摘要:我国农业生物工程的进展莽克强（中国科学院微生物所植物生物工程实验室北京１０００８０）早在１９８４年组织落实第七个五年规划攻关项目时就充分意识到作为用粮大户的我国应对农业生物工程给予足够重视，以及在１９８６年实行的“８６３”长远高技术规划均列为优先发展…

摘要:对酵母ＮＭＴ基因在大肠杆菌中表达进行较详细的研究，进而构建了复制子为ｐ１５Ａ并含卡那霉素抗性基因的相容性表达质粒ｐＫＺＭＴ，将其与表达质粒ｐＣＺｍＣα１共转化进大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）Ｆ′，进行双质粒表达偶联加工修饰研究，其中ｐＣＺｍＣα１表达底物蛋白小鼠ｃＡＭＰ依赖的蛋白激酶催化亚基α（ＰＫＡ-ｍＣα）。ＳＤＳＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，双质粒表达系统中，ＰＫＡ-ｍＣα都得到了稳定的高表达，尤其在２３℃低温诱导表达时，表达产物的可溶性部分明显增多；而酵母ＮＭＴ被控制在有利于活性功能的可溶性低水平表达。［^３Ｈ］ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｉｄ标记测定及放射自显影的结果显示，在大肠杆菌中表达的重组ＰＫＡ-ｍＣα被豆蔻酰化修饰。

摘要:以霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）基因为载体，构建了含不同抗原表位的恶性疟原虫的融合基因ＣＴＢ／ＡＴＥ和ＣＴＢ／ＡＷＴＥ。前者除含有恶性疟原虫裂殖子表面主要抗原表位杂合多肽基因ＳＰｆ６６外，还含有很强的Ｔ辅助细胞表位ＣＳＴ３和Ｔｃ细胞表位；后者在此基础上将我国发现的Ｂ细胞表位ＮＫＮＤＤ基因经８次串联后融合其中。两种形式的融合基因经测序正确后转入大肠杆菌ＴＫ１０４６中，产量分别为１０ｍｇ／Ｌ及５ｍｇ／Ｌ。表达产物ＣＴＢ／ＡＷＴＥ经亲和层析纯化双抗夹心ＥＬＩＳＡ测定表明，该融合蛋白在保留了与抗ＣＴＢ抗体结合的同时，与抗ＮＫＮＤＤ单抗的结合效价达１：８０００。

摘要:研究了大鼠睾丸黄体生成素受体剪切变异体ｃＤＮＡ在昆虫细胞中的表达，并对其产物性质作了初步鉴定。ＳＤＳＰＡＧＥ银染和免疫印迹结果显示，表达产物呈两条带，分子量为３８.５ｋＤａ的主带和分子量为４０ｋＤａ的次带。^１２５Ｉ.ｈＣＧ结合印迹分析表明，表达产物Ｒ３１６具有与配基专一性结合的生物活力。竞争性配基结合曲线和Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析结果显示，重组受体Ｒ３１６和配基ｈＣＧ有较高的亲和力，平衡解离常数Ｋｄ为８.１５×１０^－１０ｍｏｌ／Ｌ。表达产物为与膜结合的蛋白，在条件培养基中未检测到它的存在

摘要:以质粒ｐＴ７-７和ｐＢＲ３２２为载体，构建ＧｌｙＡ基因的重组质粒，继而得到１２株基因工程菌（ＣＷＳ系列）。其中，高表达菌株ＣＷＳ-７的ＳＨＭＴ酶表达量占全菌可溶蛋白的４７％，是其宿主菌的５６倍；改善培养条件后，ＣＷＳ-７中ＳＨＭＴ酶活力可达宿主菌的１０６倍

摘要:含有枯草杆菌碱性蛋白酶Ｋｉ-２基因的１.９ｋｂＤＮＡ片段用限制酶切成几个小片段，将这些片段分别插入Ｍ１３ｍｐ１８或Ｍ１３ｍｐ１９中，用通用测序引物测得全序列。所得全序列与蛋白酶Ｅ相比较，在结构基因部分仅有８个碱基不同，由此而导致两个氨基酸的差异。此１.９ｋｂ的片段插入枯草杆菌大肠杆菌穿梭质粒Ｐｂｅ-２，得到的重组质粒转化蛋白酶缺陷型的枯草芽孢杆菌ＤＢ１０４，结果表明枯草杆菌碱性蛋白酶Ｋｉ-２基因在ＤＢ１０４中能利用自身的调控元件表达并分泌到胞外。将Ｋｉ-２蛋白酶的２２２位甲硫氨酸突变成丙氨酸，突变后的Ｋｉ-２蛋白酶具有抗氧化性，但比活性比野生型的约低１倍

摘要:合成了３′末端三个磷酸二酯键硫代修饰的针对ＤＮＡ聚合酶α的反义核苷酸ＡＳα，利用［３Ｈ］ＴｄＲ参入方法测定了ＡＳα对于ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ复制的抑制效力。结果表明，这种修饰明显增强了寡核苷酸在含血清的细胞培养液中的稳定性。Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ能够促进ＡＳα的入胞并且增强其抑制效力。ＤＥＡＥＤｅｘｔｒａｎ也能提高ＡＳα的效力

