1996, 12(4).
摘要:术聚糖是一种异质多糖,主要由木糖和阿拉伯糖组成。微生物产生的木聚糖酶来源广泛,能将木聚糖水解为木寡糖和D-木糖。该酶具有极大的应用价值,如可用于纸浆的漂白以减少环境污染,也可将造纸工业及农业废料中的木聚糖转化为D-木糖。
1996, 12(4).
摘要:将编码噬菌体T7RNA聚合酶的基因克隆至噬菌体M13mpl8RFDNA中,置于lac启动子的控制之下,得到了可表达T7 RNA聚合酶的重组噬菌体M13HEP。利用该噬菌体感染含T7启动子表达质粒的宿主菌以提供T7RNA聚合酶,可以诱导T7启动子控制下的外源基因的表达。该噬茵体诱导表达系统已成功地表达了多种外源基因,特别是一些表达产物对宿主菌有毒性的基因。同时,通过细菌接合将F',因子从大脑杆菌XL1-blue转至大肠杆菌HMS174,构建了新的大脑杆菌菌株HMSl74F,,使得T7表达质粒构建、表达及单链制备可以在同一菌株中完成,得到了一个完整的T7表达系统。
1996, 12(4).
摘要:构建了由RSV—LTR启动子带动并能在细胞内稳定复制的Ribozyme的自身修剪表达质粒pRSV—Rz523、Ribozyme反义对照质粒pRSV—AE7及人增殖细胞核抗原基因(PCNA)启动子带动的HPVl6 E7片段(+554~+686)的真核表达质粒pPCNA—E7。经G418抗性筛选获得了稳定表达Ribozyme的CV-1细胞克隆,其表达水平约为9.Opmol/lO6个细胞,其中活性Ribozyme的量大于50fmol/lO6个细胞,分离得到的Ribozyme可在体外特异切割E7靶RNA片段。通过共转染Ribozyme(或反义对照)和底物表达质粒并筛选出细胞克隆.研究了Ribozyme在细胞中对底物表达水平的影响。初步结果显示.Rihozyme的导人可使细胞内底物E7的RNA表达水平降低了90%(反义对照使E7 RNA表达降低20%)。上述结果提示:在CV-1细胞中表达的Ribozyme不仅在体外,同时在细胞内具有一定的生物学活性,有可能应用于逆转官颈癌细胞的恶性表型。
1996, 12(4).
摘要:利用随机引物扩增DNA(RAPD)技术,对栽培稻和野生稻原生质体融合获得的体 细胞杂种进行了鉴定。证实了它们包含有双亲的基因组成分。但来自双亲的基因组成分并不是对等的。一些体细胞杂种含有一个亲本更多的基因组成分,而另一些相反。利用RAPD数据和聚类图讨论了体细胞杂种和双亲的亲缘关系。
1996, 12(4).
摘要:利用PCR技术。以中国人促红细胞生成素(EPO)次全基因组为模板,进行了基因修补和重组.克隆出EPO cDNA全序列。同时发现中国人EPO cDNA与国外的克隆比较有一个核苷酸的差异,导致第62位氨基酸是丝氨酸.不是亮氨酸。将人EPO cDNA基因插入表达载体pSV2-dhfr中的不同克隆位点,构建了6种不同的转移载体质粒,即psV2 dhfr/F1,pSV2/F2,pSV2 dbfT/F3,pSV2 dhfr/F4,pSV2-dhfr/G1和psV2 dhfr/G3。将它们分别转染导人COS-7细胞,结果表明6种转移载体质粒转染的细胞上清液都有明显的EPO活性。人EPO cDNA基因转移载体质粒在COS-7细胞中的表达水平高于人次全EPO基因组转移载体质粒。
1996, 12(4).
摘要:超低温冰冻保存是保存生物材料的一种方法。目前禾本科植物原生质体培养的主要问题之一是胚性细胞系的状态不稳定。试验比较了影响谷子(Setaria italica(L.)Beauv)胚性细胞系超低温冰冻保存的因素如:不同的冰冻保护液组成,不同培养时间的胚性细胞系以及细胞系的恢复生长和原生质体培养。结果表明:本实验采用超低温冰冻保存方法不会影响胚性细胞系原生质体的培养特性,能够保持或提高原生质体培养的植板率。
1996, 12(4).
