摘要:将黑曲霉葡萄糖氧化酶(GOD)基因重组进大肠杆菌酵母穿梭质粒Ppic9，转化甲基营养酵母Pichia pastoris GS115，构建出GOD的高产酵母工程菌株。在酵母αFactor及AOX1基因启动子和终止信号的调控下，黑曲霉GOD在甲基酵母中大量表达并分泌至胞外，经甲醇诱导3～4d，发酵液中的GOD活力可达30～40u/mL。SDS-PAGE证实GOD在培养物上清中的含量显著高于其它杂蛋白，约占胞外蛋白总量的60%～70%，经Q SepharoseTMFast Flow离子交换柱一步纯化即达电泳纯。重组酵母GOD比活达426.63u/mg蛋白，是商品黑曲霉GOD的1.6倍。动力学性质分析表明，重组酵母GOD的Km和Kcat分别为38.25mmol/L和3492.66s-1，与商品黑曲霉GOD相比，具有更高的催化效率。重组酵母GOD的高活力特性可有效提高葡萄糖传感器的线性检测范围。

摘要:利用谷氨酸氧化酶(简称GO)共价偶联于硅烷化铂化铂丝(Φ0．5mm)表面。构建一种简单的微酶电极，该电极具有良好的操作性能；应用于流动注射分析系统(FIA)，可用来测量谷氨酸含量，测量范围。0－2．0mmo1/L，精度(CV为o．4％)、响应时间小于60秒，使用寿命大于20天，实际测量发酵液中各氨酸含量，回收率为98．7％一107．5％。

摘要:文研究了一种用于测定发酵液谷氨酸含量的介质电流型谷氨酸电极。这种电极是由谷氨酸氧化酶同以二茂铁为介质的化学修饰电极复合构成。研究了各种因素对此电极响应的影响和电极本身的性能与实测验证，结果表明本电极在搅拌反应室(CSR)系统中响应的最适pH为6．8，最适温度为30C，使用寿命为6天，电极专一性较好。在流通注射分析(FIA)系统中响应的最适pH为7．0，最适温度为27℃，测量范围为0．0125－O．125mol／L(射(20μ1)，精度(CV)为1．3％，响应时间为Imin，校正曲线相关系数r=0．998，使用寿命为8天，经实际测量发酵液中谷氨酸含量，与瓦氏呼吸仪对照，相对误差为±6%。

摘要:由酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)和氧电极组成的微生物传惑器用于蔗糖等低分子糖的测定。响应动力学过程分析表明，动态测定法比稳态测定法优越。对醪液中蔗糖浓度铡定，响应时间小于Imin，线性范围0-100mg／L，相对误差为±4％，平均回收率为97％。乙醇和精氨酸对测定有较大干扰，22种氨基酸混合液对测定干扰不明显。传感器经连续使用一个月，500次测定，活力仍稳定，无线性漂移现象。该微生物传感器对低分子糖类的响应选择性顺序为：果糖>麦芽糖>葡萄糖>蔗糖，在以上述糖作为唯一生长碳源培养微生物时，可采用本方法测定其含量。

摘要:本文研究了测定谷氨酸的微生物传感器。用琼脂固定化的大肠杆菌(Escherichia coli As 1．505)和二氧化碳电极制成膜状传感器，用聚丙烯酰胺固定化的大肠杆菌和二氧化碳电极制成柱状传感器。结果表明，膜状传感器在25℃测定谷氨酸的范围为60－1200mg／I，响应时间为1020min，柱状传感器在30℃测定谷氨酸的范围为60－800mg／1，响应时间为5—7 min。两种传感器测定误差为2—3％以下，20天内使用60多次，不见其活力下降。

摘要:将大肠杆菌(Escherichia coli)215用吸附法固定于醋酸纤维素膜上，与氧电极配合组成微生物电极，建立了对维生紊B12的快速测定系统。测定浓度范围5×10-6mg—2．5×10-5mg／ml;测定温度范围在28—39℃;最适Ph为6．7—7．8，测定一个样品所需时间为2h，比常用的生物学测定方法所需时间缩短10倍以上。该系统对维生素B12重复测定的相对误差为±3％。固定化菌体在－25℃保存25天后再进行测定，应答电流不低于初始值的92%。

摘要:将亲和素共价固定在表面改性后的硅片上，通过亲和素与生物素相互作用将生物素标记的噬菌体抗体GP3固定在亲和素膜层表面，当含有M13KO7噬菌体的样品经过抗体表面时，通过噬菌体与抗体之间的相互作用噬菌体就会被抗体捕获，生物学信号可以通过芯片上的膜层厚度变化表现出来，这种膜层厚度变化可以被椭偏生物传感器技术识别。结果表明，GP3抗体在芯片表面形成了饱和的抗体膜层，厚度为6.9nm；M13KO7噬菌体与芯片上固定的抗体会发生特异性相互作用，噬菌体被抗体捕获后形成的复合物膜层厚度为17.5nm，并且随着噬菌体浓度升高膜层厚度增加，检测含有M13KO7噬菌体的样品灵敏度为109pfu/mL。与其它研究病毒与抗体相互作用方法相比光学蛋白芯片技术具有简便快捷、无需标记待检样品和结果直观等优点，为研究病毒与其抗体相互作用以及疾病早期临床诊断提供了一个新的方法。

摘要:将来源于水母的绿色荧光蛋白基因 (gfp)和来源于E .coli转座子Tn10的四环素阻遏蛋白基因 (tetR)共同构建到E .coli表达载体pET_30a +上 ,获得TetRC_端与GFPN_端融合蛋白。对经诱导表达并纯化后的融合蛋白 (TR∷GFP)进行荧光发射光谱分析表明 ,该融合蛋白保留了GFP的荧光特性 ,即在 395nm激发下 ,可在 5 10nm附近有特征发射峰。在加入四环素后 ,融合蛋白在 395nm激发下 ,在400nm～700nm范围内的发射光谱发生明显变化 ,荧光强度普遍增加 ,且以 510nm处最大发射峰增幅最大 ,由原来 1132增至 2214 ,而四环素对相同浓度的GFP与TetR荧光影响不大 ,结果表明该融合蛋白 ,能感受外界四环素 ,并产生一定的荧光变化。

摘要:椭偏光学生物传感器是在椭偏光学显微成像技术的基础上发展的一项生物传感技术。它能够直接观测固体表面上的生物分子面密度，毋需任何标记辅助，适合发展成为一种无标记免疫检测技术。研究了在硅片表面上通过A蛋白定向固定抗体分子用于椭偏光学生物传感器免疫检测的可能性。实验结果表明，通过A蛋白固定抗体得到的抗体膜层的均一性和固定量的重复性能够保证椭偏光学生物传感器免疫检测结果的质量。通过A蛋白定向固定的抗体的抗原结合位点趋向一致，显著提高了抗体与抗原结合的能力。此外，通过蛋白A固定的免疫球蛋白G分子能够结合更多的多克隆抗体分子说明通过A蛋白固定的蛋白质分子能够较好地保持其空间构象。

摘要:用共价法将酶固定在醋酸纤维素膜上，方法简便易行，制造的酶膜稳定，比活力高。同时采用该方法制备了葡萄糖氧化酶酶膜，与氧电极组装成测定葡萄糖的生物传感器，线性范围为50~800mg／dl，仪器工作的最适pH为6．0，最适温度为40℃。将该膜与过氧化氢电极组装得到的传感器具有以下特性：线性范围为10~200mg／dl，最适pH为6．0，测定结果与酶试制盒有良好相关性。