摘要:测定了球形红假单胞菌原核细胞与酿酒酵母真核细胞的原生质体形成、再生及融合最佳组合条件。以溶菌酶ＥＤＴＡ反应系统处理球形红假单胞菌Ｐ９４７９，最适脱壁条件为：溶菌酶浓度０.５ｍｇ／ｍｌ，ＥＤＴＡ浓度为０.２％，蔗糖浓度２０％，酶作用时间为４０ｍｉｎ；此条件下原生质体形率为７８.９％，再生率为１１.２％。用蜗牛酶巯基乙醇反应系统处理酿酒酵母Ｙ９４０７，最适脱壁条件为：蜗牛酶浓度１.０％，巯基乙醇浓度０.１％，蔗糖浓度２０％，酶作用时间为３０ｍｉｎ；此条件下酵母原生质体形成率为９９.８％，再生率为９.７％。用聚乙二醇诱导Ｐ９４７９与Ｙ９４０７的原生质体发生融合，当聚乙二醇的浓度为３０％，Ｃａ２＋浓度为５０ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ为６.５，时间为１０ｍｉｎ时，有最高的融合率为７.６×１０－６。

摘要:基因工程菌的发酵工艺研究在生物高技术产业化的发展中具有重要的意义。研究结果表明，每１０Ｌ发酵液可得１～２ｋｇ湿菌体，发酵时间从一般的２４～３０ｈ缩短到６～８ｈ，５Ｌ、１５Ｌ、１５０Ｌ发酵罐都可得重复性的结果。这项发酵工艺研究不仅适用于Ｅ．Ｃｏｌｉ各种不同类型的表达启动子的工程菌，也适用于野生菌株疫苗等的生产，将对我国基因工程产业化起重要作用。

摘要:采用酵母表达载体进行重组人α８型干扰素（ＨｕＩＦＮα８）的表达，该表达菌株可将重组α８型干扰素分泌进入培养基中，回收培养基进行纯化，然后利用超滤浓缩，先过Ｓ．ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱，再进行ＤＥＡＥ-ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ层析和Ｇ-２５脱盐，最后用高效液相ＨＰＬＣ，ＳＤＳ-ＰＡＧＥ丙烯酰胺凝胶电泳及肽图等方法对纯化产品进行鉴定。采用以上两步纯化方法纯化酵母分泌表达的重组人α８型干扰素纯度可达９５％以上，其比活性为３.０×１０^８ｕ／ｍｇ。

摘要:将人α１ｂ型干扰素（ＩＦＮ-α１ｂ）基因插入带有原核增强子样序列的新型载体Ｐｂｖ３２２，使干扰素在大肠杆菌中的表达水平明显高于原表达载体，达到１.６×１０^８ｕ／Ｌ培养液。重组质粒的特点是：含增强子序列Ｘ，ｔｒｐ启动子控制。利用ＤＥＡＥ-Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、ＣＭ-Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析及单克隆抗体亲和层析纯化ＩＦＮ-α１ｂ，获得了电泳纯产品，其比活性为２×１０^７ｕ／ｍｇ，分子量为１９ｋＤａ。此外，用Ｐａｔ１５３代替Ｐｂｖ３２２，构建了带有和不带有Ｘ序列的两种表达载体，平行对比表明增强子Ｘ序列可以将ＩＦＮ-α１ｂ表达提高４倍

摘要:利用鼠鼠杂交瘤细胞（ＷＵＴ３）研究培养基中不同浓度的肉毒碱对细胞生长、葡萄糖利用速率、乳酸、氨、单克隆抗体生成速率的影响。结果表明，增加肉毒碱浓度（从０％～０．０４％），细胞生长速率增加；葡萄糖消耗，乳酸生成，氨生成速率降低；单抗生成速率增加，当肉毒碱浓度达０.０４％时，细胞最高密度增加１／３，葡萄糖消耗速率减少１／３，氨生成速率降低约４０％，单抗生成速率增加约５０％，乳酸生成速率降低５０％，消耗的葡萄糖进入ＴＣＡ循环比例增加，当葡萄糖浓度降低到０.４ｇ／Ｌ时，葡萄糖已不再被利用

摘要:以鸡传染性法氏囊病病毒内蒙古毒株（ＩＢＤＶ-ＮＭ）ｄｓＲＮＡ为模板，用ＲＴ-ＰＣＲ法扩增其主要寄主保护抗原ＶＰ２基因的全长ｃＤＮＡ，克隆于ｐＵＣ１９的ＸｂａＩ／ＫｐｎＩ位点，进行了全序列分析。序列比较发现ＩＢＤＶ-ＮＭ毒株ＶＰ２基因与已报道的其它７个ＩＢＤＶＣＪ８０１ｂｋｆ、Ｃｕ１、ＰＢＧ９８、５２／７０、００２—７３、ＳＴＣ及ＶａｒｉａｎｔＥ毒株之间高度同源，其核苷酸序列的同源率为９１.６％～９６．２％，推测的氨基酸序列的同源率为９６.２％～９８．６％。ＩＢＤＶ-ＮＭ毒株ＶＰ２高变异区的第一个亲水区氨基酸序列与ＣＪ８０１ｂｋｆ、Ｃｕ１、ＰＢＧ９８、５２／７０、ＳＴＣ、００２—７３比较，有一个氨基酸差异，第二个亲水区氨基酸序列与上述６个毒株完全相同。而与ＶａｒｉａｎｔＥ比较，两个亲水区内各有两个氨基酸差异。此外，ＩＢＤＶ-ＮＭ毒株ＶＰ２具有强毒株所特有的７肽保守区：ＳＷＳＡＳＧＳ。这些结果表明，ＩＢＤＶ-ＮＭ毒株为标准血清Ⅰ型ＩＢＤＶ强毒株。

