摘要:本研究旨在利用水稻胚乳生物反应器表达新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV） HN蛋白，建立一种NDV抗体半定量、快速免疫层析检测方法。通过MlyⅠ和XhoⅠ双酶切重组质粒pUC57-HN，NaeⅠ和XhoⅠ双酶切包含有启动子、信号肽和终止子的pMP3中间载体，分别回收HN和pMP3片段并进行连接，构成重组质粒pMP3-HN1。然后利用EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切pMP3-HN1和植物载体pCAMBIA1300，将HN1基因成功连接到pCAMBIA1300上，采用电转化方法将重组质粒pCAMBIA1300-HN1导入根癌农杆菌EHA105。通过农杆菌介导法将pCAMBIA1300-HN1转入水稻愈伤组织。经过暗培养、愈伤筛选、分化、生根和移栽，4个月后获得转基因水稻种子。经PCR鉴定，HN基因已插入到水稻基因组中。SDS-PAGE和Western blotting鉴定结果表明，水稻胚乳成功表达了HN蛋白，且该蛋白通过SP阳离子层析和凝胶过滤层析，其纯度达到90%以上。根据国家制定的新城疫血凝抑制（hemagglutination inhibition，HI）试验诊断技术标准（HI≥4log2，检测的抗体为阳性），利用胶体金标记HN蛋白，通过双抗夹心法制备NDV抗体半定量快速检测试纸。结果显示：试纸与其他病毒的阳性血清无交叉反应，且试纸对新城疫标准阳性血清的敏感性可达到1：102 400。根据308份临床血清的检测结果，NDV抗体试纸与和HI试验的符合率为97.08%，Kappa值为0.942。综上所述，获得了高纯度水稻胚乳表达的重组HN蛋白，并研制了一种简单、快速、灵敏度高、特异性强的半定量免疫层析试纸。该试纸能够初步应用于新城疫疫苗的免疫评价。