摘要:提出一种新型制备电泳方法即多通道流动电动电泳技术,建立了微机控制的电泳设备,考查了操作条件对设备分离效率的影响。应用该技术进行牛血清清蛋白(BSA)-牛血红蛋白(HBB)混合物的连续分离,每小时从含BSA、HBB备37.Omg的蛋白质混合物中分离出13.6mg的BSA和20.Omg的HBB。应用该技术进行尿激酶粗品的纯化,可将其比活力由4 000IU/mg提高到4×104IU/mg以上.产量在10×104IU/h以上。将该技术与(NH4)SO- 沉淀方法结合,从15ml免疫鼠血清中分离出12.5mg高纯度尿激酶抗体IgG,产量为2.1mg/h。上述结果证明多通道流动电泳技术其有分离速度快、精度高和可操作性好等优点,在生物产品分离领域中具有广阔的应用前景。
1996, 12(4).
摘要:对乳化液膜技术分离丙氨酸进行了实验研究,从而探索了从味精生产过程的。第二次等电点结晶母液”中回收丙氨酸的新途径。采用二(2-乙基已基)磷酸为载体和表面活性剂失水山梨醇单油酸酯、磺化煤油组成液膜体系。研究了影响乳化液膜提取的各种因素,确定了适宜的分离条件。丙氨酸的单级提取率超过60%,浓缩3倍以上。对该液膜体系在交流高压静电场作用下,箱式破乳器的破乳过程,建立了破乳速率和相关操作因素间的定量关系。
1996, 12(4).
摘要:建立了适于种子nNA分析的快速简便的PCR方法。水稻、小麦和玉米的半粒种子用提取缓冲液处理,产生的提取液可用于PCR和RAPD分析。水稻半粒种子的DNA和来自叶片的DNA用专一的PCR引物扩增后可以产生同样的PCR产物。含有胚的另半粒种子可以正常发芽。将半粒种子的PCR分析方法用于水稻白叶枯病抗性基因型的鉴定,证明是植物育种和遗传学研究中一种非常实用的方法。
1996, 12(4).
摘要:基于植物的过敏性反应机制,构建了PVY Nib基因和来自于细菌Bacillus amy—loliquefaciens的一类Rnase基因Barnase基因的融合基因的植物表达载体。在此表达载体内两基因的拼接处,保留了原来PVY蛋白酶识别PVYNIb和CP蛋白剪切位点的七肽保守序列。通过农杆菌介导获得此融台基因的转基因烟草植株。病毒侵染试验表明,转基因植物在病毒侵染后,发病症状被改变。少部分转融合基因的植株对病毒侵染表现局部抗性。
1996, 12(4).
摘要:研究了用快速琼脂糖离子交换层析(DEAE—Fast Flow sepharose)结台PEG 4000/Reppal PES双水相体系从黄豆中分离纯化磷酸甘油酸激酶(PGK)及磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)。控制床层高度(10~20cm),径向放大具有压降低的优点.设计多点进料取代传统的中心管进料,解决了径向流场不均匀的问题。GAPr)H的总收率及纯化倍数分别为58%和144,PGK的总收率及纯化倍数分别为41%和44。工艺成本为2.92美元/ku GPADH,具有一定的实用价值。
1996, 12(4).
摘要:医学科学院生物工程研究所 北京 100071)摘 要 人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和单核细胞趋化激活因子(MCAF)融合蛋白在大肠杆菌中高效表达后,表达产物以包涵体形式存在。包涵体经分离和洗涤后,探索了rhGM—CSF/MCAF变性和复性的合适条件。复性后的样品经Sephadex G-75凝胶过滤和CM—Sepharose FF离子交换两步层析,得到了具有生物学活性的SDS—PAGE纯的rhGM-CSF/MCAF。Western blot检测表明,纯化的rhGM—CSF/MCAF能分别与GM—CSF和MCAF抗体发生特异反应。
1996, 12(4).
摘要:用碘离子作示踪剂,采用矩形脉冲示踪法测定升流厌氧污泥层(UASB)反应器的流动分布。建立了申级返混加沟流模型。模型简单,能够反映反应器流动分布,具有较强的拟合能力和良好的适用性。运用流动模型和Monod方程,建立了UASB反应器稳态模型,并对模型参数进行了估计。通过灵敏度分析,进水基质浓度S。,废水流量Q,最大比基质降解速率,μmax 对出水基质浓度有较大影响。在稳态模型的基础上又建立了UASB反应器动态模态,利用此模型,对出水基质浓度序列Se,和产气量序列Qg进行计算预测,平均偏差分别5.40%和7.46%,标准偏差分别为7.02%和9.66%。
1996, 12(4).