摘要:ＧＭ-ＣＳＦ高亲和力受体至少由两条链组成，低亲和力的α链及无结合力活性的β链。本文采用ＲＴ-ＰＣＲ的方法，从ＧＭ-ＣＳＦ依赖细胞株ＴＦ-１中克隆了全长的ＧＭ-ＣＳＦＲα链Ｃｄｎａ（包括信号肽部分），经酶切及全基因测序鉴定，并分别在原核及真核细胞表达系统中表达。在大肠杆菌中ＧＭ-ＣＳＦＲα以ＧＳＴ融合蛋白形式表达，谷胱甘肽Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析纯化融合蛋白。ＧＳＴＣＳＦＲαＣ无受体活性，推测主要与缺乏翻译后修饰有关。将全基因克隆入真核表达载体Ｐｓｖｌ中，转染ＣＯＳ-７细胞瞬时表达以重建ＧＭ-ＣＳＦ的低亲和力受体，１２５ＩＧＭ-ＣＳＦ平衡结合实验证明转染后的ＣＯＳ-７细胞膜上有受体的表达，Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ显示表达的受体α链分子量略低于ＴＦ-１细胞。胞外区基因（ＣＳＦＲαＢ）克隆入Ｐｓｖｌ构建的Ｐｓｖｌ／ＣＳＦＲαＢ表达载体，转染ＣＯＳ-７细胞后，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表达细胞上清，有单一的反应带，表达上清有ＧＭ-ＣＳＦ的受体活性。

摘要:以质粒Ｐｕｃ１８为载体，从枯草杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）ＤＢ１０４基因组中克隆到一个内切葡聚糖酶基因。限制酶切分析表明重组质粒中的插入片段为３.５ｋｂ，其中各含有一个ＥｃｏＲＩ，ＨｉｎｄⅢ和ＰｖｕⅡ位点。该插入片段含有一完整的内切葡聚糖酶基因，其自身启动子能被大肠杆菌转录系统所识别。当加入ｌａｃＺα基因启动子的诱导物ＩＰＴＧ后，内切葡聚糖酶表达量提高２.８倍。加入０.５％葡萄糖能抑制该基因的表达。该基因在大肠杆菌ＤＨ５αＦ′中表达的内切葡聚糖酶分布为：胞外６７.３％，胞间周质３.９％，胞内２８.８％。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实了该插入片段来自供体菌Ｂ．ＳｕｂｔｉｌｉｓＤＢ１０４。

摘要:为了预测外源基因在Ｅ．Ｃｏｌｉ中的表达水平，我们分析外源基因在固定载体Ｐｂｖ２２０中表达水平的实验数据，结合有关参考资料，提出预测外源基因表达水平的一组判据：在ＡＵＧ附近的ＲＮＡ二级结构能量，ＡＵＧ附近的密码子自适应指数，ＲＢＳ和ＡＵＧ距离及ＡＵＧ附近的构象。在表达实验前可利用这些判据对外源基因作改造以获得高效表达

摘要:从已克隆的含７号淀粉酶链霉菌Ｍ１０３３菌株产葡萄糖异构酶基因的质粒ｐＵＢ中，用ＤｄｅＩ和Ｋｐｎｌ酶解，分离出酶结构基因，以平端方式与大肠杆菌质粒ｐＴ７-７连接，构建了重组表达质粒ｐＴＫＤ-ＧＩ。将ｐＴＫＤ-ＧＩ转化到特异大肠杆菌寄主Ｋ３８，经４２℃热诱导，所产葡萄糖异构酶占菌体可溶性蛋白３５％。通过ＤＥＡＥ－Ａ５０柱和Ｇ－１５０柱层析，发酵液可获电泳纯蛋白３４ｍｇ／Ｌ。

摘要:建立了一个实验室制备重组ｈＧＭ-ＣＳＦ的培养、复性和分离纯化的技术工艺。通过对ＰＥＧＭ工程菌的生长和诱导表达等条件的初步调整，使ｈＧＭ-ＣＳＦ的表达量从１６.９％提高到３２.３％，获得０.７４９ｇ／Ｌ的包含体，纯度为６５％；包含体用６ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍溶解和稀释复性后，经ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ．ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ２００ＨＲ层析分离，制得纯度达９７％以上、比活性为３.０×１０^７ｕ／ｍｇ的ｈＧＭ-ＣＳＦ，纯化总回收率约为５％

摘要:马铃薯生产种和野生种叶肉原生质体碘乙酰胺和罗丹明６Ｇ的失活浓度以及影响其失活的因素。结果表明：不同种（或品种）其碘乙酰胺和罗丹明６Ｇ失活浓度不一样，野生种失活浓度普遍较生产品种高。影响失活的主要因素包括：材料的基因型，失活剂处理时间，处理液的ｐＨ和成份等。采用高于失活浓度的处理浓度有利于融合后杂种细胞的准确筛选

摘要:在转化前将受体材料转移到高渗培养基上，即用含有一定浓度的甘露醇和山梨醇的培养基对受体材料进行处理。基因枪轰击后把受体材料转出，结果表明，这样做明显提高了瞬时表达（ＧＵＳ基因的表达）效果，用可筛选的标记基因（潮霉素磷酸转移酶基因，ＨＰＴ）试验表明，经高渗处理后，稳定转化的效率也有提高。用基因枪将带有ＨＴＰ基因的粒子轰击其盾片，经过筛选及植株再生，获得了转基因植株，ＰＣＲ扩增反应及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明了外源基因已整合入水稻的基因组

摘要:根据抗体基因可变区两端保守序列ＦＲ１和ＦＲ４，设计并化学合成轻重链ＰＣＲ扩增引物。从体外培养细胞ＵＣＨＴ１中提取总ＲＮＡ，反转录成Ｃｄｎａ，以Ｃｄｎａ为模板经ＰＣＲ扩增轻，重链可变区基因片段。将扩增片段克隆至Ｐｕｃ１９质粒，筛选阳性克隆并测序，序列分析结果为重链３６６ｐｂ，编码１２２个氨基酸，轻链３２７ｂｐ，编码１０９个氨基酸

