意义。

摘要:血液制品特指血浆蛋白制品和相应的重组制品。根据临床应用的效能，血液制品可以分为白蛋白类、免疫球蛋白类、凝血因子类和微量蛋白制品等不同种类。血浆白蛋白制品是最早应用于战伤救治的血液制品，高纯白蛋白、重组白蛋白以及重组白蛋白融合药物的研发和上市开创了血液制品的新局面。肌肉注射用免疫球蛋白因其制备工艺相对简单，使用方便，价格低廉且不良反应可以接受而一直在临床实践中应用；静脉注射用免疫球蛋白随着新的适应症不断发现，其应用范围越来越广；皮下注射用免疫球蛋白的出现使免疫球蛋白的使用更加方便，已经成为静脉注射用免疫球蛋白安全有效的替代品；针对特定病原体的特异性免疫球蛋白在临床上更具有不可替代的作用。凝血因子和重组凝血因子类制品主要用于相应的先天性遗传性缺陷患者，纤维蛋白原、因子Ⅶ、因子Ⅷ、von Willebrand因子复合物、因子Ⅸ和凝血酶原复合物、因子Ⅺ、因子ⅩⅢ等制品的应用取得了良好的治疗效果。因子Ⅶa和活化凝血酶原复合物对于治疗产生凝血因子抑制物的血友病病人具有十分明显的效果。纤维蛋白原类制品和凝血酶在外科止血方面发挥着重要的作用。多种微量血浆蛋白制品已经上市，如蛋白C、抗凝血酶、α1-抗胰蛋白酶和组织纤溶酶原激活剂等。部分微量血浆蛋白制品也在研发和临床试验过程中，如C1-抑制剂、补体系统Ⅰ因子、α2-巨球蛋白、血清胆碱酯酶、铜蓝蛋白以及纤维结合蛋白等。尽管多种重组血浆蛋白制品已经上市，血浆来源的制品仍将具有其不可替代的特殊地位，血浆蛋白新品种的研发仍是热点。目前，我国血液制品的研发与国外存在着较大的差距，我国血液制品企业面临着机遇与挑战。

摘要:甲型流感病毒M2蛋白是一种具有离子通道功能的跨膜蛋白，其氨基酸序列非常保守，可用于流感通用疫苗的研究。为了构建可调控的稳定表达甲型流感病毒M2蛋白的哺乳动物细胞系，首先应用PCR方法从含有流感病毒PR8株第七节段全长基因的质粒中扩增得到M2基因。将该片段亚克隆到真核表达载体pcDNA5/FRT/TO上，用BamHⅠ和NotⅠ双酶切鉴定正确后将重组质粒与表达Flp重组酶的pOG44质粒共转染Flp-In T-REx-293细胞，使目的基因整合到宿主细胞染色体。筛选具有Hygromycin B抗性的细胞株。在该细胞的培养基中加入四环素以诱导目的基因表达，48 h后通过间接免疫荧光方法检测到M2蛋白的表达。共得到16株高表达M2蛋白的重组细胞株，这些细胞株在传10代后仍能稳定表达目的蛋白。未加四环素诱导的细胞没有检测到M2蛋白，说明四环素调控系统严格控制着目的基因的表达。今后，该细胞系可用于流感病毒M2蛋白的功能研究、流感候选疫苗的免疫学评价以及流感病毒减毒活疫苗的研制。

摘要:为了构建噬菌体展示Tat38-61(51N/55N) 碱性区突变体文库，进一步研究HIV-1 Tat38-61表位的分子进化筛选，采用含随机核苷酸序列的引物，通过Overlap PCR的方法获得51和55位氨基酸随机突变的全长Tat编码序列，再以此为模板PCR扩增出两端含有Xba I识别序列的Tat38-61突变体片段HIV-1 Tat38-61(51N/55N)，克隆至噬菌体展示载体pCANTAB5S上，转化大肠杆菌TG1，经M13K07辅助噬菌体拯救，构建噬菌体展示Tat38-61(51N/55N) 碱性区突变体文库。结果显示文库的库容量为5.0×106，滴度为2.65×1012 TU/mL，阳性克隆率为56.50％；序列分析显示文库中51、55位核苷酸与氨基酸均呈随机性分布，达到了对文库进行分子进化筛选的要求，为获得可用作疫苗候选物的新型Tat突变体奠定基础。