摘要:研制成两种新型白细胞介素-2(新型Il,-2),其一为125Ser-IL-2,另一为125Ala—Ⅱ2(即原型IL-2中125位cys分别被Ser或Ala取代)。两种新型IL-2均已被高度纯化,并已完成了中试,获准临床应用。发现新型IL-2的热稳定优越性。在65℃加热,新型IL-2的稳定性高于原型,失活比原型慢,被保留的活性也较原型多。在0.1%SDS中能使失活的IL-2逐渐恢复一定的活性,也是新型IL-2恢复活性高。同时,比较了其它条件下这三种重组rIL-2的稳定性及SDS对其复性的影响,发现三者之间差异很大。上述结果均证明:125A1a—IL-2的热稳定性最好,125sER-IL-2次之,原型较新型差。
1996, 12(4).
摘要:以莫拉氏菌(Moraxella sp).M—z 1.5-二磷酸核酮糖羧化酶(RubisCO)大小亚基N-末端氨基酸序列和真养产碱菌(Alcaligenes eutrophus)RubisCO太亚基靠C-末端保守区域DNA序列为依据,合成3个引物,以莫拉氏菌M—z染色体DNA为模板通过PCR扩增制备了二种探针,Souththern杂交分析表明上述探针与莫拉氏菌M-z染色体DNA的两个Apa I酶切片断(5kb、4kb)呈阳性杂交反应。认为完整的RubisCO基因包含在这两个片段中。分别将古目的基因的5kb,4kb DNA片段克隆至pUC118和pBluescript KS+,构成质粒pPCL511和pBS4,并绘制了这二个质粒限制性枝酸酶酶谱。
1996, 12(4).
摘要:研究了高山红景天愈伤组织颗粒悬浮培养过程的生长及红景天甙合成的规律,发现红景天甙合成与细胞生长偶联,两者之间的关系表示为q=5.38×10-3μ。其产率系数Yx/s及维持系数m分别为0.66g·g-1和0.033g·(g·d)-1。在3.5L气升式反应器中研究了培养过程的操作特性,发现“发泡”现象几乎不存在,氧传递系数K1a的变化不同常规植物细胞的悬浮培养.愈伤组织颗粒在培养过程中经历一个由小变大,后叉变小的过程。
1996, 12(4).
摘要:采用人结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis TB)染色体DNA为模板,选择位于插入片段IS6110中884~865和568~588碱基对处的两个片段为引物,扩增出317bp的特异性片段.将其克隆进pUCl9载体。酶切图谱分析和DNA序列测定证实为目的片段。该片段经DIG标记,分别与11种分枝杆菌DNA进行Southern杂交,结果证明只与人型复合分枝杆菌发生杂交反应。利用该对引物建立的PcR检测拄术对74份结核病痰液标本进行检测,并与临床细菌快速培养结果相比较,发现48份临床阳性均为PcR阳性,在26份临床阴性标本中亦发现11份PCR检测阳性。将标本PCR产物与克隆探针进行杂交,显示两者结果完全一致。说明PCR检测体系结果可靠,其灵敏度明显高于目前临床所采用的方法,可作为一种常规技术用于结核病的临床检测。
1996, 12(4).
摘要:通过实验测定,证明生物反应器中细胞死亡速率与气体鼓泡速率成正比而与反应器体积成反比。实验发现气泡大小对细胞死亡速率具有两种作用,一种作用在于影响气泡表面积生成速率;另一种作用则在于影响细胞在气泡表面的吸附程度,其最佳直径为5mm左右。血清和Pluronic F68能显著降低细胞死亡速率,当Pluronic F68浓度达到0.1%时,kd趋于零。所有这些实验结果均与前文提出的生物反应器设计模型具有很好的一致性。
1996, 12(4).
摘要:前述研究工作基础上,设计开发了10L规模的动物细胞培养用气升式生物反应器。应用该生物反应器悬浮培养杂交瘤细胞.通过平行试验,考察了该反应器设计的合理性和可靠性。结果显示该反应器不存在限制细胞生长、代谢和产物生成的因素,而且细胞破损技彻底消除,表明该气升式生物反应器给细胞生长、代谢和产物生成提供了理想的培养环境,其设计是成功的。
1996, 12(4).
摘要:在赖氨酸发酵动力学模型和庞特里金明小值原理的基础上,得出流加发酵的最优化底物流加方式。并进一步对流加发酵的全过程进行了分析,得出了在实际控制中较为可行的流加发酵全过程的总控制策略,实际控制表明在小型反应器中赖氨酸产生菌FB42的发酵水平为81.6g/l。、转化率为0.418%、生产强度为1.16g/h·L,和分批发酵相比分别提高了45.4%、9.7%和28.4%。
1996, 12(4).
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