摘要:构建了纤维结合素（ＦＮ）的双功能结构域重组多肽的两个表达质粒，在大肠杆菌中表达了两个重组多肽：ＣＨ５０（ＦＮ的Ｐｒｏ１２３９Ｓｅｒ１５１５经Ｍｅｔ和Ａｌａ１６９０Ｔｈｒ１９６０相连）和ＣＨ５６（ＦＮ的Ｐｒｏ１２３９Ｔｈｒ１９６０）。两个多肽都具有结合肝素的功能，可通过肝素琼脂糖亲和层析得到纯品，所得纯品亦都具有结合细胞的功能。ＣＨ５０和ＣＨ５６的制备为进一步研究其抑制肿瘤转移的作用奠定了基础

摘要:为了探明^６０Ｃｏ-γ射线对簇毛麦愈伤组织的细胞分裂及染色体变异的影响，采用１０－３００Ｇｙ剂量辐照，结果表明７０～３００Ｇｙ引起细胞的间期致死，３０－６０Ｇｙ引起分裂致死。１０－６０Ｇｙ均能引起染色体的结构及数量变异，其中有利于融合双方染色体整合或重组的片段化在６０Ｇｙ辐射后第３天频率最高。愈伤组织在继代后的天数明显影响辐照效应

摘要:固定化假丝酵母（Ｃａｎｄｉｄａｓｐ．）－１６１９脂肪酶催化脂肪酸和不同聚合度的乙二醇形成酯。其中以聚乙二醇４００（ＰＥＧ４００）的酯化率较高，Ｃ_１０－Ｃ_１８的饱和脂肪酸与ＰＥＧ４００反应的酯化率相仿。反应体系中，月桂酸与ＰＥＧ４００的摩尔比大于２∶１时有利于酯化反应，作用的最适温度为４０℃，最适Ｐｈ为６.０。在比较的３０种添加有机溶剂中，饱和烷烃，芳香烃能促进反应，使酯化率提高２０％左右。反应开始添加５μｌ水有利于酶的作用，外加水量超过适量时，随外加水量的增加酯化率下降。在由２.５ｍｍｏｌ月桂酸，１.２５ｍｍｏｌＰＥＧ４００，１０ｍｇ固定化脂肪酶（１００ｕ），５ｍｌ己烷，５μｌ水组成的反应体系中，４０℃振荡反应２２ｈ，酯化率达４９.８％。经薄层色谱，气相色谱鉴定，产物为聚乙二醇４００月桂酸酯。

摘要:采用肝癌细胞系与聚砜中空纤维建立了固定化细胞反应器，观察并测定了反应器的运行及体外功能。实验结果表明ＳＭＭＣ-７７２１肝细胞系不仅可在聚砜纤维表面生长繁殖，而且保留其在体外静态培养时的生物学特性如尿素合成及极低的苯巴比妥生物转化。由于细胞功能与中空纤维材质性能有关，因此，用这一个反应器可以饰选和评价聚砜及其它中空纤维，为人工肝装置选材打下基础

摘要:用吸附包埋法将己酸菌和产酯酵母共固定在海藻酸钙棉纤维上，在帘式生物反应器中进行分批式发酵。最适ｐＨ为６.５，温度３０～３５℃。经过共固定１０批发酵，历时１００ｄ，凝胶的稳定性良好，己酸乙酯产量也稳定在１.９～２.３ｍｇ／ｍｌ之间，经对比试验证明，用共固定法合成己酸乙酯比游离细胞混菌发酵法产量提高约２２％。

摘要:以人粒巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭ-ＣＳＦ）、人α８干扰素（ｈＩＦＮ-α８）和分裂细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的ｃＤＮＡ定点突变为例，建立了一种新的大区域非连续多核苷酸同步定点突变的方法。经碱变性后的质粒ＤＮＡ，先用突变引物延伸单链，然后通过ＰＣＲ扩增得到突变双链ＤＮＡ。用该方法成功地改造了ｈＧＭ-ＣＳＦ基因５′端３６个核苷酸中的９个位点、ＩＦＮ-α８基因５′端３９个核苷酸中的９个位点和ＰＣＮＡ基因ＳＤ顺序两侧６个和７个核苷酸。与经典的含Ｕ单链寡核苷酸定点突变方法相比，本方法突变效率高，并省去了对突变克隆杂交筛选的操作

摘要:作者证实在大肠杆菌中表达的人骨形成蛋白-２Ａ（ｈＢＭＰ２Ａ）Ｃ端肽段具有骨诱导活性，再利用噬菌体呈现载体克隆并表达了ｈＢＭＰ２ＡｃＤＮＡ３’端５６７个核苷酸，表面呈现有人ＢＭＰ２ＡＣ端肽段的噬菌体与小鼠成骨细胞系（ＭＣ３Ｔ３）能够特异地结合，用抗Ｍ１３噬菌体抗体进行ＥＬＩＳＡ实验呈阳性反应，同时用^３ＨＴｄＲ参入重组ＢＭＰ２Ａ噬菌体时放射性计数比对照组高近１０倍，推测小鼠成骨细胞表面存在有人ＢＭＰ２Ａ受体。

摘要:通过单倍体分离和紫外诱变，获得了１４株树干毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｓｔｉｐｉｔｉｓ）７１２４和酿酒酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）１３００的营养缺陷型突变株。用聚乙二醇（ＰＥＧ）和电诱导融合及致死融合等方法，实现了树干毕赤酵母和酿酒酵母的属间原生质体融合。融合子能发酵木糖产生酒精，其厌氧发酵木糖和木糖葡萄糖混合液的能力明显优于亲株，耐酒精的性能也比亲株树干毕赤酵母７１２４有所提高。融合子经ＤＮＡ含量、细胞体积测定和稳定性能实验证明为稳定融合子。

