摘要:木糖广泛存在于农副产业及林产业的木质废弃物中，利用微生物转化木糖产生乙醇的研究，对生物质再生资源的全利用有着重要意义。本文介绍了木糖代谢工程菌的研究进展和策略。

摘要:人白细胞介素12(hIL-12)是一种异源二聚体细胞因子，由p40和p35两个亚基通过二硫键连接而成。首先构建了两个表达载体pVL1392-hp40和pVL1393-hp35，并分别与线性化多角体病毒基因组DNA共转染昆虫细胞株Sf9，用目视法筛选出重组病毒AcNPV-hp40和AcNPV-hp35。利用PHA激活的人淋巴细胞增殖试验，在条件培液中检测到重组hIL-12的生物活性，表达量约为1.5～2μg/10⁶细胞。经实时BIA和Northern blot分析，hp35和hp40两亚基在昆虫细胞中获得表达。非还原条件下的Westernblot结果显示，重组hIL-12的表观分子量为76kDa，hp40同源二聚体的表观分子量为92kDa。重组ph40具有明显抑制hIL-12生物活性的作用。

摘要:分别以G200及其旁侧区的Y2587L、Y4073L和L688片段为探针筛选水稻基因组YAC文库，共得到4个阳性克隆，均与G200、Y2587L和Y4073L座位重叠，插入片段的大小为240～650kb。用反向PCR法分离YAC克隆插入片段的末端序列，并利用这些末端序列确定克隆的方向以及进行染色体步查，共筛选到7个YAC克隆，建立了一个8厘摩(cM)的G200 YAC重叠群。

摘要:组织纤溶酶原激活剂(tPA)是一种较理想的溶血栓药物，本研究采用其突变体——长效组织纤溶酶原激活剂(LAtPA)的cDNA作为目的基因，将它插入羊β-乳球蛋白(BLG)基因起始密码之前，使LAtPA的转录、翻译受控于BLG基因的5′、3′序列，再将所构建的BLG-LAtPA用显微注射方法建立转基因鼠，经点杂交筛选和Southern印迹鉴定，获得2只LAtPA基因整合阳性鼠，并在阳性母鼠乳汁中检测到有溶纤活性的LAtPA表达，表达水平1.5μg/ml。在这两只转基因鼠的9只F1代子鼠中，有5只是阳性的，tPA表达水平维持在1～2μg/ml，BLGtPA融合基因整合到小鼠基因组，能稳定地遗传给子代。

摘要:以甲醇酵母(Hansenula polymorpha)表达系统的Yip型表达载体pJF5-1为基础，通过引入宿主来源的一个rDNA随机顺序和由SV40早期启动子控制的G418抗性基因(neo)及对野生型标记基因Hpleu2启动子大部分上游序列的缺失，构建了一个高拷贝整合型表达载体pMIRH。有关转化、筛选和拷贝分析等试验结果表明，由pMIRH可产生含高拷贝数载体的转化子，并可通过由leu2+筛选和G418抗性筛选所组成的二级筛选方法富集这些含高拷贝数载体的转化子。有关完整DNA和消化DNA Southern杂交分析结果进一步表明，上述高拷贝数的载体以串联重复排列的方式整合于宿主基因组。

摘要:利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从欧芹总RNA分离制备了苯丙氨酸脱氨酶(PAL)cDNA，重组到质粒pBluescript及pET23b中，后者转化大肠杆菌JM109DE3获得PAL的高效表达。插入片段两端共920bp的测序结果与文献符合率为9978%。工程菌细胞裂解液用SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析显示在分子量77kDa处有一条表达很强的蛋白区带，与PAL亚基分子量相符，约占菌体总蛋白的15%。用HPLC法检测到苯丙氨酸被PAL脱氨的产物肉桂酸，且该PAL酶活力特异性好，适于PKU治疗之用。

摘要:以甲基丙烯酸缩水甘油酯纤维素复合膜为基质，分别以蛋白A(Protein A)、人免疫球蛋白G(HIgG)、三嗪染料(Cibacron blue F3GA)、亚胺二乙酸铜离子为配基，用不同方法制备了适合于分析及小量制备的高效亲和膜色谱介质，并对高效亲和柱的基本性能及其应用于各种相应蛋白的定量测定情况进行了考察。利用这种方法可以针对不同的目标蛋白及所存在的环境采用不同的配基，对各种蛋白的定量测定及小量制备可达到较为满意的结果。

摘要:应用自动控制发酵设备，首先进行分批发酵试验摸索了地衣芽孢杆菌2709生长与代谢的基本规律。然后采用补料分批发酵方法限制生长基质浓度，测定了一系列(S_I,μ_I)、(μ_j，q_pj)数据，获得K_S、μ_max、α、β等参数的值，并且推导出了细胞生长与产物合成的动力学公式，从而证明了用Monod方程描述地衣芽孢杆菌2709生长速率与基质浓度关系的合理性和合成碱性蛋白酶的发酵属于生长部分关联型。