摘要:为获得具有抗血小板聚集作用的重组人纤溶酶原 (hPLG)，尝试了一种含有精-甘-天冬氨酰 (RGD) 三肽的hPLG K区缺失突变体 (RGD-hPLG-?K)。首先，从pDNR-LIB-HPLG中克隆出HPLG-?K。然后定点突变激活环内的Pro559为Asp559，形成RGD模序。构建的pPICZαA-RGD-HPLG-?K电转化巴斯德毕赤酵母GS115，甲醇诱导表达后可产生0.16 g/L培液的RGD-hPLG-?K，Ni-NTA层析后纯度可达90％以上；Western blotting证实所获RGD-hPLG-?K可与兔抗hPLG抗血清反应；其24 h尿激酶激活速率和纤溶活性与hPLG-?K无显著差别 (P=0.630，n=5)；经尿激酶激活后，RGD-hPLG-?K的血小板聚集抑制率 (21.8％±1.57％) 显著高于hPLG-?K (3.8％±0.33％) (P=0.000，n=5)。表明成功构建、表达了一种具有抗血小板聚集活性的hPLG突变体，为研究新型多功能溶栓药物奠定了基础。

摘要:DNA疫苗能够诱导机体产生特异的细胞免疫和体液免疫反应，在肿瘤和感染性疾病的疫苗开发中显示出巨大的潜能。以HIV-1核心蛋白P24为抗原基因，构建pVAX1-p24 DNA，经Western blotting和动物活体成像检测证明，pVAX1 DNA携带的外源基因可以在293T 细胞和小鼠肌肉组织有效表达。采用不同的免疫策略免疫BALB/c小鼠 (DNA/DNA，DNA/Protein)，实验结果表明：pVAX1-p24单独免疫BALB/c小鼠，可诱导明显的体液免疫及细胞免疫反应；pVAX1-p24与P24蛋白联合免疫诱导的体液免疫反应高于pVAX1-p24单独免疫，所获得的抗体滴度是单独免疫的7.3~8.0倍，但细胞免疫反应则不及单独免疫组。研究结果表明采取不同的免疫策略可以诱导产生不同的免疫反应，根据具体情况调整免疫策略将获得更好的免疫效果。这些研究为艾滋病疫苗的研发提供了实验依据。

摘要:炭疽病是由炭疽芽胞杆菌Bacillus anthracis引起的一种人畜共患传染病，严重影响着人类的健康。近年来在细菌疫苗的研究中发现一种特殊的现象：细菌被杀死后，体内的代谢活性却仍然维持 (Killed but metabolically active，KBMA)。此发现为炭疽新型疫苗候选株的研制提供了新思路。先通过同源重组的方法，利用pMAD质粒和Cre-loxP重组酶系统完成对缺失两个毒性大质粒的炭疽芽胞杆菌减毒株AP422的uvrAB基因的敲除，得到AP422△uvrAB菌株，然后通过光化学处理 (包括长波紫外光的照射和8-甲氧基补骨脂素处理)，使炭疽芽胞杆菌AP422△uvrAB失去繁殖能力。利用四氮唑化合物MTS检测其代谢活性，表明光化学处理杀死后的炭疽芽胞杆菌AP422△uvrAB在至少4 h内维持一个很高的代谢活性水平，即具备典型的KBMA特性。炭疽杆菌AP422△uvrAB的KBMA菌株的成功研制为我们提供了一种新型炭疽疫苗候选株。

摘要:旨在以乙肝病毒 (HBV) 的主要结构蛋白-表面蛋白 (HBsAg) 和核心蛋白 (HBcAg) 作为抗原设计DNA疫苗，研究热休克蛋白HSP70和gp96作为新型免疫佐剂增强疫苗的细胞免疫和体液免疫水平。利用酶联免疫斑点实验、流式细胞内因子染色、3H-TdR实验、酶联免疫吸附实验技术分析，结果显示HSP70和gp96可使疫苗的细胞免疫水平提高1~6倍，提高体液免疫水平20％~60％。研究结果为设计以HSP70和gp96作为免疫佐剂的新型乙肝治疗性疫苗提供了依据。