摘要:用单孢子分离、单倍体诱变、原生质体融合等手段，获得了酵母菌株——科生９０６４。用该菌的固定化细胞进行发酵玉米糖化醪生产酒精的扩大试验。经８个月的吨级生物反应器运转试验结果证明，该酵母凝胶粒子活性稳定，在玉米糖化醪液初糖浓度为１８％～２０％，ｐＨ值４.０～５.０，温度为３８～４０℃的条件下，发酵时间约为２０ｈ，终酒精含量达９％～１１％（Ｖ／Ｖ），残糖含量为１.０％以下，理论转化率达９０％以上。并对新菌株的培养形态及生理生化特征等进行了研究，证明它是一株新型的酿酒酵母菌

摘要:用聚乙二醇（ＰＥＧ）／羟丙基淀粉（ＲｅｐｐａｌＰＥＳ）双水相体系两步法从黄豆中分离磷酸甘油酸激酶（ＰＧＫ）和磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）。ＰＧＫ在上相收率及ＧＡＰＤＨ在下相收率均在８０％以上。放大采用离心倾析机（ｄｅｃａｎｔｅｒ）连续处理匀浆液，用离心萃取器（ｓｅｐａｒａｔｏｒ）完成双水相体系的萃取两相分离。整个工艺具有处理量大、接触时间短、酶收率高的优点

摘要:从化脓性链球菌的染色体ＤＮＡ分离得到的目的基因片段定向插入载体Ｐｂｖ２２０中，获得有目的基因插入的重组质粒ＰｂｖＳＫ。双脱氧链终止法手工测序和Ｂｅｃｋｍａｎ自动测序仪分析Ｒｓｋ基因的全长序列，测序结果表明我们所获得的Ｒｓｋ基因与文献报道的基本一致。重组质粒ＰｂｖＳＫ转化受体菌Ｅ．ＣｏｌｉＤＨ５α株，温敏诱导后表达一个分子量约４７ｋＤａ的特异蛋白，其表达量为６０％。表达产物以包涵体的形式存在，包涵体经过洗涤、溶解和纯化后，最终纯度达到９５％以上。复性的重组蛋白用体外血块溶解法测定生物活性，结果表明我们所获得的Ｒｓｋ蛋白具有较好的溶解血块的活性，其比活性为１.３×１０^５ｕ／ｍｇ。

摘要:在大肠杆菌中，影响苯丙氨酸生物合成的关键酶基因之一是ｐｈｅＡ基因。利用大肠杆菌棒状杆菌穿梭表达载体Ｐｌｃｘ３６克隆了一个对反馈抑制不敏感的大肠杆菌基因ｐｈｅＡ，组建成质粒Ｐｌｃｘ３７。Ｐｌｃｘ３７以接合转移方法转移到抗氟代苯丙氨酸的黄色短杆菌３６２１等菌株中，获得若干基因工程菌株。经发酵测定，编号为３６２１０９的黄色短杆菌的苯丙氨酸产量比出发菌３６２１高出１倍。最高达２６.２６ｍｇ／ｍｌ。

摘要:采用连续悬浮培养技术，在３种培养基组成下实验考察了生物反应器中机械搅拌强度和气泡对细胞生长和破损或伤害的作用，发现杂交瘤细胞在无血清培养基中培养时，１２０ｒ／ｍｉｎ的机械搅拌强度对细胞产生了生理伤害作用，而造成细胞破损的主要是气泡。血清和ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８对细胞均有保护作用，它们的存在能保护细胞免受流体剪切的生理伤害作用，适应更高的机械搅拌强度，ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８能有效地防止气泡对细胞的破损作用。另外，对它的保护作用机理也作了讨论。

摘要:通过对链霉素发酵过程中历史最优水平及当前生产的基质补入与消耗数据的详细比较和分析，推出实际生产上补料操作中可能存在的问题，找到了基于实际情况的较优补料时间和补料量，并以此改进补料控制，使平均放罐效价比原先提高３０００ｕ／ｍｌ左右，获得较大的生产效益。

摘要:用二倍体龙牙百合鳞片为外植体，培养在添加２，４Ｄ，６-ＢＡ的ＭＳ培养基上，诱导愈伤组织、不定牙与小鳞茎分化，建立了二倍体的体细胞无性系。用浓度０.０２％～０.０５％的秋水仙碱或再加２％～４％的二甲基亚砜溶液处理二倍体小鳞茎、鳞片与愈伤组织均诱导出变异试管苗，通过多代筛选与增殖培养首次获得了变异苗无性系，选育出同源四倍体龙牙百合，其染色体数目为４８（２ｎ＝４ｘ＝４８）。同源四倍体苗粗壮，叶片宽而厚，小鳞茎增殖速度快，小鳞茎所含核酸、蛋白质、氨基酸、淀粉、脂肪、ＡＴＰ及维生素Ｂ２的量均高于二倍体

摘要:通过固体液体培养方式筛选得到的芹菜胚性愈伤组织悬浮物接种于低剪切力的搅拌通气式反应器中。在ＭＳ附加ＫＴ０５ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ５００ｍｇ／Ｌ的分化培养基中，２４ｄ后获大量正常芹菜体胚。对芹菜愈伤组织培养物在反应器分化培养过程中通气与搅拌速率，ｐＨ值的调节控制，反应器中溶解氧（ＤＯ）及生长曲线和生长动力学参数均作了研究，以２０％（鲜重）的接种培养时，较佳的初始ｐＨ值为５.３～５．８，控制ｐＨ值在５８上下波动，通气量及搅拌浆速率操作范围分别为６００～８００ｃｍ^３／ｍｉｎ及４０～６０ｒ／ｍｉｎ，随着不同生长时期的不同需要在此范围内调节。培养２４ｄ后，获得正常子叶期体胚为１０２个／ｍｌ，用海藻酸钠包埋后获得的人工种子在无菌条件下的萌发率为６４％，接近摇床培养结果。

