摘要:单克隆抗体是现代生命科学研究的重要工具，为许多领域的发展作出了不可估量的贡献。随着PCR技术和单克隆抗体技术的发展和成熟，单个B细胞抗体制备技术迅速兴起。该技术能够对单个的抗原特异性B细胞进行抗体基因的体外克隆和表达，保证了轻重链可变区的天然配对，相较于传统的抗体制备技术具有效率高、全人源、基因多样性更丰富等优势。单个B细胞抗体制备技术已成为制备全人抗体的热门方法，同时也促进了包括抗体发生成熟、疫苗保护机制、疫苗开发、肿瘤及自身免疫疾病等免疫学相关研究。文中就单个B细胞抗体制备技术的过程及应用作简要综述。

摘要:高通量数据的产出为基因组尺度代谢网络的构建提供了基础，但同时也对网络构建和分析方法的改进提出了挑战。随着数据量的不断增大，耗时耗力的人工构建及分析已经无法满足模型发展的需要，因而各种自动化的方法应运而生。模型构建和分析的自动化不仅能够大幅度提高模型构建和解析的速度，同时对于模型构建和分析方法的标准化和程序化也有着不可替代的作用。文中结合作者的实际研究经验，对基因组尺度代谢网络构建的自动化进程和主要的代谢网络分析工具进行了较为详细的介绍，总结了代谢网络自动重构的流程，并提出了目前面对的主要问题和未来的研究方向。

摘要:麻疯树Jatropha curcas L.作为一种新兴的生物柴油型能源树种已经得到广泛的认可，关于它的各项研究持续升温。文中综述了近年来国内外关于麻疯树分子生物学方面的研究进展，一是揭示麻疯树遗传多样性和系统分类的分子标记研究；二是全面解析麻疯树分子网络的基因组、转录组和蛋白质组研究；三是以培育优质高抗品系为目标的代谢和发育调控相关基因的分离、克隆和功能研究；最后讨论了目前研究的不足和麻疯树未来分子生物学研究的方向。

摘要:人参皂苷IH901是近年人参代谢组学研究中新发现的一种稀有人参皂苷。IH901在天然人参中并不存在，系口服人参后通过系列肠道微生物在体内代谢转化，最终入血的主要代谢产物之一。最新药理学研究表明，IH901在抗肿瘤、抗炎、抗糖尿病和抗衰老等方面均表现出良好的生物活性，是人参在体内发挥活性作用的主要物质。近年来，在体内转化IH901的理论指导下，国内外学者通过体外酶转化和微生物转化等生物工程技术在大规模提取制备IH901等研究方面均取得突破性的进展。以下综述了稀有人参皂苷IH901在体内外的生物转化及其生物活性等研究进展。

摘要:K5多糖裂解酶 (Elma) 能够裂解半合成肝素的底物-K5多糖，裂解产物是半合成法生产低分子量肝素的底物。利用PCR方法扩增elma，构建表达载体pET-28a-Elma，将构建好的质粒转化至大肠杆菌BL21中，以0.2 mmol/L的IPTG在16 ℃诱导5 h实现了高效表达，SDS-PAGE分析表明Elma表达量可达菌体总蛋白的30％以上。采用Ni2+-NTA亲和层析法和G-75分子筛层析纯化目的蛋白，其纯度大于95％。通过PAGE多糖电泳发现裂解前后的K5多糖分子量有明显的减小。根据Elma裂解产物产生双键从而在232 nm处有吸光度的变化来测Elma的酶活。其最适反应温度为37 ℃，反应的最适pH值为7.0。底物特异性分析发现Elma除K5多糖外对肝素和透明质酸也有降解作用。

摘要:UDP葡萄糖-类黄酮-3-O-葡萄糖基转移酶 (Flavonoid-3-O-glucosyltransferas，3GT) 是植物重要的次生代谢产物生物合成途径中的关键酶。文中采用现代生物信息手段，经3GT的同源比对后设计基因特异引物，运用RT-PCR及RACE技术从天山雪莲Saussurea involucrata Kar. et Kir.叶片中克隆得到3GT基因的全长序列 (GenBank Accession No. JN092127)。3GT基因的cDNA全长序列含有1个1 548 bp的开放阅读框 (ORF)，编码516个氨基酸，该基因推断的蛋白与草莓GT6蛋白的相似性为91％，与毛杨梅3GT的相似性为89％；经序氨基酸序列比对，推断的天山雪莲3GT具有糖基转移酶基因家族特有的结构域PSPG-box。半定量PCR的结果显示，天山雪莲3GT基因在叶及愈伤组织中表达量最高，在根中有少量表达，茎中不表达。将该基因构建到含有35S启动子的植物表达载体上，利用农杆菌介导的遗传转化法进行同源转化，将筛选到的含有转3GT基因的愈伤组织进行悬浮培养，并用紫外分光光度法测量其黄酮含量是非转基因愈伤组织总黄酮平均值的2.06倍。

