摘要:埃博拉病毒是一种可引起人和非人灵长类动物出血热传染病的最为致命的烈性病毒，致死率可达90%。2014年在西非爆发的埃博拉疫情引起了全世界的关注。疫苗接种是预防和控制传染病最为常规和有效的方法，尽管目前还没有正式获得批准上市的埃博拉病毒疫苗，但是已有多个尚处于研究阶段的疫苗在非人灵长类动物上取得了很好的保护效果，并有几个已进入临床I期试验阶段，有望尽快用于本次埃博拉疫情的防控。本文对目前处于研究阶段的多个类型的埃博拉病毒疫苗进行了综述，为相关研究人员提供参考。

摘要:小球藻是一种食用历史久、营养丰富的微藻功能食品，其中蛋白核小球藻已于2012年被我国批准为新资源食品，并成为国内外正在大力发展与培育的微藻能源及微藻固碳这一战略性新兴产业的主要藻种之一。在积累油脂的同时，小球藻自身还能合成高附加值生物活性物质，其合理利用可平衡微藻能源的高成本。小球藻热水提取物 (CE)，即商业上宣称的“小球藻生长因子 (CGF)”，是小球藻有别于其他微藻的主要生物活性物质，在促进生长、调节免疫等方面具有良好功效，且市场售价高。但迄今，有关CE的认识尚不清晰，尚未见CE方面的系统评述。本文对近年来CE的活性研究状况进行了系统的文献调查与梳理，综述了CE在增强免疫、抑制肿瘤、改善代谢综合征、清除自由基、抵御紫外损伤、螯合重金属以及保肝护肠等多个方面的功效，并分析了CE活性研究中存在的问题及CE的发展前景。

摘要:真菌是现代微生物发酵产业的主力军之一。交替呼吸途径 (Alternative respiration pathway, ARP)，以其非磷酸化电子传递途径，起到了能量溢流 (Energy overflow) 的作用，调节细胞能量代谢，平衡碳代谢和电子传递，有利于代谢产物的积累。 此外，交替呼吸对真菌的抗逆反应和条件致病菌的生理作用也都具有非常重要的影响。交替氧化酶 (Alternative oxidase, AOX) 是线粒体中交替呼吸途径的末端氧化酶，广泛存在于高等植物及部分真菌和藻类中。由于交替氧化酶对水杨氧肟酸 (Salicylhydroxamic acid, SHAM) 敏感而对细胞色素呼吸抑制剂氰化物不敏感，交替氧化酶AOX介导的交替呼吸途径又被称为抗氰呼吸途径 (Cyanide-resistant respiration, CRR)。近年来，研究交替呼吸途径和交替氧化酶已成为细胞呼吸代谢领域的热门课题。本文主要对真菌交替呼吸途径和交替氧化酶的结构与其在工业真菌体内功能的最新研究进展作一简要的综述。

摘要:Bt基因是目前世界上应用最为广泛的抗虫基因，已经被转入多种作物中。其中，棉花、玉米、马铃薯等转Bt基因抗虫作物已经商品化生产，创造了可观的经济效益。结合作者的资料收集和研究结果，综述了Bt基因以及转Bt基因抗虫作物的培育现状，同时对提高Bt蛋白杀虫活力的方法和Bt基因聚合策略的利用进行了深入的探讨。

摘要:近年来，番鸭细小病毒出现新的流行趋势，估计与病毒基因变异有关，因此针对新流行毒株研发新的检测方法很有必要。本研究根据番鸭细小病毒 (MDPV) 2012年分离株SAAS-SHNH的全基因序列，设计了一对特异性引物，利用PCR技术扩增全长vp3基因，经鉴定正确后，进行同源性比对分析，同时将其克隆到PET28a载体，构建成PET28a-VP3原核表达载体，经转化及IPTG诱导后，SDS-PAGE电泳和Western blotting分析，表达出与预期大小相符的63.1 kDa的蛋白，该蛋白可与临床采集的免疫过MDPV的番鸭血清结合，说明该蛋白可用于MDPV的血清学检测。将纯化后蛋白免疫新西兰大白兔，制备兔源MDPV-VP3蛋白的多克隆抗体，制备的兔源血清能够与MDPV疫苗弱毒株及J3D6株VP3蛋白发生特异结合；MDPV感染原代鸭胚成纤维细胞 (DEF) 后，利用兔源血清作为一抗进行免疫荧光分析 (IFA) 分析，在DEF细胞核和细胞质内均能检测到VP3蛋白，表明利用VP3蛋白制备的抗血清可以用于MDPV免疫荧光分析细胞增殖病毒的检测。这为今后MDPV的快速检测提供了技术基础。