摘要:用圆盘型聚酯载体筐架式填充床内作为细胞生长分裂的支持物，通过笼状唧筒生物反应器连续培养能合成和分泌ｒｔＰＡ的工程细胞，经２８ｄ连续灌注培养，细胞密度达４.７×１０^７／ｍｌ，ｒｔＰＡ浓度最高达９.９μｇ／ｍｌ，ｒｔＰＡ活性最高达４０６８ＩＵ／ｍｌ。

摘要:用基于△规则和最速下降法的反向传播算法构建了一个能够超前１ｈ预测青霉素补料分批培养状态变化的人工神经网络模型。分别考察了不同隐层层数及神经元数、不同步长、不同初始权矩阵及不同收敛准则对人工神经网络模型的影响。研究结果表明：当网络拓扑结构为５-３-５-３，步长为１、初始权值取０.９８及收敛准则为１０^-１０时，所得到的模型能够很好地描述青霉素补料分批培养过程

摘要:在着重考虑基质浓度对发酵过程影响的基础上，结合黄色短杆菌ＦＢ４２发酵的具体特点，建立了一组描述赖氨酸分批发酵过程的动力学模型。结果该组模型能很好的拟合发酵过程，并在初糖浓度变化较大的范围内表现出适用性。用该组模型对赖氨酸发酵过程进行分析得到了和实际发酵相一致的结果

摘要:利用固定化葡萄糖氧化酶酶膜和过氧化氢电极组成酶电极测定葡萄糖淀粉酶的活性单位。用已知单位的葡萄淀粉酶作为测定标准定标后，在仪器上直接测出被测样品的葡萄糖淀粉酶活性单位，测定时间１４０ｓ，操作周期３ｍｉｎ，连续１０次测定ＣＶ值为０.６７％，５０～５００ｕ／ｍｌ的范围内线性良好，ｒ＝０.９９９９。

摘要:选择了青霉素、古龙酸、二元酸和葡萄糖酸发酵等四个体系，对ＣＯ_２释放速率［ＣＥＲ］的变化规律进行了研究，结果表明，无论对于霉菌、酵母菌、细菌，单液相体系、双液相体系，纯种发酵、混合菌发酵，［ＣＥＲ］的变化与体系状态的变化有着密切的联系，根据［ＣＥＲ］的变化规律可以有效、准确地把握发酵过程。

摘要:用生物表面活性剂鼠李糖脂可以较好地脱附土壤及水溶液中的多环芳烃，以有利于多环芳烃的进一步生物降解或化学降解。研究了鼠李糖脂对多环芳烃增溶及脱附的各种最佳条件。

摘要:螺旋藻从培养液中吸收ＣＯ_２是培养液ｐＨ值升高的主要原因。应用化学平衡移动原理和培养液中３种碳源形态（ＣＯ_２、ＨＣＯ^－_３、ＣＯ^２－_３）相互转变化学反应平衡常数阐明了培养液ｐＨ值变化的机理，定量描述了ｐＨ值变化与碳源转化利用率之间的关系。利用ＮａＨＣＯ_３为碳源培养螺旋藻，碳源利用率与培养液ｐＨ值相对应；利用ＣＯ_２为碳源培养螺旋藻，碳源利用率在任何稳定的ｐＨ值下都是１００％。理论计算结果初步得到实验室内培养试验和１００００ｍ^２培养面积工业化生产螺旋藻统计数据的验证。研究结果揭示了螺旋藻培养系统的一个重要特点：监测ｐＨ值的同时实现了对碳源的监测；添加ＮａＨＣＯ_３或ＣＯ_２，同时实现了对碳源和ｐＨ值的调控。为连续培养过程中ｐＨ值和碳源的调控提供了科学依据

摘要:用微量热仪测定了人参对金黄色葡萄球菌促进代谢作用和对大肠杆菌、枯草杆菌抑制代谢作用的热谱图，并按微生物生长的新模型进行了数学处理，得出了生长速度常数，进而获得了人参促菌的最低用药浓度和人参抑菌的最佳用药浓度。

摘要:以酿酒酵母和糖化酵母为亲本，通过正交实验优化了亲本原生质体的制备，再生以及融合的最佳条件，由此获得了既具有糖化能力又可产高浓度酒精的稳定的酵母融合菌株。融合株的体积较亲株大，ＤＮＡ含量与两亲株ＤＮＡ含量之和相当，淀粉水解能力，葡萄糖发酵效率，生长速率及产酒精能力等均优于亲株

摘要:牛碱性成纤维细胞生长因子在酵母系统中的表达方向东陈淳谢志伟耿解萍王小宁戚正武（中国科学院上海生物化学研究所国家分子生物学实验室上海２０００３１）碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）是ＦＧＦ家族中具有代表性的成员。分子中无糖基化位点，为一单链阳离子多肽，与肝素有很强的亲和能力。它广泛存在于机体的各种组织中，是重要的神经营养因子和血管生成因子，在胚胎发生、生长发育及血管形成等多种生理过程中起重要作用。

摘要:在医药和工来上，许多非常有应用前景的真核多肽，往往由于它们天我来源缺乏，不能充分提供产品，限制了它们的应用范围。通过基因克隆技术使基在大肠杆菌中表达，这就能为这些蛋白质提供丰富的来源。然而，在细菌中表达的重组蛋白擀在细胞内常以下溶性的没有生物活性的包含体形式累积，从这些包含体中恢复重组蛋白质的生物活性成为DNA重组技术广泛应用的一个重大课题。

