摘要:肌肉生长抑制素（myostatin，MSTN）基因是动物骨骼肌生长的负调控基因。本研究在获得MSTN基因双等位突变原代兔的基础上，培育具有“双肌”表型性状和稳定遗传的MSTN–/–纯合突变兔，建立原代MSTN双等位突变兔繁育纯合子后代的方法。应用CRISPR/Cas9基因编辑技术制备MSTN–/–突变原代兔，原代双等位突变兔与野生型兔配种，产生F1代兔。同一突变系的F1代兔半同胞交配或回交繁殖F2代纯合子兔；后代兔利用基因组DNA PCR扩增产物序列分析和T载体克隆测序鉴定用于筛选纯合子兔；14–19周龄MSTN基因突变兔称量体重。MSTN基因突变兔臀大肌组织切片，统计分析肌纤维横截面积。获得5只MSTN基因突变原代兔，其中3只用于纯合子培育，共获得15只（5种突变子）纯合突变兔（M2-a：3只；M2-b：2只；M3-a：2只；M7-a：6只；M7-b：2只）。在14–19周龄，MSTN–/–纯合突变兔体重极显著高于同龄MSTN+/+野生型兔（平均（2 718±120） g和（1 969±53） g，P<0.01，同龄体重提高38.0%）；纯合突变兔的臀大肌纤维平均截面积极显著高于野生型兔（（3 512.2±439.2）μm2和（1 274.8±327.3）μm2，P<0.01），也显著高于MSTN+/–半合子兔（（3 512.2±439.2）μm2和（2 610.4±604.4）μm2，P<0.05）。本研究成功培育了5种MSTN–/–基因纯合突变兔，且有明显瘦肉表型。研究表明，应用CRISPR/Cas9基因编辑获得的原代双等位突变兔为非嵌合体突变兔，突变性状遗传后代；原代双等位突变兔后代分离为两个不同突变子，并都呈现“双肌”表型；F1代单等位突变兔通过近交或回交可获得MSTN–/–纯合突变兔。该研究在利用基因编辑技术培育优良家畜品种方面取得了实验进展。