摘要:为了制备禽网状内皮组织增殖病病毒 (REV) gp90蛋白的单克隆抗体，应用His-gp90融合蛋白免疫BALB/c小鼠，取免疫鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞 (SP2/0) 进行融合，经过筛选、3次亚克隆后获得3株稳定分泌抗REV-gp90蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为3G5-B8、3G5-A10和1G12。经间接ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) 方法检测，单克隆抗体的亲和力解离常数 (Kd) 分别为6.483×10–10、4.844×10–10和9.330×10–10，3株单抗的亚型分别为IgG1、IgG1和IgG2b。经Western blotting和间接免疫荧光实验检测，3株单抗均能识别REV感染DF-1细胞后产生的gp90蛋白。以Western blotting方法利用单抗检测不同截短的gp90蛋白，初步确定3G5-B8和3G5-A10 2株单抗抗原识别区均位于gp90蛋白第200?245位氨基酸，而1G12株单抗识别区包含第230?235位氨基酸。这些单抗为REV的诊断和致病机理研究奠定了基础。

摘要:家蚕二分浓核病毒 (Bombyx mori bidensovirus, BmBDV) 是特异性感染家蚕中肠引起慢性浓核病症的致病原，基因组含有2套单链DNA分子 (VD1和VD2)，复制机制尚不清楚。为了能够在体外拯救出有感染性的病毒粒子，构建了BmBDV的基因组全长的克隆质粒pMD18T-VD1和pUC-VD2，并通过酶切构建的克隆质粒来获得双链的基因组片段VD1和VD2，利用脂质体包埋的方法，线性化共转染BmN细胞。提取转染后的BmN细胞总DNA，经去甲基化处理后，通过PCR检测到病毒基因的复制；提取转染后的BmN细胞和添食回感的家蚕中肠的总蛋白，分别进行蛋白质印记杂交检测，检测到病毒基因的表达。由此首次表明，该病毒线性化的基因组片段通过共转染BmN细胞的方法，可以在体外条件下拯救出具有感染性的病毒粒子。

摘要:为了研制口蹄疫抗原表位突变标记疫苗，本研究以含有Asia 1型口蹄疫病毒 (FMDV) cDNA全长的感染性克隆pAsia 1-FMDV作为骨架，将3D蛋白中第27位氨基酸的H和31位的氨基酸N分别突变成Y和R，从而突变3D蛋白的一个抗原表位，将构建的带有突变表位的重组质粒转染BHK-21细胞，成功拯救出一株突变FMDV。经比较后发现，重组病毒的生物学特性与亲本毒株相似。病毒中和试验结果显示，抗重组病毒的血清与亲本病毒有良好的反应性。Western blotting结果表明重组病毒诱导的抗体能与突变的表位合成肽反应而不与野生型病毒的表位合成肽发生反应，从而区分重组病毒与亲本病毒。综上所述，这株抗原表位突变FMDV有望作为口蹄疫标记疫苗候株进一步评估。

摘要:胸苷是抗艾滋病药物司他夫定 (3′-脱氧-2′,3′-双脱氢胸苷) 和叠氮胸苷的重要前体物质。应用代谢工程方法对大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3) 生物合成胸苷进行了研究。通过敲除E. coli BL21嘧啶回补途径的deoA、tdk和udp三个基因，BS03工程菌株能够积累21 6 mg/L胸苷。为了增加合成胸苷前体物核糖-5-磷酸和NADPH的供给，进一步敲除pgi和pyrL使工程菌BS05胸苷的产量提高到90.5 mg/L。而通过过表达胸苷合成途径的ushA、thyA、dut、ndk、nrdA和nrdB六个基因，菌株BS08胸苷的产量能达到272 mg/L。通过分批补料发酵，BS08最终可以积累1 248.8 mg/L的胸苷。本研究结果表明经过代谢工程改造的E. coli BL21具有良好的胸苷合成能力和应用潜力。