摘要:从747条发根农杆菌ATCC15834转化的青蒿株系025发根中，筛选出7个生长较快的发根系，这7个系在生长速度和青蒿素含量上均有显著差异，其中发根系HR9青蒿素产率最高，达到每月3325mg/L。青蒿发根的生长量和青蒿素含量极显著高于未转化根和愈伤组织。青蒿发根在分批培养中没有明显的迟滞期，接种后第7天进入指数生长期，第11天生长最快，第20天进入稳定期。青蒿发根中青蒿素含量呈明显的“与生长相关”特性，在指数生长期，青蒿素含量缓慢下降，生长速度减缓后，青蒿素含量上升，发根生长停止后，继续延长培养时间，青蒿素含量也不再提高。在分批培养中，青蒿发根适宜的培养时间为21d。

摘要:应用蓝藻类金属硫蛋白基因启动子(smt O-P)的金属诱导性，在单细胞的聚胞藻PCC 6803中表达小鼠金属硫蛋白结构基因(mMT-1 cDNA)。在大肠杆菌HB 101中构建含有smt O-P和mMT1 cDNA的穿梭表达载体pKT-MRE，经质粒转移，链霉素筛选，Southern和Western杂交分析鉴定得稳定的转基因工程藻落。同时，做小批量锌诱导表达，并纯化了外源蛋白，5L培养液含鲜藻重5.0g，得到3.5mg mMT-1；转基因藻在高金属浓度下的耐受性测定表明，外源基因的表达提高了蓝藻对金属离子的抗性，约为野生藻的2倍。

摘要:用0.15%乙烯利诱导烟草幼苗后，提取叶片总RNA，并通过反转录及多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出β-1，3-葡聚糖酶基因的cDNA。将其克隆至载体pBluescript SK后，完成了此基因的全序列分析。测序结果表明：所克隆的cDNA除第1008位碱基与所报道的不同外，其它序列完全一致。为制备抗血清，构建了此基因的大肠杆菌表达载体，并在表达宿主菌BL21(DE3)plysS中得到表达，进行了Western blot分析。同时，还构建了此基因的植物表达载体。

摘要:利用放射免疫分析(RIA)证实了含金鱼生长激素ⅠcDNA的重组病毒在感染细胞96h后所表达的生长激素达到最高水平，平均每105个细胞可分泌金鱼生长激素Ⅰ最高达288.07ng；平均每克干虫可产生金鱼生长激素Ⅰ 925.3μg。从感染重组病毒的无血清细胞培养基中纯化生长激素Ⅰ，平均每毫升培养基可纯化具免疫活性纯度95%以上的金鱼生长激素Ⅰ达664.224ng。纯化后蛋白的N\|末端首20个氨基酸序列测定的结果表明其信号肽得到了准确的切割。从而保障了表达蛋白的生物活性。

摘要:采用PCR方法引入编码氨基酸残基序列为GGGGSGGGGS的接头，将sTNFR1 cDNA与人IgG:Fc cDNA片段连接，构成融合基因fusion 1。将fusion 1克隆在pBSⅡ SK+载体上。测定序列后，转入pRSET-B表达载体，在大肠杆菌中表达，得到分子量 为45kDa的蛋白，超声破碎后电泳证明表达的蛋白为包涵体，经免疫蛋白印迹证实为我们构建的融合蛋白。

摘要:用Pgk12、Pmg36c等质粒电转化不同的乳杆菌。研究了影响转化效率的多种因素。受体细胞经20μg/ml氨苄青霉素处理1h，可以提高转化效率200倍。同时，发现电击后的细胞必需在高渗培养基中才能存活，电击后2～3h的复苏表达期和用亚抑制抗生素浓度选择转化子，这些对电转化成功以及提高转化效率都是十分关键的。在改进电转化方法中，各种参数为电场强度8.75kV/cm，电阻100Ω或200Ω，电容25μF和2×磷酸缓冲液。

摘要:研究了一种新的膨胀床金属亲和层析技术，即将金属亲和层析结合膨胀床层析，直接从淡菜(Blue mussel)匀浆液中纯化纤维素酶。研究了金属亲和配基种类、pH、离子强度及流速对酶吸附和解吸的影响，确定了酶洗脱条件和介质再生条件。一步可纯化纤维素酶194倍，酶收率达82%。本方法不需要预先去除细胞碎片，而且处理速率比传统层析技术高3～4倍。

摘要:应用PCR方法，在t-PA cDNA 5′端引入合适的限制酶位点和酵母分泌信号肽，与酵母表达载体pPIC9重组，构建表达质粒pSTEY，利用LiCl转化法转化酵母菌YS108，在MM和MD平板上筛选表型，PCR筛选t-PA cDNA与酵母染色体整合而形成的阳性克隆，阳性克隆经甲醇诱导表达后，用SDS-PAGE证明表达产物的分子量为6kDa左右，用酪蛋白板溶圈法测定tPA的活性。Mut-s表型菌表达产物活性最高为2 500IU/ml,Western blot证实表达产物具有天然t-PA分子的免疫原性。

摘要:采用激光和微波两种物理因子，对去甲基金霉素生产菌金霉素链霉菌进行诱变处理，选育到一株产量较高的生产菌HL11，发酵效价从2831 u/ml提高到4683 u/ml，提高了65.4%。所选育的菌株经多次传代，遗传性状非常稳定。

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