摘要:血管内皮生长因子 (Vascular endothelial growth factor，VEGF165) 是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，高纯度的VEGF165对于抗肿瘤药物和生物标志物研发检测试剂必不可少。目前关于VEGF165的异源表达方法，纯化步骤多且产物纯度不高。以毕赤酵母表达系统为基础，构建人血管内皮生长因子 (VEGF165) 多拷贝的表达载体。按照酵母密码子偏好性优化人血管内皮生长因子基因 (vegf165) 的密码子，在毕赤酵母BBPB表达载体基础上，用Biobrick生物积块的方法，构建以Pgap为启动子的五拷贝rhVEGF165表达载体，同时添加组氨酸标签。利用His标签和VEGF165自身的肝素结合结构域，仅用两步亲和层析纯化得到纯度高于98%的rhVEGF165蛋白。rhVEGF165纯化后浓度为0.45 mg/mL，且具有生物学活性。该异源表达策略简化了rhVEGF165的纯化步骤，rhVEGF165具有天然VEGF165的生物学活性，且纯度达到目前文献报道的最高水平。