摘要:硫酯酶在生物体内能催化水解脂酰酰基载体蛋白和饱和脂肪脂酰链，对中链脂肪酸 (Medium chain fatty acids，MCFAs) 的积累起着关键作用。为获得具有生产中链脂肪酸能力的工程菌，以拟南芥cDNA为模板，PCR扩增得到其脂酰-ACP硫酯酶基因AtFatA，经EcoRⅠ/XbaⅠ双酶切后连接至同样双酶切的质粒中，获得重组质粒pPICZαA-AtFat。将重组质粒电击转入毕赤酵母GS115中，通过Zeocin抗性筛选，挑选出阳性克隆子并摇瓶发酵诱导，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析获得明显目的蛋白条带，首次成功构建AtFatA的真菌表达系统。气质联用法检测发酵产物胞外游离脂肪酸，发现毕赤酵母AtFatA重组菌株比起始GS115菌株胞外游离MCFAs (主要是辛酸) 产量增加51%，MCFAs产量占胞外总脂肪酸产量的28.7%，而野生菌中这一比例仅有18.1%，这为日后生产安全无毒害的MCFAs探索了一条新的途径。

摘要:IFIT (Interferon induced proteins with tetratricopeptide repeats) 家族基因是一组较早发现的干扰素刺激基因，它在抗病毒和免疫调节中发挥了重要作用。为研究IFIT家族基因抑制A型流感病毒复制的机理，利用高通量RNA深度测序 (RNA-Seq) 技术发现A型流感病毒A/WSN/33 (WSN) 毒株感染293T细胞后，IFIT家族基因均出现明显上调。同时发现在IFIT2、IFIT3过表达后，流感病毒的复制和转录均有明显下调，并对vRNP聚合酶活性具有剂量依赖型的抑制作用。进一步研究证明在感染IFIT2、IFIT3编码蛋白与流感病毒非结构蛋白 (NS1) 存在细胞内共定位，证明二者存在相互作用的可能。综上所述，IFIT家族基因可以抑制A型流感病毒的复制和转录，有助于进一步阐明宿主因子对流感病毒感染的调节机制。

摘要:放疗是治疗肿瘤的最常用手段之一，为寻找能够保护肿瘤组织周边正常细胞的放疗保护剂，通过原核表达质粒的构建，利用大肠杆菌BL21 (DE3) 诱导并成功表达出人隐花色素蛋白Ⅰ (hCRY1)。采用包涵体溶解、梯度透析复性、镍柱亲和纯化以及超滤浓缩的蛋白纯化工艺，1 L菌液可收获10?15 mg纯度超过95%的hCRY1。在HaCaT细胞中通过细胞DNA损伤修复中所产生的H2A.X foci荧光强度的定量检测，验证了纯化所得的hCRY1具有射线损伤防护功能；通过对经过hCRY1以及对照蛋白处理后的细胞凋亡情况的检测排除了hCRY1的毒副作用对H2A.X foci荧光强度的影响。这些为进一步研究hCRY1提供了便利条件，也为将hCRY1开发成为新的放疗保护剂提供了理论基础。

摘要:为提高酿酒酵母工程菌S7香紫苏醇产量，采用摇瓶培养，研究了其生长和代谢特点，发现产物合成与菌体生长密切关联。在3 L发酵罐中通过补料-溶氧联动控制的方式，以葡萄糖、乙醇和葡萄糖/乙醇混合物为碳源进行高密度培养，香紫苏醇产量分别达到253 mg/L、386 mg/L和408 mg/L，最高产量是摇瓶培养的27倍。说明添加乙醇作为碳源有助于香紫苏醇合成。研究结果对优化酿酒酵母细胞工厂，高效生产萜类化合物具有重要参考价值。

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