摘要:根据大肠杆菌密码子偏爱性优化并合成人白细胞介素4基因，以pET30a(+)为载体构建了重组表达质粒pET30a(+)/rhIL-4，将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，诱导表达并超声破菌检测重组蛋白的表达形式。采用5L发酵罐培养工程菌，发酵液OD600为0.6时诱导3.5 h收集菌体，检测目的蛋白的表达量。收集的菌体经压榨破菌获得包涵体，通过包涵体变性、层析、透析复性等方法对rhIL-4进行纯化。采用人红细胞白血病细胞（TF-1）测定纯化的rhIL-4的生物活性。测序表明目的基因已插入载体pET30a(+)中，重组蛋白以包涵体形式表达，单位体积重组蛋白的表达量达200mg/L发酵液，建立了对包涵体形式表达的rhIL-4纯化方法，最终得率为40mg/L发酵液，纯度大于98％，回收率为20％以上。免疫印迹法检测诱导表达的重组蛋白和纯化的蛋白为IL-4，N端氨基酸序列测定结果与理论相符，生物活性检测纯化的蛋白比活性达2.5×106AU/mg。这为rhIL-4进一步产业化研究建立了基础。

摘要:为获得不依赖油水界面激活的黑曲霉脂肪酶 (ANL) 突变体，在生物信息学分析基础上，对黑曲霉脂肪酶盖子结构域两侧铰链区的氨基酸残基进行了置换突变，获得两个黑曲霉脂肪酶突变体 (ANL-Ser84Gly和ANL-Asp99Pro)。对不同浓度对硝基苯丁酸酯的水解活性检测结果表明：ANL-Ser84Gly的催化活性仍依赖油水界面，而ANL-Asp99Pro的催化活性不再依赖油水界面。底物特异性检测结果表明：较ANL而言，ANL-Ser84Gly的比活力显著降低，其水解对硝基苯棕榈酸酯、对硝基苯豆蔻酸酯、对硝基