摘要:纤溶酶原激活剂（Plasminogen Activator,PA）对血液中蛋白水解酶的活性有重要的调节作用。纤溶酶原激活剂的抑制物（Plasminogen Activator Inhibitor,PAI）可物异地抑制PA（t-PA和u-PA）,其作用迅速，是PA活性的重要调节因子。很多证据表明，PAI、Pat和体内许多生理反应有密节的关系，如炎症^[1]、组织重塑^[2]、肿瘤生长及恶性细胞的转移^[3,4]等。目前已发现了四种类型的PAI,PAI-2是基中的一种，它可由人胎盘滋养层细胞合成，在孕妇血浆中大理存在^[5].该蛋白具有两种形式：一种分子量为43~47kDa的非糖基化形式：另一种分子量为58~60kDa的糖基化形式^[6,7].对其结构与功能深入的研究将有助于了解许多生于现象，但由于PAI-2基因在大肠杆菌和哺乳动物细胞中的表达都不理想，不能获得足够量的该活性蛋白，本文在以轩状病毒为载体在昆虫细胞中成功地表达了该基因。

摘要:皮质醇是重要的甾体激素类药物之一，目前国内采用的紫色犁头霉菌（Absidia orchidis）催化11-脱氧皮质醇醋酸酯（RSA）生成皮质醇。RSA着先转化为中间体11-脱氧皮质醇（RS），在11-位羟化酶作用下生成皮质醇（β体）和表皮质醇异构体（a体）及少量副产物，其中β体为目的的产物。反应是在水相中进行的，存在着反应底物浓度低，皮质醇产率低，仅为45%~50%，β体与a体的比值（β/a）为0.9-1.2且不能连续生产等问题^[1].有文献报道^[2-3]，在反应体系中加入有机溶剂可影响酶催化的立体选择性。为此本文采用固定化细胞，在反应体系中添加一定量1.2-丙二醇，以增加底物（RSA）的溶解性，并试图提高产物中β/a值，提高β体的产率。

摘要:酶曾-度被认为只能在水介质中起催化作用，而有机溶剂则会使其失活。由于大量化学反应都是在有机深剂中进行的，使得酶催化在有机合成中的应用受到极大限制。近年来少研究表明，只要条件合适，酶催化在有机介质中也可进行^[1.2],并已在实际应用中显示其优点，如肽的合成^[3,4]、旋光性物质的合成^[5,6]、不溶于水的化学物质的酶法分析^[7]、酯和酯交换反应^[8,9]、甾体氧化^[10]、脱氢的应^{[10]、酚类聚合反应[12].与一般化学催化相比，生物催化剂（酶）除了催化效率高，反应秉公执法曙和外，它具有亚格的选择性。例如对反应的专一性，化学基团的选择性，位置的选择性和对映选择性，因此，酶催化物别适合那些一般化学方法难以实现的手性化合物的选择性转化[13,14].}

摘要:β-淀粉酶是一种外切型淀粉水解酶，它从淀粉的非还原性末端依此水解α１４葡萄糖苷键，产生β-构型的麦牙糖，在食品、医药工业上有很大用途，但目前工业上使用的β-淀粉酶大多为植物来源。微生物β-淀粉酶的研究自70年代以来陆续有文献报道^[1-6]，但至今人才济济 有理想的工业生产菌株推出。我们实验室经过前几年的研究，已得到一株热稳定β-淀粉酶的产生菌株^[7]，但以往的发酵研究都在摇瓶内进行，就生产应用而言，必须进行自控小罐的发酵条件试验，以便逐级放大进行中试，最后达到生产规模。本文报道热稳定β-淀粉酶产生菌高温放线菌A61菌株在5L自控发酵罐内的发酵优化研究。

摘要:酵母Saccharomyces cerevisiae作为传统酿造微物生及最简单的真核细胞，以其安全、易培养和可进行翻译后加工等优点而被认为是重要的基因工程寄主菌，已有多种真核基因如人胰岛素、生长激素、γ-干扰素等在酵母中表达成功^[1-3].利用酵母系统生产外源蛋白质时，除保持质粒稳定和启动子诱导基因表达外，还需设法使产物分泌，后者对正常生长、产物稳定和分离提纯至关重要。所以，酵母工程菌的培养具有其物殊性，其培养工程成为有意义的研究课题。本文选择一株产a-淀粉酶基因工程酵母，试图通过其培养条件研究，提出一套简便的大规模培养酵母工程菌生产基因产品的方案。

摘要:壳聚糖是由是虾、蟹壳蛋白中提取的一种氨基多糖（２氨基１，４-β葡聚糖），呈网状结构，由于其来源丰富，制备简单，化学性质稳定，耐热和具有良好的机械性能，是固定化酶的良好载体，在医药及工业上有着广阔的应用前景^[1].为此探索酶固定化方法，提高酶利用率，活性回收率，提高稳定性和使用周期是固定化酶研究的重要课题。戊二醛交联法是制备固定化酶常用的方法，为防止戊二醛直接和载体分子中氨基间可能会发生的交联反应，本文采用醛基保护改进戊二醛交联法制备了壳聚糖固定化酶，并对其酶利用率，活性回收率进行了观察和比较。

摘要:蚯蚓纤溶酶是由日本宫崎医科大学的Ｍｉｈａｒａ^［１］于１９８２年从蚯蚓的肠和体液中发现的。由于蚯蚓纤溶酶有良好的溶解血检的作用，可以治疗一系列与血栓形成有关的疾病，因而在临床上有很大的应用价值^[2]，有可能成为一种新型的溶栓药物，继尿激酶、链激酶等之后应用于临床[4].关于蚯蚓纤溶酶的分离纯化，大多采用盐析、凝胶层析及离子交换层析等方法^[2-6]，也有人采用亲和层析的方法^[7].本文以赤子爱胜蚓纤溶酶粗品为对象，对用反相色谱技术分离蚯蚓纤溶酶进行了初步尝试，现将结果报道如下。