摘要:通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的狂犬病病毒抗体检测方法，对犬等动物免疫狂犬病疫苗后的抗体水平监测提供参考。用醋酸锌沉淀法沉淀狂犬病病毒CVS11，Sepharose 4FF进行层析纯化。用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金，标记纯化的狂犬病病毒，喷于试纸的结合释放垫 (金标垫)，将SPA (葡萄球菌表面A蛋白) 和纯化的兔抗狂犬病病毒IgG分别喷于试纸的T (检测线) 处和C (对照线) 处，组装试纸条。用制备的试纸条对261份犬血清进行检测，与快速荧光灶抑制试验 (RFFIT) 检测的结果一致；对已知效价的犬狂犬病毒中和抗体 (VNA) 大于0.5 IU，结果为阳性；对狂犬病病毒中和抗体 (VNA) 小于0.5 IU/mL的血清，结果为阴性。制备的狂犬病病毒抗体胶体金检测试纸检测犬血清抗体，具有特异、便捷、快速的特点，能够检测出狂犬病病毒中和抗体大于0.5 IU的血清，适用于临床犬血清抗体水平监测，具有良好的应用前景。

摘要:为建立H1亚型猪流感病毒抗体检测方法，扩增了H1N1亚型猪流感病毒流行株的血凝素基因HA1部分，构建原核表达载体pET30a-HA1，并转化大肠杆菌BL21表达重组蛋白。对重组蛋白包涵体进行变性、复性和Ni-NTA亲和层析纯化。以纯化后的蛋白作包被抗原，建立间接ELISA检测方法。利用该检测方法检测了2008?2009年采集的猪血清785份，阳性率为15.54％，不同省份的阳性率存在差异 (8％~47％)。以IDEXX相关试剂盒检测结果作为参照，该方法的诊断特异性达到91％，诊断敏感性达到95％。

摘要:为制备标定凝集试验用的牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品，采集4份田间自然感染牛布鲁氏菌病的阳性血清作为候选物，经过筛选后，选择了3#血清用于标准品制备。对该标准品进行了物理性状、无菌检验、真空度测定、剩余水分检验、均匀性检测和稳定性试验，检测结果均符合要求。以国际标准品为参比，测定了该标准品的RBT、SAT和CFT效价，结果分别为1∶160“+”、1∶2 400“++”、1∶800“++”，与协作标定结果完全一致。该标准品以国际标准品溯源的国际单位含量为4 000 IU/mL。

摘要:分离鉴定阴道弯曲乳酸杆菌并对其进行基因分型分析和产H2O2能力测定，初步筛选具有潜在防治女性生殖道感染的弯曲乳酸杆菌菌株。将健康妇女阴道分泌物接种到de Man，Rogosa and Sharpe (MRS) 培养基，分离培养乳酸杆菌。通过16S rRNA序列进行乳酸杆菌分类鉴定，重复序列片段PCR扩增方法进行弯曲乳酸杆菌的基因分型，并进一步采用pH直接测酸法和辣根过氧化物酶催化四甲基联苯胺与过氧化氢反应显色法检测了10株弯曲乳酸杆菌产酸和产H2O2能力。经过序列比对鉴定，共得到65株乳酸杆菌。其中，弯曲乳杆菌Lactobacillus crispatus 19株，詹氏乳杆菌Lactobacillus jensenii 17株，发酵乳杆菌Lactobacillus fermentum 12株；rep-PCR分型发现不同种类的乳酸杆菌和同一种弯曲乳酸杆菌均表现为不同的带型指纹图；10株弯曲乳酸杆菌均产酸，其中T22-3和T29-5两株弯曲乳酸杆菌产H2O2量最高。结果表明个体阴道内乳酸杆菌分布具有差异，弯曲乳酸杆菌具有种内多样性，产H2O2丰富的T22-3和T29-5两株弯曲乳酸杆菌有可能作为防治女性生殖道感染的有益菌株。