摘要:对弯曲乳杆菌Lactobacillus crispatus T79-3和T90-1、詹氏乳杆菌Lactobacillus jensenii T118-3和T231-1四株乳杆菌对金黄色葡萄球菌生长的抑制效果以及抑菌成分进行了分析，比较乳杆菌排除、竞争、置换3种不同作用方式对金黄色葡萄球菌粘附HeLa细胞的抑制作用。结果表明4株乳杆菌皆能抑制金黄色葡萄球菌的生长及其粘附HeLa细胞的能力，分析发现4株乳杆菌发挥抑制作用的主要成分是有机酸，同时比较分析乳杆菌3种不同作用方式发现它们对金黄色葡萄球菌粘附HeLa细胞的抑制效果不同，其中，排除作用方式效果最好。另外，乳杆菌对金黄色葡萄球菌粘附HeLa细胞的抑制作用具有浓度依赖性，随着乳杆菌浓度增大，抑制作用增强并逐渐达到饱和。4株乳杆菌中，T79-3粘附能力最强，对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强，排除作用方式抑制金黄色葡萄球菌粘附HeLa细胞作用效果较好，提示乳杆菌T79-3有可能作为益生菌防治妇女泌尿生殖道感染。

摘要:CCH1和MID1基因编码的钙闸门是外源钙进入细胞内的重要通道，Ca2+作为细胞内重要的第2信使分子，其浓度的升高可激活相应的途径参与各种细胞反应过程。该研究将利用钙通路CCH1和MID1基因的单缺失菌株，并构建其相应的回补菌株，研究CCH1或MID1基因缺失后对白念珠菌药物耐受性和致病性的影响作用。通过药物平板敏感性试验和微量液基稀释法比较不同菌株对唑类药物敏感性的变化，进一步添加钙通道阻滞剂和钙离子螯合剂来分析钙离子浓度变化对药物作用的影响，结果发现CCH1或MID1基因的缺失明显对氟康唑和伊曲康唑表现出敏感性，且药物作用受到钙离子浓度变化的调节。最后建立小鼠感染模型分析不同菌株的毒力变化差异，确定CCH1或MID1基因的缺失显著减弱了白念珠菌的致病性。

摘要:为系统研究菲啶对酵母朊病毒的治愈效果，借助表达融合蛋白GFP-Sup35p的酵母朊病毒模型 (NGMC)，引入半变性琼脂糖凝胶电泳技术和荧光漂白后恢复技术在蛋白和细胞水平定量分析了菲啶对酵母朊病毒的治愈效果。结果表明，蛋白和细胞水平采用的定量分析方法能够精确定量菲啶对酵母朊病毒的治愈作用，菲啶作用酵母朊病毒[PSI+]1~5 d的治愈率分别为0％、0％、51.7％、87.5％和94.4％。另外，菲啶作用酵母朊病毒[PSI+]细胞1~2 d后出现的粉色菌落中朊病毒的聚集状态与[PSI+]相似，而3~5 d后出现的粉色菌落中朊病毒的状态与[psi-]相似。

摘要:为了探讨外源钙对重金属镉 (Cd) 缓解南美蟛蜞菊Wedelia trilobata毛状根毒害的生理机理，采用溶液培养法研究了重金属Cd单独及其与Ca组合对南美蟛蜞菊毛状根生长、抗氧化酶超氧化物岐化酶 (SOD) 和过氧化物酶 (POD) 活性及对Cd2+吸收的影响。结果表明，Cd≤50 μmol/L时促进毛状根生长；高于100 μmol/L Cd则抑制其生长，使其侧根短小，根尖变褐或变黑。与对照相比，不同浓度Cd培养的毛状根POD活性、SOD活性和MDA含量都比对照明显提高，但高于100 μmol/L Cd培养的毛状根可溶性蛋白含量均比对照降低。与仅添加200 μmol/L或300 μmol/L Cd的毛状根相比，Cd和10~30 mmol/L Ca组合培养可促进毛状根生长，使其主、侧根变粗；提高其可溶性蛋白含量；降低其MDA含量、POD活性及SOD活性。原子吸收分光光度法测定结果表明，南美蟛蜞菊毛状根能吸收和吸附重金属Cd2+，当Cd2+浓度为100 μmol/L时毛状根对Cd2+的吸收量最大，而Cd2+浓度为300 μmol/L时毛状根对Cd2+的吸附量最大。外源加入10~30 mmol/L Ca2+可显著减少毛状根对Cd2+的吸收和吸附，并可调节其抗氧化酶活性，降低其膜脂过氧化水平而解除重金属镉对毛状根生长的抑制或毒害。

摘要:焦磷酸测序是一种基于生物发光反应的实时DNA序列测定技术，其反应体系中的荧光素酶决定测序反应的灵敏度。传统焦测序反应使用的是野生型北美荧光素酶Photinus pyralis luciferase (PpL)，该酶热稳定性较差，因此由该酶配制的焦磷酸测序反应体系对热不稳定，影响焦磷酸测序的灵敏度。为了建立热稳定的焦磷酸测序反应体系，全合成了耐热突变日本萤火虫荧光素酶的编码序列，并将其插入到表达载体pET28a(+)中构建重组质粒，将重组质粒转化到大肠杆菌中，筛选得到的阳性重组菌成功表达了N端带有6×His (组氨酸) 标签的耐热突变日本萤火虫荧光素酶。利用镍亲和层析法，纯化得到了分子量约为60 kDa且比活为4.29×1010 RLU/mg的重组蛋白。对重组耐热日本萤火虫荧光素酶的热稳定性研究结果表明，该酶在50 ℃时仍具有活性，在40 ℃下孵育25 min后活性保留了90％以上。与基于野生型北美荧光素酶的焦磷酸测序体系相比，由耐热日本萤火虫荧光素酶配制的测序反应体系对热稳定性有了极大的提高，该测序反应液在37 ℃放置1 h后仍能够得到正确的测序结果。研究结果为建立稳定可靠的现场及时快速焦磷酸测序反应体系奠定了基础。

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