摘要:精子充当外源ＤＮＡ的载体提出了一条新的基因转移途径。由于这个构想方法学非常简单，利用人工授精程序就可以生产转基因动物，因而引起人们广泛的注意^[1].精子载体法一出现就引发了一场争论，对于这种方法的可行性人们仍持谨慎态度^[2-3].精子在与外源DNA混合培养后DNA能否进入精子的内部，这是精子载体法是否可行的关键。本文应用Southem杂交技术分析了精子与外源DNA的相互作用。

摘要:体细胞胚胎发生已经成为许多植物细胞全能性得以实现的主要途径，黑麦也不例外。许多报道就外源生长素物质（2，4-D、Dicamba^[1]、CPA^[2]、Picloram^[3]）、细胞分裂素类（6-BA^[4]）以及ABA^[5.6]等激素物质对体细胞胚胎发生的促进作用作了较为详细的论述。但是，阐明体细胞胚胎发生的内在原因，对这一技术的完善将具有更为实质性的意义。本试验正是基于这一思路，对黑麦体细胞胚胎发生过程中内源IAA和Zt的变化进行了初步研究。

摘要:玫瑰茄（Ｒｏｓｅｌｅ）是锦葵科木锦属一年生直立草本植物，广泛分布于全世界各热带、亚热带地区。在我国福建已有生产性栽培，在广东、广西、云南等省亦有栽培。但主要作纤维性原料出口。而玫瑰茄具有多种济价值，其中花萼为紫红色，颜色鲜艳，已经作为提取花青苷色素的合适原料而受到重视。由于受到地域、气候等条件的限制，通过大面积栽培植物来获取产物的方法有较大的局限性，而植物细胞培养技术的发展为天然色素的生产提供了新途径^[1].本文研究了玫瑰匣细胞悬浮培养过程中，碳源、氮源和pH值对细胞生产及花青素形成的影响，为进一步研究花青素生物合成的代谢调控以及采用大规模细胞培养来生产花青素打下了基础。

摘要:所谓外源刺激物（ｅｌｉｃｉｔｏｒｓ）是指一些生物（多为真菌提取物）的或非生物的分子，它们能够通过信号传导途径，刺激植物发生防御反应，诱导特定的次级代谢产物的形成和积累^[1,5]。目前，有关elicitors对植物细胞次级代谢的影响和机制的研究引起了人们的普遍关注。我们曾经报道了以土壤农杆菌感染，Ti质粒转化得到的长春花冠瘿细胞，无论在生长还是在具有药用价值的次级代谢产物吲哚生物碱含量方面，都优于一般细胞培养常用的愈细胞^[2].本文研究了深红酵母匀浆物和果胶降解物作为外源刺激物，对长春花冠瘿细胞生长和吲哚生物碱含量的影响。

摘要:古蔺野连（又称串珠连Ｃｏｐｔｉｓｇｕｌｉｎｅｎｓｉｓ）为黄连属植物中的一个野生珍稀品种，只生长在我国西南少数山区，其根茎可作中药黄连，含有与商品黄连相同的小檗碱等化学成分^[1].作者在对黄连细胞培养研究中，通过目视法和TLC比较，从古蔺野连的愈伤组织中初步筛选到了生物量增长较快、生物碱合成能力较为稳定的无性系H292,进行了其生物量及生物碱含量的动态测定。本文报道植物激素、温度、光照等对黄连愈伤组织生长和生物碱合成能力的影响。

摘要:从红豆杉科红豆杉属植物如短叶红豆杉（Ｔａｘｕｓｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）等的树皮或枝叶提取到的紫杉醇（Ｔａｘ-ｏｌ）是一种具有强抗癌活性的二萜烯类化合物^[1].作为一种治疗晚期卵巢癌、乳腺癌的新药已经在欧美等一些国家被批准上市，成为迄今从植物中提取的最有效的抗癌药之一^[2].但由于紫杉树皮来提取紫杉醇的方法如紫杉醇的化学合成、半合成，从真菌中提取紫杉醇以及改善红豆杉的栽培措施等等均已取得了较大进展，但离实际应用还相差太远^[5,6].而利用组织和细胞培养方法替代砍伐天然红豆杉树皮来提取紫杉醇，也已成为近几年来红豆杉研究的一个重要课题之一并已取得了较大进展^[7].云南红豆杉（Taxus yunnanensis）主要分布于我国云南省，是分布于我国的主要品种之一，其含量在我国现有的几种红豆杉植物中属于较高的一种^[3]，在我国，近些年来亦有不少实验室在红豆杉细胞培养方面取得了较好的成绩，但文献报道的较少^[8-10].本文报道利用云南红豆杉细胞培养方法来生产紫杉醇，以最终取代从天然来源的树皮和枝叶中提取的可能性，对云南红豆杉进行的愈伤组织的诱导和培养研究的进展。

摘要:环孢菌素的生物合成路线受添加外源氨基酸影响。Ｋｏｂｅｌ和Ｔｒａｂｅｒ^［１］报道过，添加与环孢菌素形成有关的特殊氨基酸可以提高环孢菌素某组分所占的比例。如ＤＬ-氨基丁酸能够提高环孢菌素A的产量，而抑制其它环孢菌素组分产生。本文报道添加L-和DL-缬氨酸对环孢菌素的主要成分环孢菌素A形成的影响。