摘要:将来源于水母的绿色荧光蛋白基因 (gfp)和来源于E .coli转座子Tn10的四环素阻遏蛋白基因 (tetR)共同构建到E .coli表达载体pET_30a +上 ,获得TetRC_端与GFPN_端融合蛋白。对经诱导表达并纯化后的融合蛋白 (TR∷GFP)进行荧光发射光谱分析表明 ,该融合蛋白保留了GFP的荧光特性 ,即在 395nm激发下 ,可在 5 10nm附近有特征发射峰。在加入四环素后 ,融合蛋白在 395nm激发下 ,在400nm～700nm范围内的发射光谱发生明显变化 ,荧光强度普遍增加 ,且以 510nm处最大发射峰增幅最大 ,由原来 1132增至 2214 ,而四环素对相同浓度的GFP与TetR荧光影响不大 ,结果表明该融合蛋白 ,能感受外界四环素 ,并产生一定的荧光变化。

摘要:最近报道了从大型多管水母中分离出新的gfp基因。经大肠杆菌表达并纯化出的绿色荧光蛋白（GFPxm）具有476nm的激发峰和496nm的发射峰，但是只能在低温下成熟的缺点限制了它的应用。这里进一步报道GFPxm的12种突变型。在大肠杆菌中的表达结果表明，有7种突变型在37℃条件下产生高的荧光强度。在25、32和37℃条件下表达6 h，GFPxm16、GFPxm18和GFPxm19的相对荧光强度均高于增强型绿色荧光蛋白（EGFP），而GFPxm16和GFPxm163在42℃高温表达时仍能保持高的荧光强度。这7种突变型中的4种在哺乳动物细胞中已获得良好表达。此外，有6种突变型的荧光光谱红移，目前所达到的最长激发峰为514nm、最长发射峰为525nm。另外有3种突变型具有包括紫外在内的两个激发峰，1种突变型只有单一的紫外激发峰。首次报道具有橙色荧光的突变型OFPxm，它的激发峰为509nm、发射峰为523nm。523nm属于黄绿色，但肉眼看到的蛋白为橙色。OFPxm在高温下可得到高水平表达且很好地成熟，但是因为低的量子产率而荧光强度相对较低。